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《中国协和医科大学》 1995年
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编码一个新的人活化B淋巴细胞分化抗原5C5的部分cDNA克隆及核苷酸序列的测定

石伟  
【摘要】:白细胞分化抗原(CD)是人血细胞上一组抗原决定簇,是当代生命科学研究的前沿领域之一。自1982年以来,已召开了五届人类白细胞分化抗原国际会议,并已命名了130多个CD。在这些CD中,特异地表达于B细胞的不多,其中仅表达于活化B细胞者尤少。我们曾经报道了表达于人活化B细胞的分化抗原5C5。 为了确认5C5抗原是否是一个新的分化抗原,及进一步研究它的结构和功能,我们用本实验室制备的单克隆抗体5C5制备亲和层析柱,从本实验室建立的人活化B细胞株3D5细胞的膜蛋白质中分离、纯化到相应的分化抗原5C5,并用该抗原免疫小鼠,经多次克隆,筛选到一个杂交瘤细胞株5C5-G1。它所分泌的单抗与单抗5C5识别同一分化抗原。Westernblot印迹分析显示,该分化抗原在SDS-PAGE(还原条件下)中有五条带,分子量分别为92KD、52KD(二条)、40KD和20KD。免疫沉淀显示92KD和52KD两条带。流式细胞仪分析表明,单抗5C5-G1和单抗5C5识别的分化抗原表达于相同的细胞,即人活化B细胞和人活化B细胞株3D5(强阳性)、和Daudi(弱阳性),而在静止B细胞、活化T及静止T细胞、单核细胞、以及T细胞株CEM、Jurkat和Peer没有表达,在K562细胞上也没有表达,在U937细胞上仅有极弱的表达。 用单抗5C5-G1和单抗5C5的混合物分别从人扁桃体细胞λgt11cDNA文库和3D5细胞λgt11 cDNA文库中筛选到3个和7个阳性克隆。把从扁桃体细胞cDNA库所得阳性克隆的cDNA插入到质粒pUC18中,用双链双脱氧测序法完成了核苷酸序列分析,其中一个长613bp,另外二个长467bp,后者与前者的前467bp完全重叠。613bp cDNA中有一个开放阅读框架,从103bp到429bp,共327bp。Northern blot分析显示,此613bp cDNA与人扁桃体和3D5细胞的RNA在2.0Kb
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1995
【分类号】:R392

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