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《中国协和医科大学》 2004年
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兔角膜内皮细胞移植和自体骨髓间充质干细胞替代移植治疗角膜内皮损伤的初步研究

刘小伟  
【摘要】:目的:分离培养兔角膜内皮细胞(Corneal endothelial cells CECs)和骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells MSCs),观察它们体外生长情况;通过兔CECs移植证明利用明胶(Gelatin)膜载体进行CECs移植治疗角膜内皮损伤的可行性和初步效果,同时初步研究自体MSCs移植到兔角膜内皮细胞部位后其形态和功能的分化。 方法:采用揭膜联合胰蛋白酶消化法分离CECs;光镜和电镜对细胞进行观察;原代CECs用Brdu标记后接种在Gelatin膜载体上;利用α—氰基丙烯酸脘基酯作为组织黏合剂,将接种有CECs的载体与机械去除了内皮细胞的自体兔角膜植片相粘合,原位缝合进行兔眼CECs移植;采用骨髓穿刺密度梯度离心方法分离兔自体骨髓MSCs;并利用PE标记的CD_(45)和FITC标记的CD_(44)单克隆抗体对体外培养的骨髓MSCs进行鉴定;同样的方法用MSCs替代CECs进行移植;对照眼移植没有接种任何细胞的载体膜。术后在不同的时间点观察兔眼角膜移植片的透明情况、角膜厚度和眼压,并利用共焦显微镜进行移植细胞的形态观察和精确计数。术后观察12周,处死动物,角膜标本分别进行组织切片、抗Brdu单克隆抗体免疫组化染色和电镜观察。 结果:揭膜联合胰蛋白酶消化法可以获得高纯度的角膜内皮细胞,体外培养48小时后细胞大部分贴壁,贴壁率54.3%,7~10天基本汇合;细胞呈多角型,排列紧密,有明显的接触抑制。而骨髓穿刺密度梯度离心法获得的MSCs,体外培养96小时内贴壁生长,贴壁率约25.5%;原代培养的前5~6天为细胞的潜伏期,7~12天为细胞的指数增生期,之后进入平台期,大多在14~17天汇合;细胞呈单一的成纤维细胞外观,长梭形,排列呈漩涡状;体外培养的MSCs CD_(45)表达阴性,而CD_(44)表达阳性,纯度可达到94%左右。CECs和MSCs在Gelatin膜载体上生长良好,体外培养3~5天后细胞汇合,细胞密度CECs可以达到
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R779.6

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 马群;壳聚糖基角膜内皮组织工程载体支架的制备及性能评价[D];中国海洋大学;2010年
2 贾晓静;复合兔角膜内皮细胞的猪小肠粘膜下层体外构建角膜后板层的初步研究[D];暨南大学;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王婧,刘开彦;人骨髓间充质干细胞体外分化为雪旺样细胞的方法[J];北京大学学报(医学版);2003年02期
2 徐青镭,吴海山,周维江;兔骨髓间充质干细胞的提取与体外培养[J];第二军医大学学报;2000年03期
3 周强,李起鸿,杨柳,段小军;骨髓间充质干细胞在软骨细胞培养条件下生物学特点的观察[J];第三军医大学学报;2002年05期
4 闫国和,粟永萍,艾国平,屈纪富,程天民;人羊膜负载猪骨髓间充质干细胞生长的形态学研究[J];第三军医大学学报;2002年07期
5 罗飞;间充质干细胞在组织工程中的研究进展[J];第三军医大学学报;2003年02期
6 李云玲,陈笛,王璐,江和碧,卓本慧,梁熙,李廷玉;成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的体外研究[J];第三军医大学学报;2003年11期
7 唐娜;角膜内皮抗原及抗角膜内皮抗原抗体的提纯[J];第一军医大学学报;2002年01期
8 康非吾,唐休发,温玉明;骨髓间充质干细胞及其临床应用前景[J];口腔颌面外科杂志;2002年02期
9 张文志,孔荣,方诗元,朱六龙,童元,汪健;兔自体骨髓间充质干细胞体内复合移植的成骨研究[J];临床骨科杂志;2002年02期
