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《中国协和医科大学》 1995年
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GST-π基因表达及其调控的研究

朱明  
【摘要】:GST-π是谷胱甘肽-S-转移酶超基因家族中的成员之一,与肿瘤发生、发展及多药耐药等关系密切。在癌前病变及肿瘤组织中表达明显增高。但对其表达调控的分子机制还所知甚少。我们应用人肺癌变启动模型,探讨OST-π基因表达的转录与转录后调控机制,并就蛋白激酶C(PKC)对GST-π表达的调节作用以及GST-π与细胞凋亡、细胞增殖的关系进行初步探讨和分析。 1,用致癌素(CSC、DEN、MNU)短期处理人胚肺组织,提取DNA转染Rat-1细胞,使其发生转化。以ELISA和Northern Blot等方法检测发现,转化细胞GSTs酶活性,GST-π,GST-π mRNA表达水平均明显高于对照组细胞(P<0.05)。人肺癌变启动过程中,GST-π表达升高可能参与启动细胞“抗性表型”的组成,使其易于获得克隆性优势生长的能力。mRNA稳定性分析及进行中的核转录分析(Run-on assay)结果表明,转化细胞GST-π mRNA稳定性明显高于对照组细胞,而GST-π mRNA转录活性未见明显差异。转录后调控可能是转化细胞GST-π mRNA表达增高的主要机制。 2,分别用蛋白激酶C激活剂TPA和抑制剂H_7处理GST活性不同的各种细胞系,发现TPA在一定范围内可上调GSTs活性、GST-π蛋白和GST-π mRNA表达水平,而H_7具下调作用。PKC分三大组近十余种亚类,每类又表现出独特的生物学作用,为进一步明确说明问题,我们构建了PKCα cDNA逆转录病毒表达载体,并以Lipofactin介导的方法将其转入GLC细胞,经G_(418)筛选获得阳性细胞克隆。发现转染与未转染细胞形态学无明显差异。反义PKCα转染细胞生长缓慢,生存能力下降。正义PKCα转染细胞,其GSTs、GST-π蛋白含量均有不同程度的上升。PKC是信号传导途径中的关键环节,发挥着广泛的生物学效应。PKC对GST的表达调节可能通过两种机制:一是对GST蛋白的直接
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1995
【分类号】:R346

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【参考文献】
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【共引文献】
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