收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

兔角膜内皮细胞移植和自体骨髓间充质干细胞替代移植治疗角膜内皮损伤的初步研究

刘小伟  
【摘要】:目的:分离培养兔角膜内皮细胞(Corneal endothelial cells CECs)和骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells MSCs),观察它们体外生长情况;通过兔CECs移植证明利用明胶(Gelatin)膜载体进行CECs移植治疗角膜内皮损伤的可行性和初步效果,同时初步研究自体MSCs移植到兔角膜内皮细胞部位后其形态和功能的分化。 方法:采用揭膜联合胰蛋白酶消化法分离CECs;光镜和电镜对细胞进行观察;原代CECs用Brdu标记后接种在Gelatin膜载体上;利用α—氰基丙烯酸脘基酯作为组织黏合剂,将接种有CECs的载体与机械去除了内皮细胞的自体兔角膜植片相粘合,原位缝合进行兔眼CECs移植;采用骨髓穿刺密度梯度离心方法分离兔自体骨髓MSCs;并利用PE标记的CD_(45)和FITC标记的CD_(44)单克隆抗体对体外培养的骨髓MSCs进行鉴定;同样的方法用MSCs替代CECs进行移植;对照眼移植没有接种任何细胞的载体膜。术后在不同的时间点观察兔眼角膜移植片的透明情况、角膜厚度和眼压,并利用共焦显微镜进行移植细胞的形态观察和精确计数。术后观察12周,处死动物,角膜标本分别进行组织切片、抗Brdu单克隆抗体免疫组化染色和电镜观察。 结果:揭膜联合胰蛋白酶消化法可以获得高纯度的角膜内皮细胞,体外培养48小时后细胞大部分贴壁,贴壁率54.3%,7~10天基本汇合;细胞呈多角型,排列紧密,有明显的接触抑制。而骨髓穿刺密度梯度离心法获得的MSCs,体外培养96小时内贴壁生长,贴壁率约25.5%;原代培养的前5~6天为细胞的潜伏期,7~12天为细胞的指数增生期,之后进入平台期,大多在14~17天汇合;细胞呈单一的成纤维细胞外观,长梭形,排列呈漩涡状;体外培养的MSCs CD_(45)表达阴性,而CD_(44)表达阳性,纯度可达到94%左右。CECs和MSCs在Gelatin膜载体上生长良好,体外培养3~5天后细胞汇合,细胞密度CECs可以达到