10 杨鹏,刘瑶,曾水林,张会保;兔角膜内皮细胞的新法培养[J];东南大学学报(医学版);2001年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙伟;胡亮;赵兴;李官成;付炳方;潘颂华;;体外定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞[J];安徽农业科学;2010年07期
2 王娟;潘效红;杜立新;;体外诱导鸡胚胎生殖细胞分化为神经干细胞[J];动物学报;2008年05期
3 叶明珠;刘爱民;韩丽英;李荷莲;董玉洁;;人早期胚胎源性间充质干细胞的体外分离培养及其生物学特性[J];吉林大学学报(医学版);2007年04期
4 王继红,马力;青光眼患者持续高眼压及眼压恢复正常后角膜内皮细胞损伤及修复的研究现状[J];包头医学院学报;2002年04期
5 陈晓路;陈苹;贾竹青;刘羿男;马康涛;张永珍;周春燕;;人类胎儿骨髓间充质干细胞的白细胞抗原表达特征[J];北京大学学报(医学版);2006年06期
6 龙剑虹,祁敏,黄晓元,雷少榕,任利成;胶原-聚羟基乙酸与骨髓间质干细胞的细胞相容性研究[J];中国医师杂志;2005年02期
7 仵敏娟,刘善荣,刘厚奇 ,惠宁,杨玲,王凤玫,汤淑萍;人早期胚胎间充质干细胞的定位和体外初步分离培养[J];第二军医大学学报;2004年08期
8 余卫,张洹,何冬梅;体外诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化的研究[J];第二军医大学学报;2004年08期
9 樊建玲;来晓瑜;黄黎;王艳;曹军丽;黄河;;人骨髓间充质干细胞脑内移植对大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用[J];第二军医大学学报;2008年09期
10 闫国和,粟永萍,艾国平,林远,程天民,可金星,黄文琪;人羊膜负载猪角朊细胞重建表皮的形态学研究[J];第三军医大学学报;2002年08期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 华松;武浩;张涌;;骨髓间充质干细胞定向分化的研究进展[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
2 柏涛;舒军;;兔自体细胞-载体复合物修复关节软骨缺损的实验研究[A];玉溪市第三届骨科学术研讨会论文汇编[C];2007年
3 柏涛;;骨髓间充质干细胞诱导表达软骨细胞表型的研究进展[A];玉溪市第三届二次骨科学术研讨会论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵君;组织工程人角膜内皮的体外重建及其在兔角膜内皮移植中的作用研究[D];中国海洋大学;2010年
2 王颖;骨髓间充质干细胞移植结合碱性成纤维细胞生长因子/肝素缓释支架在猪心肌血运重建中的实验研究[D];北京协和医学院;2008年
3 梁晔;壳聚糖基生物材料对角膜上皮层及内皮层损伤修复作用的研究[D];中国海洋大学;2011年
4 杨珊珊;腺相关病毒载体介导人β-NGF和PDGF-B基因联合转染猫角膜内皮细胞的实验研究[D];青岛大学;2012年
5 孙洁;电针结合人胚胎间充质干细胞移植对酒精性肝纤维化模型大鼠干预的研究[D];北京中医药大学;2012年
6 李相运;小鼠胚胎干细胞多能性研究[D];西北农林科技大学;2001年
7 王建伟;供体源性骨髓间充质干细胞调节非协调性异种肝脏移植免疫排斥反应的实验研究[D];浙江大学;2004年
8 吕昌伟;三维诱导分化自体骨髓间充质干细胞修复关节软骨缺损的相关实验研究[D];第四军医大学;2004年
9 李东侃;人β-神经生长因子基因转染体外培养猫角膜内皮细胞促进其分裂再生的实验研究[D];青岛大学;2004年
10 张秀英;VEGF在骨髓间充质干细胞向内皮细胞诱导分化中的作用及分化机制研究[D];吉林大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马群;壳聚糖基角膜内皮组织工程载体支架的制备及性能评价[D];中国海洋大学;2010年
2 张睿婷;人脐带与胎盘来源的间充质干细胞生物学特性及免疫调节作用的比较[D];暨南大学;2011年
