收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

一个HSV-1刺激相关基因的克隆及其功能的初步分析

董少忠  
【摘要】:单纯疱疹病毒(HSV)是一种具有较强传染性的病原体,它是一种结构复杂的双链DNA病毒,在细胞内的复制过程中与宿主细胞之间表现有多种相互作用。HSV与受体的相互作用所导致的细胞基因反应是研究HSV感染不同细胞后会形成不同的感染过程及结果的基础。从这个意义上说,对于病毒结合受体所导致的细胞早期基因反应的分析,在探索细胞对病毒感染产生相应反应的机理,和由此机理所导致的各种可能的生物学意义而确定的临床治疗或诊断方法等领域内的应用都具有很大的意义。 本实验的研究重点是分析病毒感染诱导的差异基因所编码蛋白在细胞内的功能意义,通过HSV-1型病毒刺激KMB-17细胞后,进行差异显示分析,根据分析结果,克隆得到了一个差异基因,命名为HSV-1刺激相关基因(HSV-1 stimulation related gene 1,hsrg1),经GenBank检索为一未知功能编码基因,全长1748bp,CDS全长为1641bp,我们将该基因克隆到谷胱甘肽转移酶融合表达载体(pGEX-5x-1)中,构建了pGEX-HSRG1表达质粒,在大肠杆菌BL21中获得了较高的表达,并采用Glutathione Sepharose4B进行亲和纯化,获得较高纯度的目的蛋白,用该蛋白免疫小鼠后制备的特异抗体,蛋白印迹实验表明原核表达的HSRG1能被该抗体特异识别。该抗体在病毒刺激KMB-17细胞前后的免疫沉淀实验(IP)中亦表现出较好的特异性,显示我们所表达的HSRG1蛋白具有与天然蛋白相同的构象。多组织mRNA表达谱分析表明,hsrg1基因在骨骼肌、脑、心脏、皮肤等组织中有表达。 免疫沉淀实验(IP)的结果进一步证实了HSV-1刺激可使HSRG1蛋白的表达量明显增加;且该蛋白质能够被磷酸化。通过对HSRG1-EGFP融合蛋白在细胞内的动态观察,初步确定HSRG1定位于细胞浆内。生物信息学分析发现,hsrg1编码的蛋白质属于一个功能未明的SAND蛋白家族的成员,其中含有一个存在于多种真核生物中的保守的结构域。hsrg1基因定位于人染色体16q23.1臂上,5个外显子分布于约7kb范围内。 转染pcDNA-HSRG1的KMB-17细胞和未转染的细胞感染HSV-1后,两者的病毒滴度无明显变化,提示HSRG1蛋白表达量增加对HSV-1病毒的感染和复制无直接影响;利用RNAi技术将约400bp的dsRNA转入KMB-17细胞,经流式细胞仪检测,实验组和对照组的细胞周期无明显差别。利用酵母双杂交系统初步确定,SV40的T抗原可以和HSRG1发生相互作用,并通过免疫共沉淀实验在细胞内证实这种相互作用的存在。 通过对HSRG1蛋白功能的初步研究并结合Internet及生物信息技术进行数据的分析整理,我们


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张汉荆;;单纯疱疹病毒的分离、运输和保存[J];国外医学(微生物学分册);1998年02期
2 马骊,张智清,曾革非,周小明,陈爱君,姚立红,王小宁;利用酵母双杂交系统研究人血管内皮生长因子受体Flt-1的配体结合域[J];病毒学报;2000年02期
3 郑秀峰;韩金祥;;单纯疱疹病毒研究现状[J];中国麻风皮肤病杂志;2008年05期
4 Gluckman E;焦富勇;;口服Acyclovir预防骨髓移植后的疱疹病毒感染[J];西安交通大学学报(医学版);1984年03期
5 刘一平,杨晓,邓初夏,邓继先,蒋忠军,吕亚歆,程萱,黄翠芬;用酵母双杂交系统研究Smad3和Smad4的相互作用[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年04期
6 高诗娟,田瑞,宋婀莉,高友鹤;酵母双杂交常用菌株AH109半乳糖苷酶检测实验呈阳性[J];中国生物化学与分子生物学报;2005年01期
7 曹志国,张进,周煜,王艳,赵庆国,卢柏松,黄培堂;GGN3与GGNBP2的相互作用及作用区域确定[J];生物技术通讯;2005年01期
8 关薇;王建;贺福初;;大规模蛋白质相互作用研究方法进展[J];生命科学;2006年05期
