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《中国协和医科大学》 2003年
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皮肤分支杆菌感染快速诊断方法的研究及其在临床中的应用

李晓杰  
【摘要】:随着艾滋病和其他免疫缺陷患者的增多,分支杆菌感染的发病率也逐渐上升。分支杆菌既可以引起系统性感染,也可以引起皮肤感染。皮肤分支杆菌感染的临床表现和组织病理都缺乏特异性,诊断主要依靠检测到分支杆菌。对皮损组织进行直接涂片和抗酸染色的阳性率低,培养和生化鉴定所需时间长,不能为临床医生及时提供可靠的信息,因此迫切需要建立快速、敏感、特异的分支杆菌检测和鉴定方法。以PCR为基础的分子生物学方法使分支杆菌感染的快速、准确诊断成为可能。本研究旨在针对文献报道通常可引起皮肤感染的分支杆菌进行研究,建立PCR、多重PCR和PCR-RFLP方法,并用所建立的方法结合传统的表型和生化鉴定技术对皮肤分支杆菌感染的临床分离株进行鉴定。 第一章:建立5种常见皮肤分支杆菌感染的PCR方法。首先对连续稀释的5种分支杆菌DNA用其自身的特异性引物进行PCR扩增,验证各分支杆菌PCR检测的敏感性;然后用各引物对其它17种分支杆菌标准株DNA进行PCR扩增,验证引物的特异性;之后对PCR方法用于模拟临床皮肤分支杆菌感染标本的检测进行了初步探讨。结果表明:除了溃疡分支杆菌PCR检测的敏感性为1×10~0个菌细胞/mL外,其它分支杆菌的敏感性均为1×10~2个菌细胞/mL;各分支杆菌的引物除了与自身相应的DNA可以扩增出特异性片段外,与其它分支杆菌DNA不能扩增出特异性片段;向正常皮肤组织匀浆中加入鸟分支杆菌菌悬液以模拟临床皮肤感染标本,PCR检测的敏感性降低了100倍,说明皮肤组织中含有很强的PCR反应的抑制物;把组织匀浆倍比稀释后,敏感性增强,当稀释度≥1:4时,敏感性恢复为1×10~2个菌细胞/mL,提示在对临床皮肤组织标本进行PCR检测时,可将组织匀浆稀释后高速离心沉淀集菌,再进行PCR反应,就有可能避免组织抑制物的干扰。 第二章:建立5种常见分支杆菌感染的多重PCR方法。分4个步骤:1、分支杆菌单一PCR的建立:鸟、胞内、结核、溃疡、堪萨斯5种分支杆菌DNA与自身的特异性引物PCR扩增阳性,而与其它分支杆菌引物PCR扩增结果均为阴性;2、2种(鸟、胞内)或3种(溃疡、堪萨斯、结核)分支杆菌DNA模板混合后,分别与各菌种的特异性引物进行PCR扩增,结果各模板仅与自身引物反应,扩增出相应的特异性片段,未见到模板的混合抑制PCR反应;3、上述2或3种分支杆菌的特异性引物混合后,分别与相应的分支杆菌DNA模板进行PCR扩增,结果各引物仅与自身模板反应,扩增出相应的特异性片段,未见到引物的混合抑制PCR反应;4、多重PCR反应的建立:上述2或3种分支杆菌DNA模板与相
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R754

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