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《中国协和医科大学》 2004年
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Fas基因靶向转导卵巢癌细胞系SKOV_3的实验研究

丁西来  
【摘要】:背景 卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤,目前对于晚期卵巢癌患者预后并无明显改善,因而探索有效的治疗方法仍是解决问题的关键。诱导细胞凋亡是很有前途的肿瘤治疗方法,研究发现在卵巢上皮癌细胞表面Fas表达缺失或减少,经Fas真核表达载体转染卵巢癌细胞可提高Fas基因表达,促进Fas抗体诱导卵巢癌细胞凋亡。虽然基因治疗在卵巢癌治疗中显示了广阔的前景,但目前仍然存在许多问题,其中突出的问题就是转染基因表达缺乏靶向性和转染的效率和安全性问题。 目的 本研究旨在探讨低表达Fas的卵巢上皮癌细胞转染Fas基因后是否能增加免疫效应细胞对其诱导凋亡的敏感性。为了解决基因转导中靶向性差表达效率低的问题,在Fas基因上游插入hTERT启动子,为了解决体内基因转导效率低安全性差的问题,构建穿梭质粒psNAV/hTERT-Fas,用AAV包装。 方法 第一部分以免疫组化方法了解Fas和FasL在卵巢上皮癌和正常卵巢上皮细胞的表达。 第二部分构建质粒pAd/T-F并转染SKOV_3。将Fas基因自质粒pcDNA_3/Fas中用KpnⅠ和XbaⅠ切出,插入到KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后的载体pAd/Tert中hTERT启动子的下游,构建pAd/T-F。然后转染pAd/T-F到低表达Fas的SKOV3,并转染pAd/T和PCDNA3/Fas作为对照,命名为T-F、T、F。 第三部分分离外周血单个核细胞,用抗TCRγ δ单克隆抗体刺激活化,然后用γδ T细胞来杀伤SKOV3、T、F、T-F,并用FasL封闭γδ T细胞后重复上述实验作为对照。 第四部分通过PCR从pAd/T-F中扩增T-F片段,并在其两端加Bsp1407I和SnaBI酶切位点,然后插入到Bsp1407I和SnaBI酶切后的psNAV载体,构建质粒psNAV/T-F。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R737.31

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
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