9 于红;吕锐;张文卿;;螺旋藻多糖抗单纯疱疹病毒作用的实验研究[J];天然产物研究与开发;2006年06期
10 李强;刘先凯;张浩;冯尔玲;叶棋浓;王恒樑;;炭疽芽孢杆菌FtsE蛋白酵母双杂交载体的构建与表达[J];生物技术通讯;2007年03期
11 ;环胞苷抗单纯疱疹病毒的实验[J];微生物学报;1977年04期
12 张江虹;冯珏孙;高又新;;用SDS-PAGE法检测HSV型别的初步试验[J];武汉大学学报(医学版);1985年04期
13 李德敏,金伯泉,刘飞,欧阳为明,张建平,李林;PTA1酵母双杂交载体的构建[J];细胞与分子免疫学杂志;1999年02期
14 肖庆忠!510120,宁波,陈柏铭!510120;单纯疱疹病毒荧光标记单克隆抗体的临床应用[J];中华微生物学和免疫学杂志;2000年06期
15 胡承香,徐祥,梁华平,吕凤林,王付龙,王正国;酵母双杂交随机肽库的设计及构建[J];第三军医大学学报;2004年01期
16 刘敏;张伟;陈天艳;蔺淑梅;赵良;刘锦锋;赵英仁;张树林;;丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定[J];西安交通大学学报(医学版);2006年01期
17 楚雍烈;房益兰;刘延娜;董小平;;单纯疱疹病毒基因组的限制性核酸内切酶分析[J];中国病毒学;1990年02期
18 胡承香,徐祥,梁华平,王付龙,罗艳,王正国;酵母双杂交随机肽库的设计及构建[J];动物医学进展;2003年02期
19 张璟,张健,刘娜,王立峰,李霞,刘新平,药立波;NDRG家族成员酵母双杂交诱饵载体的构建,表达及自激活检测[J];第四军医大学学报;2005年05期
20 王丹;白华;姜晶;;动物生殖器疱疹的实验治疗研究[J];微生物学杂志;2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 林雄杰;;MoRab5酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 卢雅丕;董菁;周飞;王琳;张波;陈美娅;任建林;;人肠三叶因子酵母双杂交载体的构建及其自激活作用鉴定[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(上册)[C];2007年
3 杨长庚;王贤丽;王磊;张博;文华;陈松林;;牙鲆PoAkirin1相互作用蛋白筛选及基因性质的研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 符向辉;何淑雅;董晓;李斌元;王三虎;秦凌雪;陈小卫;马云;;智力低下相关蛋白FXR1P与CMAS相互作用区域的鉴定[A];传承与发展,创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年
5 袁顺宗;马兵;易绍萱;贺伟峰;陈希炜;罗高兴;吴军;;以酵母双杂交系统从成人肝cDNA文库中筛选与研究P311相互作用蛋白的基因序列[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
6 袁顺宗;谭江琳;马兵;彭旭;贺伟峰;黄正根;程文广;杨世伟;杨俊杰;王晓娟;胡婕;甘成军;陈希炜;胡晓红;张小容;罗高兴;吴军;;以酵母双杂交系统从成人肝cDNA文库中筛选与研究P311相互作用蛋白的基因序列[A];第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
7 郭颂;林彩丽;周涛;田国忠;范在丰;;泡桐丛枝植原体侵染的泡桐组培苗酵母双杂交cDNA文库的构建[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
8 张方;施毅;辛晓峰;宋勇;赵明;李子玲;钱桂生;罗向东;;大鼠肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与筛选[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
