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《中国协和医科大学》 2000年
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细胞角蛋白的单克隆抗体制备及其免疫分析方法的建立和初步应用

刘冉  
【摘要】:近几年,细胞角蛋白重新成为人们研究的热点,它与细胞生命活动和生物行为改变的关系日益受到关注,这一细胞骨架成分在肿瘤的诊断、疗效监测中应用越来越广。本论文研究了其单克隆抗体的制备,建立了针对这一细胞成分的免疫分析方法,并将其初步应用于临床诊断。 提取纯化人结肠癌细胞株HT—29细胞角蛋白成分(命名为TP21),以此为免疫原,经过细胞融合、亚克隆筛选和ProteinG亲和层析纯化最终得到四株单克隆抗体:1—6、H13、H16、CY19。四株抗体纯度大于95%(SDSPAGE):1—6、H13、H16为IgG1,CY19为IgG2a:H16、CY19对TP21的亲和常数分别为1.21×10~8L/mol和1.36×10~8L/mol,H13与1—6的亲和常数亦在10~7L/mol数量级:免疫组化中,1—6特异性识别肌源性组织,H13、H16、CY19识别上皮组织抗原,H16与CY19表现出相似的免疫组化染色特征。 使用棋盘实验筛选出能够形成双位点夹心的一对抗体,探讨两者形成免疫分析方法的具体条件,如反应介质,反应方式、反应温度和时间等,建立免疫放射分析(IRMA)与免疫化学发光量度分析(ICMA)方法,并将前者应用于肺癌的诊断。实验结果表明,所建立的IRMA、ICMA剂量反应曲线良好,灵敏度分别为1.2ng/ml和0.045ng/ml:工作范围分别为3.6ng/m1-1000ng/ml和0.12ng/ml-1200ng/ml;平均回收率分别为103.7%和98.8%:IRMA的批内和批间变异分别为4.99%、9.8%;ICMA的批内、批间变异分别为5.0%、7.9%;使用IRMA测定了80例正常人和150例肺癌患者,其平均值分别为9.05±6.014ng/ml、33.81±22.004ng/ml;如以21ng/ml为阳性界值,则对肺癌(n=150)、肺鳞癌(n=62)、肺腺癌(n=76)、小细胞肺癌(n=12)的检测灵敏度分别为:62.7%、59.7%、68.4%、41.7%,特异性为96.3%:ICMA与IRMA相关性良好(r=0.9891)。 研究结果表明:ICMA有IRMA无法比拟的优点,具有良好的应用前景,建立的针对细胞角蛋白的免疫分析方法在肺癌诊断中有重要的应用价值。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:R730.4

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【参考文献】
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1 夏冬根,侯永健;血清CEA、NSE、CYFRA21-1联合检测对肺癌诊断价值的探讨[J];实用医学杂志;1999年02期
2 叶群瑞,陈伯权,吴美英;一种简单、快速、量大的辛酸纯化单克隆抗体法[J];生物化学与生物物理进展;1991年01期
3 陶义训;免疫测定进展[J];上海免疫学杂志;1999年02期
【共引文献】
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1 裘丽姝,张永红,李浩,薛海筹;两种ELISA方法检测日本血吸虫病循环抗原的比较[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2000年04期
2 刘熙;两种加工工艺对鹌鹑肉食品嫩度影响的比较研究[J];食品科学;1993年04期
3 朱永平,余应年,陈星若;N—亚硝基化合物致癌活性和物理化学行为相关性的研究[J];癌变畸变突变;1996年05期
4 胡晓苗;李春芬;汪丽;赵磊;;高免卵黄抗体提纯及提取液冻干的研究[J];安徽农业科学;2006年10期
5 张小飞,陈毓川,刘庆年,姚淮平,解启发,胡晓苗;斑点免疫金渗滤法检测鸭肝炎病毒的研究[J];安徽农业科学;1997年04期
6 吴亦伦!230061合肥,苏诚钦!230061合肥;轮状病毒快速ELISA诊断方法的研究和应用[J];安徽医学;1998年02期
7 戎铁华,林鹏,张昌卿,肖锡宾,刘长征,何军芳,梁昌盛,叶燕丽,刘乐和;食管癌转移淋巴结放免显像定位的研究[J];癌症;2000年09期
8 郑大利,彭碧文,黄清玲,林建银;肝癌细胞67kDa层粘连蛋白受体的表达[J];癌症;2003年03期
9 邓瑞春,张明伟,白云秀,汪劲松,黄英,毛宁;基因工程半成品中大肠杆菌蛋白残余量测定方法研究—双抗体夹心ELISA法[J];氨基酸和生物资源;1998年04期
10 汪求真,修翠珍,王忠东;青岛市流行性出血热发病的季节性规律[J];青岛大学医学院学报;2005年01期
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1 容蓉;吕青涛;巢剑非;杨勇;;山东不同产地丹参的HPLC化学模式识别研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
2 张加力;刘义波;;抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体的制备[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
3 谭梦晖;庞惠芳;黄莉;金若敏;;逍遥片抗乳腺增生作用的实验研究[A];全国中医药创新与发展研讨会专辑[C];2005年
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5 穆畅道;利用铬革渣研制皮革复鞣剂和涂饰剂[D];四川大学;2001年
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7 刘志诚;Bt水稻对稻田节肢动物群落和优势天敌的生态风险评价[D];浙江大学;2002年
8 邓瑞春;驱虫班鸠菊防治白癜风分子机理的实验研究[D];北京中医药大学;2002年
