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《中国协和医科大学》 2006年
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体外构建小口径组织工程化血管的初步实验研究

张燕搏  
【摘要】:第一部分 骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定 目的:分别建立新西兰白兔、Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离、培养、扩增的方法,为构建组织工程化血管提供种子细胞。方法:采用percoll分离液(1.073g·ml~(-1))经密度梯度离心和贴壁法,从骨髓中分离出兔及大鼠BMSCs,经过传代、扩增,进行生物学观察及流式细胞仪鉴定。结果:成功建立BMSCs体外分离、培养、扩增的方法。倒置显微镜下BMSCs呈栅栏状排列。流式细胞仪结果显示,原代大鼠BMSCs表面标志CD90、CD44呈阳性,CD31、CD45呈阴性。结论:所培养的BMSCs为进一步构建组织工程化血管提供了充足的细胞来源。 第二部分 组织工程化血管材料的初选及毒性评价 目的:为构建组织工程化血管选择、合成支架材料,对材料进行体外细胞毒性评价。方法:与清华大学化工系合作,以聚己内酯、聚乙二醇、4,4-二苯基甲烷二异氰酸酯为原料、分别以二月桂酸二丁基锡、辛酸亚锡为催化剂,通过纯粹本体法与溶液法相结合的二步法合成热塑性芳香族聚酯型聚氨酯(PU)。该PU的硬段为4,4-二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI),软段为聚己内酯(PCL)和聚乙二醇(PEG)的共聚物,以扩链剂丁二醇(BDO)进行扩链。采用ISO 10993-1.1997及GB/T 16886.1-1997中规定的四唑盐(MTT)比色法、琼脂覆盖法对本实验组采用的几种支架材料进行了体外细胞毒性评价实验。结果:以辛酸亚锡为催化剂合成的PU在MTT比色法中毒级为1级,琼脂覆盖法中材料周围及脱色区内细胞溶解评价(Z/L值)为1/1。结论:以辛酸亚锡为催化剂合成的PU可用于进一步的实验。MTT法、琼脂覆盖法在评判生物材料毒性方面,是快速、简便、有效的方法。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R318.0

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