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《中国协和医科大学》 1996年
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人食管癌中缺失基因片段的分离和鉴定

侯萍  
【摘要】:食管癌(Esophageal Cancer,EC)是一种常见的恶性肿瘤。近15年来,我室及国外许多实验室对食管癌的细胞遗传学和分子遗传学改变做了大量的研究,表明食管癌涉及数条染色体的畸变,在某些染色体的特定区域内存在较高频率的杂合性缺失(LOH)和微卫星序列不稳定(MIN),提示在这些区域内存在抑癌基因。 代表性差异分析(RDA)是一种新的基因克隆技术,通过正常基因组与突变基因组DNA之间的比较直接分离出存在差别的基因片段,与国际上通用的连锁分析一定位克隆技术相比,不需对众多的疾病大家系进行连锁分析以确定基因的位置和功能,因此具有简便、快速、敏感、经济等优点,但是RDA策略的实验步骤繁琐,同时采用核酸酶富集和分离缺失的基因片段,可能导致许多遗传信息的损失。 我们依据RDA的原理,改进和简化了实验程序,建立了简化的基因组消减杂交技术。以正常胎盘DNA为检测DNA,食管癌细胞系(EC8712和EC8733)DNA为驱赶DNA,通过三轮消减杂交、PCR富集和Southern杂交验证,获得7个食管癌细胞系中特异缺失的基因片段,命名为12H1、12H2、33H3、33H4、12B1、3382和3383。克隆测序后发现12H1为512bp,12H2为428bp,33H3为509bp,33H4为355bp,12B1约为680bp(部分测序),3382为519bp,3383为425bp,同源性比较发现12H1与33H3高度同源(94.9%)且与定位于4p的人基因组DNA中一段串联重复的新序列98%同源。33H4与定位于17号染色体上α卫星序列87%同源。12B1与人LI家族中具有转座作用且带有开放阅读框的成员90%同源。12H2、3382和3383无同源序列,可能来自新的未知基因。分别
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1996
【分类号】:Q78;R735.1

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