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《中国协和医科大学》 1999年
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大鼠精子发生阶段特异表达基因的分离和表达

刘辉贤  
【摘要】:精子发生是一系列基因严格按照时空顺序相继转录表达的过程。寻找和研究不同时期、不同发育阶段的差异表达基因,将有助于最终阐明精子发生的机理。由于大鼠生精细胞在曲细精管内的排列极为有序,本研究采用曲细精管分段分离结合差异显示PCR(DDRT-PCR)的方法,寻找精子发生中差异表达的基因。 在解剖显微镜下根据折光度不同将曲细精管分出Ⅱ~Ⅵ期和Ⅶ~Ⅷ期两段,Ⅱ~Ⅵ期中包含精原细胞分裂产生A、B两型精原细胞、变形期初级精母细胞向粗线期精母细胞的转化和2~6级以及15~18级精细胞,Ⅶ~Ⅷ期中包含A型精原细胞、休止型精母细胞、粗线期精母细胞、7~8级和19级精细胞以及成熟精子的释放,Ⅶ~Ⅷ期中不含细胞分裂。提取两段的组织总RNA并反转录成cDNA,以3个Oligo-dT_(12)N(N为A、C、G)单锚定引物分别与上游8个随机引物进行24种配对组合,共48个扩增反应,经聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影后选出112个差异cDNA条带,再经反向Northern斑点杂交验证,有76个cDNA条带代表的基因在不同区段中存在差异转录,其中17个差异达10倍以上。对36个有差异的cDNA条带进行克隆测序,得到22个彼GenBank接收的新的Expression Sequence Tags(ESTs),其中来自Ⅱ~Ⅵ期的有14个(AF094604、AF094605、AF094606、AF094607、AF095318、AF095320、AF095321、AF095322、AF095324、AF095325、AF096087、AF096088、AF096089、AF134584、),来自Ⅶ~Ⅷ期的有8个(AF095319、AF095323、AF096090、AF133655、AF133656、AF133287、AF133288、AF133289)。 在此基础上,选择6个ESTs作为混合探针筛选大鼠睾丸cDNA文库,得到一新的全长2183bp、编码526个氨基酸的cDNA序列(GenBank接收号为AF094609),命名为R337,其编码蛋白的预测分子量为60000,等电点为4.0,经蛋白数据库分析发现其氨基酸序列存在一个P34cdc2的磷酸化位点、一个蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点、多个蛋白激酶C(PKC)和酪蛋白激酶Ⅱ(CK-Ⅱ)的磷酸化位点以及多个DNA结合Motif。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:1999
【分类号】:Q344

【参考文献】
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1 魏曙光,缪时英,张梅林,王琳芳,宗书东;一种与Calpastatin具有部分同源结构的人精子膜蛋白的发现与研究[J];生物化学杂志;1994年02期
【共引文献】
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1 宋春风,吕佩源,孙大业;钙调素结合蛋白定位研究进展[J];解剖科学进展;2000年01期
2 王春梅,吴燕婉,李伟雄;哺乳动物精子发生过程中阶段特异性基因表达[J];生殖医学杂志;1999年04期
3 蒋宗良;张明;付强;;小鼠性腺特异表达基因GSE的表达特征研究[J];西南农业学报;2009年04期
4 鲁爽;程露阳;汪卓群;李欣;石心泉;贾孟春;马旭;;质谱法分析大鼠精子发生过程中组蛋白H1变异体的多样性[J];中国实验动物学报;2009年05期
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1 李彦锋;重组鼠精子抗原疫苗株的构建及其避孕效应研究[D];第三军医大学;2001年
2 张明;哺乳动物性别控制相关问题的研究[D];广西大学;2002年
3 王航;人特异精子膜蛋白hSMP-1基因结构研究[D];中国协和医科大学;1997年
4 朱海东;一种新的睾丸组织特异性核孔蛋白cDNA BS-63的克隆、特性分析及表达[D];中国协和医科大学;1997年
5 于同德;编码人精子膜蛋白YWK-Ⅱ基因的研究[D];中国协和医科大学;1995年
6 徐健;小鼠睾丸生殖细胞凋亡及相关基因调控的研究[D];中国协和医科大学;1999年
7 顾爱华;XRCC1、XPD和TERT基因与无精子症的相关性研究及机制探讨[D];南京医科大学;2007年
8 陆阳清;水牛性别控制相关问题的研究[D];广西大学;2008年
9 鲁爽;精子发生过程中组蛋白H2A.H2B编码及功能研究[D];中国协和医科大学;2009年
10 刘美玲;睾丸特异表达基因LM23的性质和功能研究[D];中国协和医科大学;2010年