3 赵丹;雷公藤甲素、人羊膜在同种异体肌腱移植修复肌腱缺损中的作用[D];河北医科大学;2011年
4 何颖;人牙周成纤维细胞诱导形成结合上皮样细胞的研究[D];河北医科大学;2011年
5 马超;成骨细胞在两种胶原支架材料上的生长特征研究[D];北京协和医学院;2011年
6 金辉;人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为多巴胺能神经元[D];辽宁医学院;2011年
7 刘居理;miR-16促进心肌微环境诱导的骨髓间充质干细胞向心肌表型细胞分化[D];汕头大学;2011年
8 周信;针药结合诱导骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞的实验研究[D];南京中医药大学;2011年
9 张志逖;两种不同分离、纯化方法对SD大鼠BMSCs生物学特性影响的研究[D];泰山医学院;2011年
10 黄荣;山羊骨髓间充质干细胞生物学特性、冷冻保存及基因转染研究[D];南京农业大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 席敏,王子飞;水溶性壳聚糖的制备及结构表征[J];安徽农业科学;2001年05期
2 马如,黄明智;壳聚糖的溶菌酶降解[J];北京化工大学学报(自然科学版);2002年06期
3 顾国贞;王芳;谷树严;周鸿雁;才子斌;石毅;丛登立;颜炜群;;以纤维蛋白为基质网架的组织工程角膜上皮的构建[J];吉林大学学报(医学版);2008年05期
4 王明科;罗成基;邹仲敏;;干细胞与组织工程[J];重庆医学;2006年21期
5 李由,周韵秋,侯春林,顾其胜,蔡季平,王文斌;壳多糖眼内应用的实验研究[J];第二军医大学学报;1997年05期
6 胡瑛,杜予民,刘慧;壳聚糖抗菌性与分子量和环境介质相关性研究[J];分析科学学报;2003年04期
7 谢立信;中国眼科现状[J];中国工程科学;2003年01期
8 屈雷,王馨,杨学义,窦忠英;家兔角膜内皮细胞的快速培养[J];国际眼科杂志;2004年02期
9 游向东,金中秋,吴建国,宋艳萍;壳聚糖缓释给药系统植入脉络膜上腔治疗兔眼穿通伤[J];国际眼科杂志;2005年01期
10 牛晓霞;洪晶;段辉;刘蕾;;不同保存方法对角膜内皮细胞活性的影响[J];国际眼科杂志;2006年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 郑晓雁;国产碳纤维桩材料的生物学评价[D];首都医科大学;2005年
2 高玉香;治疗眼科疾病用可降解复合膜的制备及性能研究[D];武汉理工大学;2005年
3 万荣欣;羧甲基壳聚糖的制备及其生物学评价[D];天津医科大学;2006年
4 付辰炜;氨基葡萄糖及壳寡糖对小鼠免疫功能的影响[D];中国海洋大学;2006年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 王洋;刑春生;周星;王磊;韩宏光;;人工角膜材料分类及材料表面改性和生物相容性的研究[J];中国组织工程研究;2012年16期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 艾国平,粟永萍,闫国和,冉新泽,刘晓宏,罗成基,程天民;骨髓间充质干细胞的分离与培养[J];第三军医大学学报;2001年05期
2 何宇光;眼内醋酸冲洗后角膜内皮再生的研究[J];国外医学.眼科学分册;1986年04期
3 王身国;可生物降解的高分子类型、合成和应用[J];化学通报;1997年02期
4 伍志坚,吴小兵,曹晖,董小岩,王宏,侯云德;一种高效的重组腺伴随病毒载体生产系统[J];中国科学(C辑:生命科学);2001年05期
5 蔡良琬;生长因子的研究进展与临床应用[J];基础医学与临床;1991年01期
6 周强,李起鸿,杨柳;骨髓间充质干细胞及在软骨组织工程中的研究进展[J];临床骨科杂志;2001年04期
7 王爱本;褚庆环;杜培莲;赵国荣;汪贤富;;生物组织粘合剂的研制与应用——异种纤维蛋白原复和物皮肤粘合效果的动物实验研究[J];莱阳农学院学报;1989年01期
8 郭晓东,杜靖远,郑启新,刘勇,段德宇,刘维钢;TGF-β_1基因转染间充质干细胞的量效关系及安全性研究[J];同济医科大学学报;2001年02期