9 童新;刘斌;孙志贤;;利用酵母双杂交系统研究caspase相互作用蛋白[A];中华医学会放射医学与防护学分会第二次中青年专题研讨会论文汇编[C];1999年
10 张旭东;Rhonda R.McCartney;Tommy S.Tillman;Harry Solimeo;Stefan Wf;Ciprian Almonte;Simon C.Watkins;Martin C.Schmidt;;Stdl蛋白对葡萄糖感受体Rgt2和Snf3的作用及对蛋白激酶Snf1活性的调节(英文)[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 董少忠;一个HSV-1刺激相关基因的克隆及其功能的初步分析[D];中国协和医科大学;2003年
2 李健峰;与HSV-1感染相关的细胞立即早期基因产物HTRP在细胞辅抑制因子复合物中功能的分析[D];中国协和医科大学;2004年
3 宋林霞;利用酵母双杂交系统筛选与G蛋白及CaM相互作用的新蛋白[D];河北师范大学;2003年
4 房玮;杨树次生维管发育相关基因PtCDD和PtSZF的功能分析[D];中国林业科学研究院;2010年
5 崔晓艳;马铃薯Y病毒属编码的膜相关蛋白的功能研究[D];西北农林科技大学;2010年
6 孙涛;肿瘤细胞成血管塑形在血管生成拟态形成中的作用研究[D];天津医科大学;2010年
7 陈莉;ERβ1相互作用蛋白的筛选及ERβ1-Id1信号通路对乳腺癌细胞增殖抑制作用及机制研究[D];第三军医大学;2010年
8 刘秀杰;酵母双杂交筛选Nogo-66的结合分子及功能研究[D];第二军医大学;2006年
9 李星星;hS100A6对人骨肉瘤细胞株143B的作用及机制探讨[D];重庆医科大学;2010年
10 张勇;神经营养因子受体下游信号转导通路的酵母双杂交研究[D];第二军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘杰;HPV18E6酵母双杂交诱饵质粒的构建与检测[D];华中科技大学;2009年
2 张巍;MDBK细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及其鉴定[D];吉林大学;2011年
3 陈琼琼;酵母双杂交法对STK11羧基端互作蛋白的筛选[D];中南大学;2010年
4 蒋丽丽;柽柳Peroxiredoxin基因(ThPrx1)的克隆及抗逆功能分析[D];东北林业大学;2010年
5 姜波;柽柳硫氧还蛋白过氧化物酶基因耐盐功能分析[D];东北林业大学;2011年
6 赵艳敏;1.两种蜘蛛多肽毒素诱饵载体的构建及初步鉴定 2.电压门控钠离子通道嵌合体的构建以及生理活性的检测[D];湖南师范大学;2010年
7 张伟;人SARP1基因酵母双杂交诱饵载体的构建、表达鉴定及自激活和毒性检测[D];重庆医科大学;2010年
8 姜静宜;胚胎干细胞中外源性IbeB靶蛋白的筛选及验证[D];中国医科大学;2010年
9 郭超;运用酵母双杂交系统筛选与鉴定神经生长因子受体TrkA结合小肽[D];第二军医大学;2003年
10 张佩景;酵母双杂交筛选孕激素受体相互作用蛋白质及其功能的研究[D];西北农林科技大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 英 译;单纯疱疹病毒是一病因[N];医药经济报;2001年
2 王启新;湿疹患儿须防单纯疱疹病毒[N];家庭医生报;2007年
3 记者 吴仲国;日首次公开招募研究人员[N];科技日报;2001年
4 ;单纯疱疹病毒的两种类型[N];大众卫生报;2003年
5 副主任医师 林利华;患生殖器疱疹勿烦躁[N];医药养生保健报;2009年
6 本报专稿 向平;一吻夺命英母大意“杀”女[N];世界报;2009年
7 戴军;口周疱疹乃病毒感染所致[N];医药养生保健报;2006年
8 杨伶;世卫称5亿多人染生殖器疱疹病毒[N];新华每日电讯;2008年
9 魏开敏;疱疹性口炎[N];卫生与生活报;2008年
10 记者 耿挺;蛋白质功能算出来[N];上海科技报;2007年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978