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《中国协和医科大学》 2001年
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小鼠头部神经管闭合时期特异表达基因的研究

水波  
【摘要】:脊椎动物胚胎发育过程中,神经胚期是一个重要的发育时期。这个阶段胚胎外胚层增厚形成上皮型神经板,神经板两侧隆起形成神经褶,随后神经褶两侧向背中线合拢并愈合成神经管。神经管闭合是脑和脊髓正常发育的前提,这个发育过程发生异常会导致神经管缺陷(neural tube defect,NTD)。在人类中,NTD仅次于先天性心脏缺陷,是导致围产儿死亡的主要原因之一。 细胞分化、形态发生是基因以不同的组合表达的结果。研究小鼠神经管闭合过程中差异表达的基因有助于阐明正常神经系统发育和NTD发生的分子机理。 1.分离小鼠9天胚胎头部神经管闭合过程中特异表达的基因 mRNA差异显示技术(mRNA differential disolay RT-PCR,DDRT-PCR)是近年来逐渐成熟起来的一种克隆特异性表达基因的有效方法。本文以615小鼠7天全胚以及13、18天胚胎脑部为对照,应用银染mRNA差异显示技术分离9天胚胎头部神经管闭合过程中特异表达的基因。实验选择了优化的引物组合:1)采用两对加长的引物,CGAATTCCGT_(13)C与TCGAATTCCGTACAACGAGG;ACGACTCACT ATAGGGCT_(12)CG与ACAATTTCACACAGGAGACCATTGCA。2)用T_(12)CG进行逆转录,然后采用5种单个的10mer的随机引物进行PCR扩增。结果表明银染mRNA差异显示技术操作过程短、显带清晰,同时目的条带易于从凝胶中回收。 经二次PCR扩增后初步得到9天胚胎头区神经褶特异表达的12个基因片段。分别以生物素标记的4个不同发育时期的cDNA第一链作为探针,经反向Northern杂交确证后得到9天胚胎头区神经褶特异表达的7个基因片段;同时也获得一些在其它3个发育时期特异表达的基因片段。 2.对差异显示获得的片段进行序列分析
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:Q344

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【二级参考文献】
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【相似文献】
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