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《中国协和医科大学》 2003年
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大鼠肺微血管内皮细胞衰老机制的研究

吉瑞瑞  
【摘要】:肺功能不全是多种肺疾病发展至最后可能产生的共有的病理过程,并由此引发多器官功能衰竭,危及生命。人口老龄化是21世纪全球面临的重大课题。提示研究包括老年肺功能不全在内的老年性疾病发生机制的迫切性。肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)在肺功能不全的发病学中起主导作用。本研究拟通过研究衰老PMVECs存活与凋亡信号通路的变化规律,阐明老化过程中肺功能不全的细胞分子机制。将对老年肺功能不全以及老年相关疾病的研究提供有益探索,具有极其重要的社会意义和经济意义。 目的 在成功分离培养大鼠PMVECs的基础上,建立稳定可靠的D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的大鼠PMVECs衰老模型;从细胞周期,细胞生长存活和细胞凋亡及其信号传导途径调控等方面探讨PMVECs衰老的细胞分子机制。 方法 1.大鼠PMVECs的分离培养与鉴定。联合应用胰蛋白酶和胶原酶消化肺边缘组织分离细胞,血清诱导内皮细胞聚集。根据内皮细胞典型的铺路石样的形态学特征,运用胰蛋白酶/EDTA局部消化内皮细胞克隆再进行扩大培养。用下述方法鉴定大鼠PMVECs:(1)免疫荧光标记法检测内皮细胞内vWF;(2)荧光显微镜观察PMVECs吞噬红色荧光染料DiI标记的乙酰化的低密度脂蛋白(DiI-Ac-LDL)的功能;(3)透射显微镜观察大鼠PMVECs的超微结构 (4)根据内皮细胞能吞噬DiI-Ac-LDL的功能,运用流式细胞仪计量有荧光标记的阳性细胞,以鉴定所分离大鼠PMVECs的纯度。 2.D-gal诱导大鼠PMVECs衰老模型的建立。运用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)观察D-gal对大鼠PMVECs生存活力的影响;将原代分离的大鼠PMVECs传代,以10g/L D-gal的DMEM培养液培养细胞,传代3次继续培养7d后终止培养,即为用于本文实验的D-gal诱导的大鼠PMVECs衰老模型。以不含D-gal的上述培养液培养传代3次的细胞为对照组。此外,将PMVECs经D-gal诱
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q255

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