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《中国协和医科大学》 2001年
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细菌人工染色体(BAC)介导的人α-珠蛋白基因簇转基因小鼠的研究

冯东晓  
【摘要】:人类珠蛋白基因家族分为α和β两个基因簇。位于第11号染色体短臂上的β-珠蛋白基因簇以5′-ε-Gγ-Aγ-ψβ-δ-β-3′顺序排列;位于第16号染色体短臂上的α-珠蛋白基因簇以5′-ζ-ψζ-ψα2- ψα1-α_2-α_1-θ-3′顺序排列,其中ζ为胚胎型功能基因,α为胎儿型和成年型功能基因。全长约40kb;除α-珠蛋白基因簇中的部分具有多态性的重复序列外,这两个基因簇的DNA序列已基本测定。 珠蛋白基因在个体发育中表现为依次表达,并具有高度的组织特异性和发育阶段特异性,两类珠蛋白基因的终产物间始终维持平衡。珠蛋白基因的转录受多种因素的影响,其中α-珠蛋白基因簇的主要增强子HS-40位于ζ-珠蛋白基因的上游大约40kb的位置,对于簇内各个珠蛋白基因在红系组织细胞中的高表达是必需的。 转基因动物是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组中稳定整合并能遗传给后代的一类动物。利用转基因动物可以在分子水平设计实验,从四维时空观察转基因的整体效应。利用转基因动物技术可以建立人类疾病相关基因的转基因动物模型,以探讨异常基因的表达调控规律。大容量载体技术可以模拟机体天然染色质微环境,克服小片段重组体转基因实验中忽略基因间或调控元件之间相互作用的缺陷,从而研究大片段基因簇的表达调控规律。近年发展起来的建立在大肠杆菌F因子基础上的细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)遗传特性稳定,不易发生缺失和重组:制备和纯化方法简便快速;可直接进行DNA测序分析;载体上的稀有限制性内切酶NotI位点可以方便地线性化BAC DNA并去除载体片段。 本研究利用从人类基因组BAC文库中筛选出的含人α-珠蛋白基因簇的BAC克隆191k2,首先对该克隆进行了末端直接测序和染色体原位荧光杂交(FISH)以排除嵌合体的可能性。大量提取并纯化BAC DNA后,用NotI酶切分离出含完整人α-类珠蛋白基因簇的插入片段,利用Sepharose CL-4B柱凝胶过滤层析快速分离插入DNA片段和载体DNA,选择合适浓度的DNA经显微注射制作转基因小鼠,获得了4个独立的包括完整人α-珠蛋白基因座位的转基因鼠株系。RNase保护实验检测结
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:Q78

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【参考文献】
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【共引文献】
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