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《中国协和医科大学》 1998年
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重组人干细胞因子(rhSCF)在E.coli中的高效表达及其与重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)融合基因克隆、表达、蛋白纯化及性质的研究

毛华  
【摘要】:造血细胞生长因子是细胞因子中的一个重要组成部分,在血细胞生成调节机制中具有重要意义。主要包括:红细胞生成素(Epo)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、多能性集落刺激因子或白细胞介素3(IL-3)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、干细胞因子(SCF)、血小板生成素(Tpo)等。其中,SCF不同于其他造血生长因子,它是作用于较早期的造血干细胞或原始造血祖细胞,促进这些细胞的存活、增殖和分化。SCF单独使用活性较低,但与其它细胞因子联合使用表现出较强的协同作用,可显著降低这些细胞因子的用量。GM-CSF是造血中期的调节因子。它刺激粒细胞、单核细胞、髓系细胞、红系细胞、骨髓巨核细胞、巨噬细胞以及中性白细胞的克隆形成。利用SCF与其它细胞因子的协同作用的特点,我们设计构建出新型双分子融合蛋白:人SCF-GM-CSF。将功能互补的人SCF与人GM-CSF联合起来,期望获得比这两种造血因子单独使用或联合使用具有更高生物学活性和治疗作用的新型融合蛋白。这是本研究的目的。 本论文主要包括两部分内容: 1.人SCF基因高效表达质粒的构建及其表达产物的分离纯化和鉴定; 2.人SCF-GM-CSF融合基因高效表达质粒的构建及其表达产物的分离纯化和鉴定。 一、人SCF基因高效表达质粒的构建及其表达产物的分离纯化和鉴定。本室已成功地克隆了人SCF cDNA,并构建了表达质粒pBV220-SCF,在E.coli中获得表达,但其表达水平较低。本工作在此工作基础上,通过改造hSCF cDNA的5’端的密码子,在不改变氨基酸的前提下,在翻译起始区采用E.coli
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