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《中国协和医科大学》 1998年
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人脑表达的新基因GRY-RBP、LDB1和BL1全长cDNA克隆及其鉴定

杜光伟  
【摘要】:神经发育是神经科学研究的重要课题。分子生物学方法的引入加深了对神经发育的认识。但是,目前对神经发育的了解主要是来源于某些模式生物,对人神经发育的分子机制了解尚处于初始阶段。由于这个原因,克隆和鉴定人脑表达基因已经逐渐成为一个研究热点。 为了分离和克隆新的与神经发育相关的基因,本研究在实验室已经分离的EST基础上综合分析数据库信息,特别是模式生物神经发育基因的同源信息及其突变表型,选取了部分EST作为筛选全长cDNA的探针。为了提高筛选cDNA文库的效率,为规模化分离新基因创造条件,我们首先构建了含3×10~6独立克隆的点阵排列的胎儿脑cDNA文库。设计特异于EST的引物,采取PCR和杂交结合的方法筛选点阵cDNA文库。本方法具有快速、高效、特异、成本低的优点。应用本方法通过筛选脑cDNA文库,得到了数个全长cDNA序列,并通过Northern了解了它们在不同组织中的表达。本文介绍了其中的三条全长cDNA,GRY-RBP、LBD1和BL1。另外,对其中的GRY-RBP编码的蛋白进行了的表达、纯化,并通过鉴定它的RNA结合活性对其功能进行了初步研究。现将这对三个新基因cDNA的主要研究结果分别概述如下: GRY-RBP (Glycine,Arginine,Tyrosine-rich RNA Binding Protein),GenBank接受号为AF037448,长2932bp,含一个1869bp的完整开放阅读框,编码623个氨基酸分子量为69.6kD的蛋白质。GRY-RBP与hnRNP R(heterogeous nuclear ribonucleoprotein R,核异质核糖核蛋白R)有很高的同源性(约82%)。GRY-RBP蛋白共有3个RRM基序,羧基末端富含甘氨酸(21.3%)、精氨酸(13.0%)、酪氨酸(12.0%)等氨基酸。利用PCR扩增鼠脑cDNA文库,得到了鼠的同源cDNA Gry-rbp。比较人和鼠GRY-RBP cDNA的核苷酸和及编码的氨基酸序列发现GRY-RBP是一个保守的基因,两者相同的核苷酸和氨基酸分别占全序列的95%和98%。以人GRY—RBP cDNA的3’端2,218bp片段为探针,对人8种成人组织:心、脑、胎盘、肺、肝、肺、骨骼肌、肾、胰的RNA进行了Northern
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1998
【分类号】:Q987;Q78

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