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软坚散结抗肝癌作用机理的实验研究

张宏印  
【摘要】:本文运用以药探理的研究方式,对软坚散结抗肝癌的作用机理进行了实验研究。 一、首先根据中医药理论,结合临床研究成果,组成软坚散结方药(RJSJ-PM,含鳖甲,山慈菇,玄参,半枝莲,莪术等,采用对药性影响较小的水提醇沉制剂工艺,提取物占生药重量的6%。亚急性毒性实验证明RJSJ-PM对昆明小鼠无明显毒副作用,灌胃给药的最大耐受量为30g/kg,腹腔注射的最大耐受量为8g/kg。 二、实验证明软坚散结有一定抑制肝癌细胞生长的作用,①体外抑制人肝癌BEL-7402细胞克隆形成的ED_(50)为38.5ug/mL,活细胞计数的结果ED_(50)为54ug/ml。体外实验还发现RJSJ-PM(<75ug/ml)与5-Fu(<5uM/L)联合应用时,CDI≤0.85(P<0.05),呈现良好的协同效应。②体内对小鼠HepA实体瘤的抑制率,不同剂量分别为16.6%(1.8g/kg.d)(P>0.05),32.0%(3.6g/kg.d(P<0.05),和49.8%(7.2g/kg.d)(P<0.01)。有明显延长荷瘤小鼠存活期的作用,在实体瘤(HepA)平均T/C值分别为1.09(1.8g/kg.d)和1.35(3.6g/kg.d)(P<0.05)和1.59(7.2g/kg.d)(P<0.01),对小鼠HepA腹水癌,平均T/C值分别为1.10(3.6g/kg.d)(P>0.05),和1.35(7.2g/kg.d) (P<0.05)。 三、对软坚散结抗肝癌作用机理的研究 1.在抑制肝癌细胞生长方面:①普通病理及超微结构观察揭示,RJSJ-PM(7.2g/kg.d)组肿瘤细胞(HepA)靠近炎性反应带处,泡沫细胞较多,很多细胞表面出现丘形隆起,隆起无破裂,表面无微绒毛,胞膜完整,胞浆内细胞器如内质网、线粒体等明显扩张、空泡化,自噬泡及残留体等增多,染色质浓缩、断裂、贴向核膜,提示有走向程序死亡的特征。②流式细胞术对腹水癌(HepA)细胞周期分析表明,RJSJ-PM(7.2g/kg.d)组在给药第8天S期细胞增加35.7%(P<0.01),G_2M期细胞减少25.1%(P<0.01),DNA含量下降12.1%(P<0.01),给药的第12天,S期细胞增加63.6%(P<0.01),G_2M期细胞减少15.8%(P<0.01),G_1期细胞减少15.9%(P<0.05),DNA含量下降12.7%(P<0.01)。③放射性同位素标记物参入研究表明,RJSJ-PM(7.2g/kg.d)对腹水癌(HepA)细胞DNA、RNA、蛋白质合成代谢中[~3H]标记


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