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慢性肾衰大鼠下丘脑组织食欲素A及其受体、瘦素受体及神经肽Y水平的变化

李峻岭  
【摘要】:慢性肾功能衰竭患者食欲减退原因尚不十分清楚,近来,调节食欲的神经多肽对慢性肾衰(CRF)病人食欲的影响已引起重视。食欲素(orexin)是1998年发现的主要位于下丘脑的神经肽,现已分离出两种orexin:orexin A和orexin B。orexin A是一种含33个氨基酸残基的多肽,分子量3562D。刺激进食是食欲素主要生理功能之一。关于血浆orexin在肾功能减退的变化国内外报道罕见,关于CRF时脑组织orexin的变化尚未见报告。本研究观察CRF大鼠模型的下丘脑orexin A、orexin受体1(Orexin receptor 1,OX_1R)、神经肽Y(NPY)和瘦素受体(ob-R)水平的变化,并探讨这些变化的意义。 材料和方法 1.随机将41只200-250g雄性Wister大鼠分为:Ⅰ.正常组(n=5),Ⅱ.假手术组(n=15),Ⅲ.CRF组(n=21),应用5/6肾切除术制作。术后4、8、12周测重后分批断头处死大鼠,取血浆和下丘脑组织标本(Ⅱ组每批5只,Ⅲ组每批分别5、8、8只)。下丘脑组织经过酸化、沸水浴、匀浆化处理、离心等过程,将上清液冷冻成干粉。血浆经过Sep-Pak C18柱层析,再冷冻成干粉。上述干粉经缓冲液溶解后,用放射免疫法测定血浆和下丘脑组织食欲素A和NPY。用生化自动分析仪测定血清肌酐。 2.随机将11只200-250g雄性Wister大鼠分为:Ⅰ假手术组(n=5),ⅡCRF组(n=6)。术后12周断头处死大鼠,取血清和下丘脑组织标本。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析食欲素前体mRNA(Prepro-orexin mRNA,Prepro-OXmRNA)和OX_1RmRNA的表达。 3.随机将10只200-250g雄性Wister大鼠分为:Ⅰ假手术组(n=5),ⅡCRF组(n=5)。术后8周后断头处死大鼠,取血清和下丘脑组织标本。采用免疫组化方法分析orexin A、OX_1R和ob-R的表达。 结果 1.CRF大鼠术后4、8和12周血肌酐水平均高于假手术组,其术后4、8、12周体重增加平均值明显低于假手术组;其术后12周的血浆食欲素A水平高于假手术组(263.61±62.01 vs 183.33pg/ml,p=0.039)。CRF大鼠术后8周下丘脑食欲素A水平低于假手术组,但无统计学意义(12.74±2.55 vs 17.65±4.75fmol/mg湿重,p=0.087),术后12周的下丘脑食欲素A水平明显低于假手术组(10.47±2.69fmol/mg湿重vs17.37±3.94 fmol/mg湿重,p=0.023)。CRF大鼠术后8周(7.06±1.67 vs 4.99±0.52pmol/ml,p=0.01)和12周(7.93±1.09 vs 4.76±1.12pmol/ml,p=0.0008)的血浆神经肽Y水平高于假手术组,其术后8周下丘脑NPY水平低于假手术组,但无统计学意义(83.74±21.65 vs 106.10±27.65fmol/mg湿重,p=0.16),术后12周的下丘脑神经肽Y水平明显低于假手术组(69.85±22.87vs112.99±31.40,p=0.033)。血浆食欲素A、NPY水平分别与血肌酐水平呈显著正相关(r=0.34,p=0.031;r=0.53,p<0.001)。下丘脑组织食欲素A、NPY水平分别与血肌酐水平呈显著负相关(r=-0.72,p<0.001;r=-0.34,p=0.032)。血浆食欲素A水平与下丘脑组织食欲素A水平呈负相关,但无统计学意义。血浆NPY水平与下丘脑组织NPY水平


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