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《中国协和医科大学》 2005年
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小鼠精子发生相关基因的功能研究

马鹏鹏  
【摘要】:哺乳动物的精子发生是一个复杂的细胞分化过程,可分为有丝分裂、减数分裂和精子形成三个阶段。精原细胞通过有丝分裂不断增殖,为精子发生的源泉。精原细胞的部分后代进入分化途径,产生初级精母细胞。初级精母细胞通过第一次减数分裂产生两个次级精母细胞,次级精母细胞的间期很短,不发生DNA复制就进入第二次减数分裂,生成单倍体的圆形精子细胞。圆形精子细胞通过一系列复杂的形态变化,发育为具有头、颈、尾结构的精子。精子发生过程受许多特异分子及细胞间作用的严格调节,包括染色体结构变化及一系列特定基因程序性表达调控。长期以来由于缺乏合适的体内(in vivo)和体外(in vitro)研究模型,精子发生的分子机制的研究进展较慢,尤其缺乏对关键调节基因的认识。本研究应用睾丸移植、间接免疫荧光、Westem blot、RNA干扰、免疫共沉淀等方法试图建立适合于研究精子发生相关基因功能的模型与技术平台,同时对本课题组前期利用cDNA微阵列和RT-PCR等方法筛选的一些在精子发生过程中有差异表达特征的基因进行了初步的功能探索,以期能够进一步认识精子发生的分子机理。本研究主要包括以下三个方面的内容。 一.同系小鼠睾丸移植及宿主对移植睾丸精子发生的影响。取5日龄Balb/c小鼠睾丸移植到同系4周龄正常小鼠(雌雄各20只,按性别分为两组)背部皮下,在移植后1、2、3、5、7、9、12、和15周处死宿主(每次雌雄各2只),观察移植睾丸在不同性别宿主中的存活率和大小变化,同时用组织学方法和RT-PCR检测精子细胞特异表达的Protamine-2基因对移植后睾丸的精子发生状态进行评价。结果显示移植睾丸成活率在雄性宿主中是70.3%,雌性中为67.2%,所有存活的睾丸大小都有增加,有的增大了30多倍,从移植后7周开始雄性宿主中的移植睾丸与雌性宿主相比增大更为显著。但组织学观察显示雌性宿主中移植睾丸的曲细精管生精上皮结构比雄性宿主中完整,提示雌性比雄性更适合作为睾丸移植的宿主。移植睾丸中圆形精子是分化程度最高的生精细胞,在所有移植睾丸中没有发现完全成形的精子。RT-PCR结果显示Protamine-2基因从移植后第5周开始表达,并且与宿主性别关系不大。随后我们又用2周龄小鼠作为移
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q344

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