单克隆抗体及Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联物抗肝癌的实验研究

李军智  

【摘要】：由大鼠杂交瘤分泌的抗人肝癌单克隆抗体(单抗)经氯化汞合木瓜蛋白酶消化(37℃，5h)，经过Markl—Sepharose 4B亲和层析柱纯化得到Fab片段。用ELISA方法检测单抗3A5及Fab片段对人肝癌BEL—7402细胞呈强阳性而与人咽上皮癌细胞(KB)呈弱阳性反应。单抗3A5(IgG_1)、Fab片段、无关单抗Markt(IgG_1)及牛血清白蛋白(BSA)与具有很强杀伤活性的抗癌抗生素C1027用SPDP法偶联。再经Sephadex G—75纯化。偶联物3A5—C1027和Fab—C1027保持与靶细胞的反应性。克隆生成测定对靶细胞(BEL—7402)有很强的杀伤活性，3A5—C1027、Fab—C1027、BSA—C1027、Mark_1—C1027和游离C1027的IC50分别为4.2×10~(-14)M，8.6×10~(-16)M，1.8×10~(-14)M，1.7×10~(-12)M，6.5×10~(-16)M。Fab—C1027对靶细胞(BEL—C1027)与非靶细胞(KB)的IC50相差32倍；3A5—C1027与无关单抗MARK_1—C1027偶联物的IC50相差40倍；Fab—C1027与BSA—C1027的IC50相差21倍，说明单抗3A5及Fab—C1027偶联物对靶细胞呈选择性杀伤作用。Fab—C1027比3A5—C1027的杀伤活性强，IC50相差49倍，BSA—C1027比Mark_1—C1027的杀伤活性强，IC50相差94倍，这可能与大分子与C1027偶联所产生的空间位阻效应有关。 观察~(125)I与~(131)I标记单抗3A5与Fab片段在荷瘤裸鼠体内分布与显像，结果表明。在瘤、心、肝、脾、肺、肾、胃、肌、肠中，每克组织注射剂量百分比单抗3A5高于Fab片段，但肿瘤组织与非肿瘤组织的比值(T／NT)则Fab片段高于单抗3A5。说明虽然完整单抗3A5在瘤组织的绝对浓度高于Fab片段，但是Fab片段分布特异性高于完整单抗3A5。在显像观察中，Fab片段在12小时就可见到肿瘤部位的显像，而3A5在40小时才能看到肿瘤部位的显像，说明Fab片段在早期就分布到肿瘤组织。 将小鼠肝癌H_(22)瘤液(瘤块：生理盐水=1∶3)0.2ml接种于昆明小鼠右后肢肌肉中，在第1、4、7天从尾静脉注射游离C1027和偶联物，剂量为0.1mg／kg。结果3A5—C1027、Fab—C1027和游离C1027的抑瘤率分别为60％、65％和40％，治疗组与对照组相比，P＜0.01。Fab—C1027与游离C1027组相比，P＜0.05，具有显著性差异。在移植人肝癌BEL—C1027裸鼠实验治疗中，将10~7个人肝癌BEL—7402细胞接种于裸鼠腋窝皮下，形成瘤块后，再以直径2mm的瘤块移植在裸鼠右腋窝皮下。第二批实验治疗，在第三天开始给药(瘤重约20mg)．共给药3次，剂量为0.15mg／kg。C1027、3A5—C1027、Fab—C1027的

【关键词】：
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：1992
【分类号】：R735.7
【DOI】：CNKI:CDMD:1.2006.137935
【目录】：

全文下载： CAJ格式
不支持迅雷等加速下载工具，请取消加速工具后下载

CAJViewer7.0阅读器支持所有CNKI文件格式，AdobeReader仅支持PDF格式