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 罗小玲,徐锦堂,李辰,赵松滨,陈建苏,郭海科;体外培养角膜内皮细胞移植的实验研究[J];中国实用眼科杂志;2004年07期
2 方成,陈振光,喻爱喜,祝少博,杨玉华;兔同种异体异位膝关节移植模型的建立[J];中华显微外科杂志;2003年03期
3 屈宏波,成霄黎;兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究[J];山西医科大学学报;2002年05期
4 邢承忠;洪晶;顾绍峰;韩靖颐;;兔骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定[J];中国医科大学学报;2008年01期
5 张凤河,孙涌泉,孙永清,王佩玉,袁锡兰;羟基磷灰石人工骨与附加明胶复合体骨膜下植入的对比研究[J];山东医科大学学报;1997年03期
6 贺文凤;石庆之;;间充质干细胞在造血干细胞移植中的免疫调节作用[J];江西医药;2006年01期
7 戴荣平,董方田,刘熙朴,张海涛,叶阿里,徐冬冬;兔眼虹膜和视网膜色素上皮细胞移植的形态学观察[J];眼科研究;2002年06期
8 彭素霞;崔华;赖平红;;全厚板层角膜移植临床研究[J];现代诊断与治疗;2011年04期
9 刘小伟;赵家良;;兔角膜内皮细胞移植治疗角膜内皮损伤[J];中国医学科学院学报;2007年03期
10 冯国华;王旭霞;赵署光;刘美媛;张晓兰;闻勤生;;不同途径移植脂肪间充质干细胞在肝内定居数量的比较[J];西南国防医药;2008年01期
11 李学金;李群;张知博;;同种异体新鲜半月板移植的长期随访观察[J];成都医学院学报;2008年04期
12 张才龙;夏长所;蒋正尧;;应用密度梯度离心和贴壁筛选法分离兔骨髓间充质干细胞(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年06期
13 王军,王玉新,郭永峰,张继东;颌下腺同种异体移植模型的建立[J];中国医科大学学报;2000年01期
14 崔春爱,金东洙,金范学;关节软骨缺损修复细胞的体视学变化[J];延边大学医学学报;2003年02期
15 李学金;李群;张知博;严宏践;沈彦;王占秋;;兔同种异体新鲜半月板移植的实验观察[J];中国运动医学杂志;2009年06期
16 施小凤,傅晋翔,李军,陈萍,袁育青,黄海雯,孙谕;间充质干细胞联合输注促进造血干细胞移植后的造血重建[J];中华器官移植杂志;2005年07期
17 刘博;赵铖;;间充质干细胞在系统性红斑狼疮治疗中的研究进展[J];内科;2010年02期
18 高建鲁,徐永善,刘昭慧,吕炎,王传富;幼兔眼改良穿透性角膜移植术的屈光学评价[J];青岛大学医学院学报;1996年04期
19 成霄黎,彭清,屈宏波,赵志宏;兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究[J];国际眼科杂志;2002年02期
20 姚旺祥;裴国献;刘勇;梅良斌;马安;;兔胎盘源性间充质干祖细胞的分离方法比较[J];生物医学工程与临床;2007年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 马勇江;杨学义;窦忠英;李玉谷;张媛;;兔脂肪间充质干细胞的分离培养及其向神经细胞分化的研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2006年
2 王巧稚;韩艺;赵宏贤;余鸿;刘广益;;当归诱导人脂肪间充质干细胞向神经细胞分化和毒性检测的研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
3 王玉红;陈光辉;;地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌肝细胞生长因子的影响[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
4 杜凤移;王皓;杨树龙;赵绘存;杨英;杨军;;纳米纤维支架对大鼠间充质干细胞向肝细胞分化的影响[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
5 郭勇;张西正;郭春;魏严;李瑞欣;徐晓莹;张永红;;脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化中心肌发育相关基因的表达[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
6 朱恒;江小霞;刘元林;张毅;毛宁;;间充质干细胞选择性调节破骨细胞发育和功能[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
7 张颢;陶艳玲;邱林;张伯龙;马军;陈志哲;刘拥军;韩忠朝;;一种具有免疫负调节功能的人脐带源间充质干细胞[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
8 杨少光;池颖;戎丽娟;邢文;卢士红;赵钦军;马凤霞;韩忠朝;;不同来源间充质干细胞诱导分化成血管内皮细胞的比较[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
9 李杰平;孔佩艳;李佳丽;朱丽丹;孔祥敬;曾东风;刘红;王庆余;彭贤贵;陈幸华;张曦;;纯化的自体CD34+细胞联合间充质干细胞治疗难治性克隆恩病一例并文献复习[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
10 罗高兴;程文广;黄正根;贺伟峰;袁顺宗;陈希炜;吴军;;应用人脐带血间充质干细胞修复小鼠皮肤缺损创面的实验研究[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘小伟;兔角膜内皮细胞移植和自体骨髓间充质干细胞替代移植治疗角膜内皮损伤的初步研究[D];中国协和医科大学;2004年
2 肖宇翔;间充质干细胞注射对大鼠退变椎间盘的作用[D];浙江大学;2009年
3 彭飞;620nm非相干红光对大鼠骨髓间充质干细胞的光生物调节作用[D];华中科技大学;2011年
4 于美娇;系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究[D];山东大学;2011年
5 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
6 李宝军;脂肪间充质干细胞体外诱导及复合PLGA体内异位成软骨的实验研究[D];中南大学;2007年
7 朱雅姝;Flk-1~+间充质干细胞对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究[D];中国协和医科大学;2008年
8 吴桂珠;脂肪间充质干细胞治疗压力性尿失禁的实验研究[D];福建医科大学;2010年
9 熊卉;转化生长因子β1基因体外转染兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞向纤维软骨转化实验研究[D];武汉大学;2010年
10 苗宗宁;胎盘间充质干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石材料在骨创伤修复中的实验研究[D];苏州大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 章守琴;人羊膜间充质干细胞支持造血的体外研究[D];昆明医学院;2010年
2 陈芳;脐带间充质干细胞修复化疗所致卵巢颗粒细胞损伤的体外实验[D];暨南大学;2010年
3 张茜真;人脐带间充质干细胞的分离、鉴定以及干细胞特异性转录因子诱导其重编程的研究[D];浙江理工大学;2010年
4 陈义;脐带间充质干细胞培养及体外重建角膜后板层的初步研究[D];暨南大学;2010年
5 唐子滨;纳米级胶原基骨材料复合自体脂肪间充质干细胞用于兔后外侧脊柱融合的实验研究[D];河北医科大学;2010年
6 齐凯;人脐带来源间充质干细胞分离培养方法的优化初探[D];山西医科大学;2011年
7 马兰兰;不同胎龄人脐带血间充质干细胞的研究[D];中国医科大学;2010年
8 李成华;口腔黏膜间充质干细胞存在及在口腔扁平苔藓中变化的初步研究[D];第四军医大学;2010年
9 田毅;人脐带Wharton's jelly间充质干细胞的生物学特性以及其与脑肿瘤干细胞共培养的实验研究[D];郑州大学;2010年
10 张福丽;间充质干细胞治疗肺动脉高压研究进展(附肺动脉高压发病机制进展)[D];山西医科大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 晓罡;夏季家兔管理要点[N];中国畜牧兽医报;2005年
2 杲罡;夏季养兔应抓啥[N];中国畜牧兽医报;2005年
3 ;夏季养兔应抓啥[N];通辽日报;2005年
4 张中立 刘黎丽 陈建华;“懒汉”獭兔协会[N];农民日报;2005年
5 吕纪增;幼兔急性腹泻病的防治[N];中国畜牧兽医报;2005年
6 孔令文;养兔喂料 三要三不要[N];农民日报;2005年
7 ;养兔巧喂料三要三不要[N];通辽日报;2005年
8 ;秋季养兔六件事[N];山西科技报;2004年
9 刘茹馥;獭兔五种情况下产不出优质皮[N];中国特产报;2004年
10 唐文斌 朱峰;“双兔”:没有终点的品牌之旅[N];江苏经济报;2004年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978