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《中国协和医科大学》 2003年
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CD40与其配体CD154(CD40L)的连接对肺癌调节功能的研究及CD40的表达与意义

崔巍  
【摘要】:目的:研究CD40与其配体CD154(CD4OL)的连接对肺癌细胞的调节功能,观察CD40与其配体的连接对肿瘤细胞的生长、增殖、凋亡及免疫表型的作用,评价CD40作为治疗靶抗原的潜能;并进一步系统地研究CD40、Fas,bc12,p53,MHC—Ⅰ,EGFR,PGP,LRP和细胞倍体分析等多个指标在实体肺癌肿瘤细胞上的表达及其与临床特性的关系,旨在寻找对肺癌的诊断、预后判断及评价发生发展的新指标。 方法;①通过流式细胞术筛选CD40阴性细胞系(GLC—82细胞系)。以3D5细胞为模板,以pCDNA3为载体,通过基因克隆技术制备CD40cDNA并转染到GLC—82细胞系,建立CD40高表达的细胞系GLC—82/CD40。收集新鲜的手术实体肺癌组织标本,采用贴块法进行细胞原代培养,建立肺癌细胞系,共2株,即ZK618和FCH712。在7株肺癌细胞系(GLC—82,A549,NCI—H209,CALU—3,ZK618,FCH712和GLC—82/CD40)的培养液中加入0.1μg/ml CD40配体(CD40L,CD154),培养1—5d,通过流式细胞术表型分析法检测CD40L对细胞表型MHC—Ⅰ,Fas,bc12,ICAM—1,EGFR,PGP和LRP调节作用;通过流式细胞术PI染色法分析细胞周期和倍体;通过流式细胞术AnnexinV试验分析细胞凋亡;通过MTT试验分析细胞生长和受抑的变化。②通过流式细胞术表型分析法和PI染色法分析38例肺癌实体组织、25例正常肺组织和5例良性肺占位实体组织标本上CD40、MHC—Ⅰ、EGFR、ICAM—1、PGP、LRP、P53、bc12和细胞倍体的表达及其临床应用的探讨。 结果: ① CD40在7株细胞系上表达各不相同,GLC—82细胞系不表达CD40;NCI—H209细胞系的CD40呈现低表达;A549细胞中度表达CD40;Calu-3、ZK618和FCH712细胞系的CD40呈现高表达;GLC—82细胞转染CD40cDNA后(GLC82/CD40)CD40的表达率高达95.9%。 大多数细胞系的MHC—Ⅰ类分子均呈现高表达,只有NCI—209细胞系的MHC—Ⅰ类分子呈现低表达。EGFR在各种细胞系中均有表达,GLC—82和A549细胞呈
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R734.2

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