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《中国协和医科大学》 1995年
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抗TNF McAb的研制及初步应用

郭小清  
【摘要】:肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)是1975年由Carswell等发现的一种具有抗肿瘤作用的细胞因子。随着研究的不断深入,对其本质有了充分的认识:该多肽细胞因子具有广泛的生物学活性,低水平时,参与机体的免疫防御;高水平时,会给机体造成严重损害。国外早在1985年就生产出了rhTNF,并于1989年应用到Ⅱ期临床试验,但由于rhTNF对肿瘤的治疗效果并不象人们所期望的那样,而且大剂量使用会引起许多毒副作用,故人们的注意力从将TNF用于肿瘤的治疗转移到如何降低某些疾病患者体内高水平的TNF。抗—TNF单克隆抗体就是用于达到此目的的一种TNF拮抗剂。 本研究旨在研制出针对rhTNF的单克隆抗体,利用该McAb建立ELISA检测法,并进行一些初步应用。 本研究采用Davis等创建的方法,在甲基纤维素半固体培养基上进行融合细胞的克隆化。主要步骤是:在常规免疫和细胞融合后,细胞接种在含甲基纤维素、IMDM和HAT等的半固体培养基上,5—7天后肉眼可见培养基中长出许多由杂交细胞形成的集落。将这些集落挑到含有DMEM、15%FCS和HAT的液体培养基内再培养,得到1824株克隆,经RIA筛选得到15株阳性克隆,对其中的5株进一步研究发现,它们的染色体众数均在96—105之间,均分泌IgG1类抗体,测得的亲和力分别为1.25×10~8l/mol,1.12×10~8l/mol,2.34×10~8l/mol,8.55×10~7l/mol,1.04×10~8l/mol。 接着进行抗体的配对试验,根据双抗夹心的原理建立ELISA检测法,该法具有较高的灵敏度,可测到10pg/ml的TNF水平,与G-CSF、GM-CSF两种细胞因子的交叉均<0.01%。 最后将所制得的McAb和ELISA检测法进行初步应用。首先比较了用McAb治疗与否的细菌感染小鼠在24小时后的存活率,治疗组明显优于细菌组,经检测治疗组小鼠血中的TNF水平也低于细菌组,不同组小鼠的病理结果也显示出:虽然细菌组与治疗组有大致相同的病理改变,但程度不同,前者稍重;测定了正常人的
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1995
【分类号】:R446.6

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 张彩霞;雪卡毒素单克隆抗体的制备及鉴定[D];广东工业大学;2011年
【参考文献】
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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【二级引证文献】
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【二级参考文献】
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【相似文献】
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6 王晓杜;猪干扰素α、β、γ基因克隆、原核表达及其单克隆抗体制备的研究[D];华中农业大学;2007年
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