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10 陆东庆;王晓鸿;李振华;高兴华;易先平;;C-erbB-2和细胞角蛋白在Paget病中的表达及其意义[J];中山大学学报(医学科学版);2005年S1期
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1 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年
2 李安民;;单克隆抗体标载的~(131)I治疗恶性脑胶质瘤Ⅱ期临床试验的三种给药途径的研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
3 于翠;施曼铃;王桂珍;吴建祥;周雪平;;几种重要植物病毒单克隆抗体的制备和快速检测方法的建立[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
4 刘振勇;邓国华;李呈军;张立春;田国彬;何后军;于康震;陈化兰;;抗禽流感H9N2亚型血凝素特异性单克隆抗体的制备与分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
5 李振宇;赵益明;董宁征;沈飞;阮长耿;;抗FⅧ-C2区单克隆抗体的制备及鉴定[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
6 张改连;黄烽;;抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体rituximab治疗类风湿关节炎的临床研究[A];第十二届全国风湿病学学术会议论文集[C];2007年
7 郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣;;抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
8 陶薇;杨连华;何卓晶;洪艳;陈勇;;抗戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定[A];浙江省医学会医学微生物与免疫学及医学病毒学学术年会论文汇编[C];2009年
9 马翠卿;郭奕阳;顾海燕;曾瑞红;杨丽娟;魏林;;一株抗A族链球菌表面蛋白Fba的单克隆抗体对应的表位与Fba结合调节蛋白FH的位点重叠[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
10 杨天兵;沈倍奋;;抗人重组白细胞介素1(rHIL-1)单克隆抗体的研制[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
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1 贾超时李德成;单克隆抗体产业研发项目将落户大庆[N];大庆日报;2008年
2 小许;市领导会见美国生物医药巨头[N];无锡日报;2010年
3 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年
4 本报特约撰稿人 李朝;单抗:生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年
5 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年
6 记者 杨俊坚;单抗药物:站在同一起跑线[N];医药经济报;2011年
7 张蕾;治疗用单克隆抗体[N];光明日报;2002年
8 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年
9 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年
10 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年
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1 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年
2 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年
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7 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
8 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年
9 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
10 王晓洁;对虾白斑症病毒快速检测试剂盒的研制及其应用[D];中国海洋大学;2005年
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3 李铁民;抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验研究[D];中国医科大学;2003年
4 李晓龙;肝癌相关抗原SMP30 mRNA在癌细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2010年
5 郑杰;分泌抗猪流感病毒(河南株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备、鉴定和初步应用[D];河南农业大学;2004年
6 邵炜慧;盐酸克伦特罗单克隆抗体的研制及初步应用[D];扬州大学;2005年
7 杨宁;纳豆激酶的纯化及其单克隆抗体的制备鉴定[D];山西农业大学;2005年
8 唐琦;抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体的制备及特性分析[D];暨南大学;2005年
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