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《中国协和医科大学》 2005年
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皮肤分支杆菌感染一式多元化快速分子诊断方法的研究及其在临床中的应用

王洪生  
【摘要】:随着艾滋病和其他免疫缺陷患者的增多,分支杆菌感染的发病率也逐渐上升。分支杆菌既可以引起系统性感染,也可以引起皮肤感染。皮肤分支杆菌感染的临床表现和组织病理都缺乏特异性,诊断主要依靠检测到分支杆菌。本实验室已经针对常见的几种可以引起皮肤感染的分支杆菌,初步建立了应用PCR检测和鉴定这几种分支杆菌感染的方法。在此基础上,本次课题对PCR直接用于临床皮肤分支杆菌感染的检测之问题进行探讨,研究其关键点---解决临床标本的前处理这一难点问题;同时,对PCR检测和鉴定皮肤分支杆菌感染的方法进行评价,并与培养的方法做比较;完善和补充皮肤分支杆菌感染一式多元化快速诊断方法;并将传统方法和新近构建的分子生物学方法相结合检测临床皮肤分支杆菌感染标本。 第一章:对PCR直接用于临床皮肤分支杆菌感染的检测之问题进行探讨,解决混有皮肤组织的标本使PCR敏感性降低的问题。我们采用向组织匀浆中加入菌悬液的方法来模拟临床皮肤感染标本,结果表明PCR检测的敏感性比纯菌悬液时PCR检测的敏感性降低了100倍;模拟临床感染标本经水洗和高速离心后PCR检测的敏感性为1×10~3个菌细胞/mL,比对纯菌悬液进行PCR检测的敏感性降低了10倍,比模拟临床皮肤分支杆菌感染标本不经任何处理的PCR检测的敏感陛提高了10倍;对模拟临床标本用SDS和高速离心法处理后检测PCR敏感性,结果发现PCR敏感性比对纯菌悬液进行PCR检测的敏感性降低了1000倍,比模拟临床皮肤分支杆菌感染标本不经任何处理的PCR检测的敏感性还降低了10倍;我们用含蛋白酶K的消化液加高速离心法处理模拟临床皮肤分支杆菌感染标本,结果发现PCR检测的敏感性比对纯菌悬液进行PCR检测的敏感性降低了1-10倍,比模拟临床皮肤分支杆菌感染标本不经任何处理的PCR检测的敏感性提高了10~100倍;证实了水洗和高速离心法、蛋白酶K的消化液加高速离心法可提高模拟临床皮肤分支杆菌感染标本PCR检测的敏感性,减少组织抑制物的干扰。 第二章:对PCR检测和鉴定皮肤分支杆菌感染的方法从三个层面进行评价,并与培养的方法做比较。1、分支杆菌纯菌悬液的PCR检测方法及培养方法比较。结果表明PCR方法和培养方法敏感性皆为1×10~2个菌细胞/mL,为PCR法替代培养法检测临床皮肤标本提供了依据,为临床标本的前处理工作提供了努力方向;PCR检测方法可替代生化鉴定方法对分支杆菌培养物鉴定到种、亚型,且很大程度地缩短了鉴定时间。2、模拟临床皮肤分支杆菌感染标本前处理后PCR检测方法及培养方法比较。研究发现模拟临床标本在经过前处理后在浓度为1×10~2个菌细胞/mL的数量级上PCR检测方法阳性检出率为60%,而未经过前
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R754

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