9 张汗承;朱顺清;伍宛苏;毕建祥;李晚陵;袁玫;郑怡;陈莉;官久芬;;家兔角膜内皮再生的研究[J];眼科研究;1985年04期
10 谢全锦,陈家祺,陈龙山;成人角膜内皮细胞无丝分裂现象初步研究[J];眼科研究;1988年04期
【相似文献】
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1 罗小玲,徐锦堂,李辰,赵松滨,陈建苏,郭海科;体外培养角膜内皮细胞移植的实验研究[J];中国实用眼科杂志;2004年07期
2 方成,陈振光,喻爱喜,祝少博,杨玉华;兔同种异体异位膝关节移植模型的建立[J];中华显微外科杂志;2003年03期
3 屈宏波,成霄黎;兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究[J];山西医科大学学报;2002年05期
4 邢承忠;洪晶;顾绍峰;韩靖颐;;兔骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定[J];中国医科大学学报;2008年01期
5 张凤河,孙涌泉,孙永清,王佩玉,袁锡兰;羟基磷灰石人工骨与附加明胶复合体骨膜下植入的对比研究[J];山东医科大学学报;1997年03期
6 贺文凤;石庆之;;间充质干细胞在造血干细胞移植中的免疫调节作用[J];江西医药;2006年01期
7 戴荣平,董方田,刘熙朴,张海涛,叶阿里,徐冬冬;兔眼虹膜和视网膜色素上皮细胞移植的形态学观察[J];眼科研究;2002年06期
8 彭素霞;崔华;赖平红;;全厚板层角膜移植临床研究[J];现代诊断与治疗;2011年04期
9 刘小伟;赵家良;;兔角膜内皮细胞移植治疗角膜内皮损伤[J];中国医学科学院学报;2007年03期
10 冯国华;王旭霞;赵署光;刘美媛;张晓兰;闻勤生;;不同途径移植脂肪间充质干细胞在肝内定居数量的比较[J];西南国防医药;2008年01期
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1 马勇江;杨学义;窦忠英;李玉谷;张媛;;兔脂肪间充质干细胞的分离培养及其向神经细胞分化的研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2006年
2 王巧稚;韩艺;赵宏贤;余鸿;刘广益;;当归诱导人脂肪间充质干细胞向神经细胞分化和毒性检测的研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
3 王玉红;陈光辉;;地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌肝细胞生长因子的影响[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
4 杜凤移;王皓;杨树龙;赵绘存;杨英;杨军;;纳米纤维支架对大鼠间充质干细胞向肝细胞分化的影响[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
5 郭勇;张西正;郭春;魏严;李瑞欣;徐晓莹;张永红;;脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化中心肌发育相关基因的表达[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
6 朱恒;江小霞;刘元林;张毅;毛宁;;间充质干细胞选择性调节破骨细胞发育和功能[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
7 张颢;陶艳玲;邱林;张伯龙;马军;陈志哲;刘拥军;韩忠朝;;一种具有免疫负调节功能的人脐带源间充质干细胞[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
8 杨少光;池颖;戎丽娟;邢文;卢士红;赵钦军;马凤霞;韩忠朝;;不同来源间充质干细胞诱导分化成血管内皮细胞的比较[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
9 李杰平;孔佩艳;李佳丽;朱丽丹;孔祥敬;曾东风;刘红;王庆余;彭贤贵;陈幸华;张曦;;纯化的自体CD34+细胞联合间充质干细胞治疗难治性克隆恩病一例并文献复习[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
