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《中国协和医科大学》 1999年
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报告基因(lux,GFP)载体的构建和在肿瘤细胞及组织中表达的研究

茆灿泉  
【摘要】:肿瘤(Tumor,Neoplasm)是一种严重危害人类生命的疾病,肿瘤的靶向特异性和专一性定位是肿瘤诊断和生物(基因)治疗的关键,利用报告基因和组织及细胞专一性启动子(增强子)是研究和解决肿癌的靶向特异性和专一性定位的有效方法之一。在现有的报告基因中,细菌生物发光系统(lux)与绿色荧光蛋白(GFP)因其对细胞无伤害和检测方便而成为二种具有潜在前景的新型生物发光报告基因,至今尚未见lux基因在人肿瘤细胞和组织中表达的报道,更未见利用哺乳动物表达载体pcDNA_3使lux及GFP基因在AFP和HBV启动子调控下在人肿瘤细胞和组织中表达的报道。为了探索lux系统作为报告基因在不同肿瘤细胞中表达的可行性,比较原核融合(luxAB)与真核(GFP)报告基因系统在肿瘤细胞及组织中表达和应用的特性,以及研究细胞专一性启动子(增强子)(AFP及HBV)调控下luxAB及GFP报告基因在肿瘤细胞和组织中的特异性表达的可能性,为报告基因,尤其原核发光报告基因lux在肿瘤转移、诊断及靶基因治疗的分子生物学研究中的应用提供基础,本研究利用基于PCR的位点突变和基因工程技术,成功地构建了含有细菌荧光酶融合AB及GFP报告基因的哺乳动物表达载体,经脂质体转染使其在不同肿瘤细胞中稳定表达;然后构建系列由AFP或HBV调控的luxAB及GFP的报告基因表达载体,使其在不同肿瘤细胞中稳定和或专一性表
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1999
【分类号】:R73-3

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