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《中国协和医科大学》 2004年
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食管鳞癌表达下调基因DNA甲基化分析及其相关功能的研究

刘仲敏  
【摘要】:食管鳞癌表达下调基因DNA甲基化分析及其相关功能的研究 食管鳞癌相关基因Retinoic acid receptor β_2(RAR β_2)的表达丢失存在于包括食管鳞癌的多种肿瘤中,但该基因的失活机制尚未阐明。本研究采用Methylation-specific PCR(MSP)和亚硫酸氢盐修饰序列分析检测了12个食管鳞癌细胞系中RAR β_2基因启动子区域的甲基化状态;同时运用RT-PCR和Western blot分析了该基因的表达情况;进一步用甲基化抑制剂5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-dc)处理RAR β_2基因表达丢失或明显下调且携带甲基化位点的细胞系,结果表明在部分细胞系中该基因的甲基化与表达失活密切相关。同时采用MSP和RT-PCR或Western blot检测了51对配对食管鳞癌组织和2个正常食管粘膜上皮RAR β_2基因启动子区域的甲基化状态及其表达情况。结果表明:该基因启动子区域的甲基化与食管鳞癌病理分级呈显著负相关;RAR β_2基因的甲基化状态和该基因表达下调之间的相关性也只发生在病理分级程度为G_2期的肿瘤中。在RAR β_2基因表达失活与甲基化相关的细胞系中,去甲基化处理后可以恢复维甲酸对它的可诱导性。 采用ATP生物荧光法和平板克隆形成实验发现5-aza-dc处理后,伴随着RAR β_2基因表达的恢复肿瘤细胞的生长受到抑制。进一步分析5-aza-dc处理前后食管鳞癌细胞系细胞周期和细胞凋亡的变化,伴随着RAR β_2基因的表达恢复,在一定程度上,由p21介导的G_1或G_2/M期阻滞和c-myc引起的细胞凋亡最终导致肿瘤细胞生长抑制现象的发生,这可能是5-aza-dc抑制肿瘤细胞生长的作用机制之一。 研究发现食管鳞癌细胞系经过5-aza-dc处理后,伴随着p16基因启动子区域的去甲基化,其表达发生了恢复;p16基因在一定程度上很可能参与了上述细胞系中凋亡的发生过程。此外,在食管鳞癌细胞系中利用MSP和RT-PCR检测了CystatinB基因启动子区域的甲基化状态和其表达情况;进一步用5-aza-dc处理食管鳞癌细胞系发现该基因表达没有恢复;所有这些结
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R735.1

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