10 罗高兴;程文广;黄正根;贺伟峰;袁顺宗;陈希炜;吴军;;应用人脐带血间充质干细胞修复小鼠皮肤缺损创面的实验研究[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年
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1 晓罡;夏季家兔管理要点[N];中国畜牧兽医报;2005年
2 杲罡;夏季养兔应抓啥[N];中国畜牧兽医报;2005年
3 ;夏季养兔应抓啥[N];通辽日报;2005年
4 张中立 刘黎丽 陈建华;“懒汉”獭兔协会[N];农民日报;2005年
5 吕纪增;幼兔急性腹泻病的防治[N];中国畜牧兽医报;2005年
6 孔令文;养兔喂料 三要三不要[N];农民日报;2005年
7 ;养兔巧喂料三要三不要[N];通辽日报;2005年
8 ;秋季养兔六件事[N];山西科技报;2004年
9 刘茹馥;獭兔五种情况下产不出优质皮[N];中国特产报;2004年
10 唐文斌 朱峰;“双兔”:没有终点的品牌之旅[N];江苏经济报;2004年
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1 刘小伟;兔角膜内皮细胞移植和自体骨髓间充质干细胞替代移植治疗角膜内皮损伤的初步研究[D];中国协和医科大学;2004年
2 肖宇翔;间充质干细胞注射对大鼠退变椎间盘的作用[D];浙江大学;2009年
3 彭飞;620nm非相干红光对大鼠骨髓间充质干细胞的光生物调节作用[D];华中科技大学;2011年
4 于美娇;系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究[D];山东大学;2011年
5 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
6 李宝军;脂肪间充质干细胞体外诱导及复合PLGA体内异位成软骨的实验研究[D];中南大学;2007年
7 朱雅姝;Flk-1~+间充质干细胞对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究[D];中国协和医科大学;2008年
8 吴桂珠;脂肪间充质干细胞治疗压力性尿失禁的实验研究[D];福建医科大学;2010年
9 熊卉;转化生长因子β1基因体外转染兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞向纤维软骨转化实验研究[D];武汉大学;2010年
10 苗宗宁;胎盘间充质干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石材料在骨创伤修复中的实验研究[D];苏州大学;2010年
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1 章守琴;人羊膜间充质干细胞支持造血的体外研究[D];昆明医学院;2010年
2 陈芳;脐带间充质干细胞修复化疗所致卵巢颗粒细胞损伤的体外实验[D];暨南大学;2010年
3 张茜真;人脐带间充质干细胞的分离、鉴定以及干细胞特异性转录因子诱导其重编程的研究[D];浙江理工大学;2010年
4 陈义;脐带间充质干细胞培养及体外重建角膜后板层的初步研究[D];暨南大学;2010年
5 唐子滨;纳米级胶原基骨材料复合自体脂肪间充质干细胞用于兔后外侧脊柱融合的实验研究[D];河北医科大学;2010年
6 齐凯;人脐带来源间充质干细胞分离培养方法的优化初探[D];山西医科大学;2011年
7 马兰兰;不同胎龄人脐带血间充质干细胞的研究[D];中国医科大学;2010年
8 李成华;口腔黏膜间充质干细胞存在及在口腔扁平苔藓中变化的初步研究[D];第四军医大学;2010年
9 田毅;人脐带Wharton's jelly间充质干细胞的生物学特性以及其与脑肿瘤干细胞共培养的实验研究[D];郑州大学;2010年
10 张福丽;间充质干细胞治疗肺动脉高压研究进展(附肺动脉高压发病机制进展)[D];山西医科大学;2011年
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