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《中国协和医科大学》 2005年
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深部真菌感染的快速分子诊断及其临床应用研究

刘军  
【摘要】:近年来,随着医学的发展,广谱抗生素、皮质类固醇激素、免疫抑制剂以及各种器官移植和插管技术的广泛应用,免疫受损人群(HIV感染或AIDS患者、吸毒者及肿瘤患者等)不断扩大,真菌感染的发病率明显增加。已发现至少150种真菌可使人类致病,侵犯人体各个脏器,但在免疫受损患者的深部真菌感染中仍以念珠菌病和曲霉病最常见。念珠菌属引起的感染占院内真菌血行感染(BSIs)的四分之三,已成为美国院内BSIs的第四大病因;曲霉属是骨髓移植(BMT)患者肺部感染死亡的最常见病因:而新生隐球菌则是AIDS患者与真菌相关的最常见致死原因。虽然在临床治疗上有一些新型抗真菌药可以选择,但深部真菌病仍与高死亡率密切相关。目前对真菌感染的诊断仍主要靠传统的镜检和培养,及依据形态学和生理学等表型特征进行鉴定,但往往因周期长、阳性率低而易贻误治疗时机。有资料表明早期诊断能显著提高机会性真菌感染患者的生存率,因此迫切需要发展快速准确的检测手段。本研究建立了真菌通用引物PCR和针对白念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉三种常见致病真菌的三重PCR方法,并通过对60份临床标本和成功构建的侵袭性曲霉病(IA)兔模型的检测证实其较传统真菌培养法快速准确、简便易行。 第一章:建立真菌通用引物PCR方法。首先验证真菌通用引物PCR检测真菌DNA的特异性。用于本项研究的9个属55种78株真菌DNA用通用引物均扩增出260bp左右的目的片段,而5种细菌菌株和人全血细胞DNA均未扩增出目的片段。然后检测真菌通用引物PCR的敏感性,可检测出的DNA最低量为10~2CFU/mL。又进行了真菌通用引物PCR检测模拟临床标本的特异性,将所有78株真菌分别与健康人全血和尿液混合,取200μL样本提取DNA后进行PCR扩增,均出现260bpDNA条带,未见非特异性杂带。证实了真菌通用引物PCR具有较好的敏感性和特异性,简便快速,从DNA提取到PCR产物电泳图采集结束在6h内即可完成。 第二章:建立了针对白念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉的三重PCR方法。首先筛选这三种真菌符合要求的种特异性引物,并验证白念珠菌、烟曲霉和新生隐球菌种特异性引物的特异性。分别用种特异性引物与所有78株真菌DNA进行单重PCR,均只相应扩增出新生隐球菌(约135bp)、烟曲霉(约520bp)及白念珠菌(约257bp),其他菌种均未扩增出目的片段;再将三种真菌的DNA模板混合,分别与这三种真
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R519

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【参考文献】
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