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《中国协和医科大学》 2002年
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食管癌相关基因1(ECRG-1)编码蛋白功能的研究

王剑波  
【摘要】:食管癌相关基因1(Esophageal Cancer Related Gene 1,ECRG-1)是我室发现的一个新基因,其开放阅读框长1254bp,编码418个氨基酸。它在正常食管上皮组织中表达,肿瘤组织中缺如。体外及体内实验发现ECRG-1能抑制食管癌细胞株的增殖,提示它可能参与食管癌的发生、发展。论文分四部分,从多方面探讨ECRG-1基因编码蛋白的功能。 第一部分在前期工作的基础上进行,在大肠杆菌中分区段表达ECRG-1基因编码的蛋白并纯化,确定其一般性质、观察其可能的活性。PCR法得到分别编码羧基端378个氨基酸和243个氨基酸的ECRG-1基因片段。将得到的片段分别插入pGEX-4T-1、PET-30a(+)载体,重组体转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的蛋白进一步纯化。结果得到纯度超过90%的重组GST-ECRG-1(243aa)蛋白;重组GST-ECRG-1(378aa)蛋白的纯度不高;表达的重组His-ECRG-1(378aa)蛋白均在包涵体中,未得到可溶形式的蛋白。用合成的丝氨酸蛋白酶底物未检测到重组蛋白GST-ECRG-1(243aa)、GST-ECRG-1(378aa)有明显的丝氨酸蛋白酶活性。 第二部分确定ECRG-1基因编码蛋白在细胞中的定位。亚细胞定位的信息有助于蛋白功能的研究。采用绿色荧光蛋白标记法,将ECRG-1全长基因插入pEGFP-N1、pEGFP-C1分别与其中的GFP编码序列的N端、C端融合。重组体转染肝癌细胞栋Bel-7402、Hek293细胞,荧光分
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R735.1

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