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1 郭睿;崔慧琳;常冰梅;张悦红;解军;;小鼠曲细精管内生精细胞的分离(英文)[J];山西医科大学学报;2006年06期
2 孟雅楠;孟丽军;宋亚娟;刘美玲;张秀军;;小RNA分子与精子发生调控[J];遗传;2011年01期
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4 王春梅!100081北京,吴燕婉!100081北京,李伟雄!100081北京;哺乳动物精子发生过程中阶段特异性基因表达[J];生殖医学杂志;1999年04期
5 施延寿;黑条小车蝗Oedaleus decorus(Gevm)精母细胞减数分裂观察研究[J];石河子大学学报(自然科学版);1986年02期
6 白汝岚;孙燕;袁小丽;张家骅;;MPF与MAPK在生殖细胞减数分裂中相互作用研究进展[J];动物医学进展;2007年02期
7 石玉强;;哺乳动物精子发生及其基因表达调控[J];潍坊学院学报;2009年04期
8 余振东;桂耀庭;唐爱发;蔡志明;;精子发生基因表达的调控研究进展[J];中国实验诊断学;2006年01期
9 汪斌;刘志宇;苗龙;;秀丽线虫精子发生和精子受精的研究进展[J];遗传;2008年06期
10 李树春;崔箭;徐斯凡;缪时英;王琳芳;;生精细胞和生精细胞移植[J];生命的化学;2009年02期
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2 张岩;罗奋华;吴应积;;大鼠曲细精管生殖细胞共培养和精子发生过程的观察[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
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8 曹兴午;张圣强;姚怀国;;精子形态、生精细胞检查与睾丸生殖障碍的基础及临床[A];首届全国生殖医学论坛暨生殖相关疾病诊疗技术学术研讨会论文集[C];2007年
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1 田红 记者 胥茜;论文无创新 一票能否决[N];中国教育报;2005年
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3 记者 欧阳春艳;全国百篇优秀博士学位论文评选揭晓[N];长江日报;2005年
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1 刘辉贤;大鼠精子发生阶段特异表达基因的分离和表达[D];中国协和医科大学;1999年
2 崔光辉;棉酚与甾体激素联合用药对大鼠生精细胞凋亡相关基因表达及生精干细胞功能的影响[D];中国协和医科大学;2004年
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4 徐健;小鼠睾丸生殖细胞凋亡及相关基因调控的研究[D];中国协和医科大学;1999年
5 孙燕;FSH对仔猪睾丸支持细胞GDNF表达调节的研究[D];西南大学;2006年
6 杨春波;大鼠DnaJ样蛋白rDJL的功能研究[D];中国协和医科大学;2005年
7 霍然;人睾丸蛋白质表达谱的构建及精子发生相关蛋白质组学研究[D];南京医科大学;2006年
8 朱叶飞;加热致小鼠睾丸生精障碍相关蛋白质及其功能的研究[D];南京医科大学;2006年
9 杨居祥;大鼠精子发生中阶段差异表达基因的分离、表达及初步功能研究[D];中国协和医科大学;2000年
10 俞作仁;小鼠精子发生不同阶段生精细胞基因表达谱的研究[D];中国协和医科大学;2003年
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1 袁娲;NORPEG基因不同转录本在人睾丸中的表达研究[D];南京医科大学;2005年
2 白汝岚;MPF对精母细胞减数分裂调控作用的研究[D];西南大学;2008年
3 杨立;“生精宝”对小鼠少精子症模型的作用及机理探讨[D];昆明医学院;2008年
4 江健;热休克蛋白在食蟹猴出生后睾丸发育过程中的表达研究[D];广西医科大学;2007年
5 白音巴图;绵羊雄性生殖细胞体外共培养体系的初步建立及对各级生殖细胞的鉴定[D];内蒙古大学;2009年
6 顾爱华;人睾丸特异转录本基因(PRC-T)的克隆和研究[D];南京医科大学;2004年
7 余周;细胞凋亡抑制因子survivin在精子发生过程中的作用研究[D];重庆医科大学;2007年
8 杨西平;热激导致小鼠生精细胞中MPF变化的动态过程[D];山东大学;2006年
9 柳强;奶牛X-,Y-精子抑制消减文库的构建[D];内蒙古农业大学;2009年
10 林明辉;稳定高效表达重组小鼠干细胞因子1的15P-1细胞克隆的建立[D];佳木斯大学;2007年
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