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《中国协和医科大学》 1996年
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趾长伸肌和比目鱼肌运动神经元群递/调质的不同配布式样及其树突的发育可塑性研究

石葛明  
【摘要】:本论文通过创建一种新的逆行标认神经元复合免疫细胞化学(ICC)的非荧光双标技术,对降钙素基因相关肽(CGRP)在快肌(EDL)Mn群和慢肌(SOL)Mn群的配布式样及可塑性进行了较详细的研究;并以CB—HRP为探针,对所标认的EDL Mn群和SOL Mn群的树突发育,尤其是对其脊髓白质树突(WMD)的功能解剖学意义进行了探讨,首次发现了雄激素对普通躯体Mn尤其是对EDL Mn的树突发育增长具有明显的促进作用;论文并对蛛网膜下腔注射Bay K8644、Dynophin A(1—17)(Dyn)后引起EDL、SOL Mn树突损伤的不同易感性进行了探讨。 全文共分三个方面,10个部分进行了实验研究 一.霍乱毒素B亚单位结合胶体金(CB—Au)的逆行轴浆转运及其在实验神经解剖学研究中的应用: 1.CB—Au作为逆行示踪剂的研究:本实验通过制备三种不同直径的胶体金颗粒(5nm,10nm,15nm),在与霍乱毒素B亚单位(CB)偶联后(即CB—Au),注射于大鼠神经系统的不同部位,观察CB—Au作为逆行示踪剂的可行性,神经元通常不能摄取单纯的胶体金,但在与CB偶联后,由于神经轴膜上GM_1受体与配基CB的结合,通过受体介导内吞作用,胶体金即可被神经末稍摄取并逆行转运入胞体,以银加强方法可显示被转运的胶体金颗粒,光镜下呈黑色致密的颗粒,该方法优点在于标记颗粒的背景无色;注射靶位扩散范围小,定位准确;显色方法简单不受固定液成分和浓度的影响;胶体金在神经元内贮留时间长(至少可达35天);显色后的标记物不褪色并可复染;对三种直径的CB—Au转运的研究表明5nm和10nm的CB—Au最适用于周围神经系统的示踪标认,而5、10和15nm CB—Au均可用于中枢神经系统的神经元示踪标认,电镜下,摄取后的CB—Au主要滞留于溶酶体内,而与CB—HRP在神经元内的转运行为不同,提示CB—Au进入胞体后即已分离,银加强只显示分离的Au。 2.CB—Au特定标认神经元复合ICC——一种新的非荧光双标方法的建立 特定递质的标认神经元群是否具有递/调质不同配布式样,应用传统的荧光或酶标配基复合ICC双标方法较难确认这一问题,银加强过程简易,经处理的CB—Au逆行标认神经元背景无色,这些均很有利于复合ICC,这种非荧光双标技术的实验结果显示出的双标记产物,一种呈黑色颗粒(CB—Au),一种为黄棕色均匀一致的斑块状(ICC DAB产物)二者反差大,易于识别,所有CB—Au标记神经元的ICC性质都可清晰确定,绝无酶标示踪剂完全覆盖神经元以致无法判断是否为双标性质的情形,标本可反复观察,反应产物不褪色,并可进行复染了解与其它神经元之间的关系。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1996
【分类号】:Q954.6

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