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阿片类药物对PMN NF-kappaB基因及PMN凋亡的影响

赵丽云  
【摘要】:目的 1.对比观察不同阿片类药物对LPS刺激健康人离体中性粒细胞(PMN)核转录因子-κappaB(NF-κB)亚单位p65基因表达及p65蛋白含量的影响;2.观察不同阿片类药物对健康人离体PMN凋亡的影响;初步探讨阿片类药物对PMN免疫功能的影响。 方法 选择20例健康志愿者,采取外周静脉血并分离PMN,将分离好的PMN分成6部分,分别置入培养板中,分别加入等量生理盐水(C组,对照组)、LPS组(终浓度为100ng/L)、吗啡组(M组,终浓度为50nM)、芬太尼组(F组,5nM)、LPS+吗啡组(LPS+M组,二者终浓度均同前)、LPS+芬太尼组(LPS+F组,浓度同前)。置入CO_2培养箱中孵育(37℃,湿度100%,5%的CO_2和95%的空气),2.5h后将每份细胞分为2组,分别用于检测NF-κB亚单位p65mRNA表达(RT-PCR方法)及p65蛋白含量测定(western blotting方法)。RT-PCR结果采用凝胶图象扫描仪进行电泳条带灰度值分析p65mRNA的相对表达量;p65蛋白含量以测得目标带的灰度值与背景灰度值之比表示。 另选22例健康志愿者,采用上述同样的方法将PMN分离、分组、孵育,分别在孵育12h、24h时,采用双标液—Annexin V-FITC/PI标记,流式细胞仪检测PMN凋亡情况。 所有数据采用SPSS11.0软件包进行分析,计数资料采用方差分析,计量资料采用x~2检验,在有显著性差异的基础上,进行组间比较,p<0.05为差异有显著性。 结果 1.RT-PCR:与LPS共同孵育的PMN p65 mRNA表达明显增强,与对照组比较有非常显著差异(LPS组2.166±0.105 vs C组1.643±0.086,p<0.01),单纯吗啡组及吗啡与LPS共同培养组对PMN p65 mRNA表达均显示出抑制作用(M组1.357±0.217vs C组1.643±0.086;M+LPS组1.802±0.086 vs LPS组2.166±0.105 p<0.01),芬太尼单独或与LPS共同培育均对PMN p65 mRNA的表达均无影响(F组1.701±0.115 vs C组1.643±0.086;F+LPS组2.087±0.153 vs LPS组2.166±0.105,p>0.05)。 2.蛋白杂交:吗啡无论单独使用或与LPS共同培育,均显示可降低PMN p65蛋白含量(M组5.1±2.0 vs C组5.9±29.4;M+LPS组6.5±1.8 vs LPS组7.8±1.9,p<0.05或


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