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《中国协和医科大学》 2003年
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自身免疫性内耳病动物模型的建立和凋亡及其相关蛋白在实验性自身免疫性内耳病的表达

柴亮  
【摘要】:自身免疫性内耳病(Autoimmune inner ear disease,AIED)是目前少数几种经恰当治疗可获得较好疗效的内耳病之一。因为尚无满意的检查方法以确定内耳自身免疫的进程,而且人的内耳疾病不能经活检诊断,故建立该病的动物模型对于揭示其发病机理有重要的实际意义。现有的AIED动物模型还有很多缺点。Fas-FasL信号系统通过介导凋亡在各种生物进程中起重要的作用,包括发育及组织稳态。Bcl-2可通过多种途径对凋亡进行有效的抑制。在器官特异性自身免疫病的组织破坏阶段,Fas-FasL的相互作用可能是共同的致病机制。 目的 1.建立一种自身免疫性内耳病的动物模型,应具有可重复性高,适于进行深入的免疫学分析的优点。以有助于进一步阐明AIED的发病机制、病理特点及内耳免疫反应进程。 2.了解凋亡与AIED发病机制的关系,明确凋亡及其相关分子Fas、FasL和Bcl-2在AIED小鼠的耳蜗中的表达,及其在AIED的产生和发展中的作用。 方法 1.提取豚鼠内耳膜迷路组织为内耳抗原(Inner ear antigens,IEAg),皮下注射等量IEAg与完全弗氏佐剂(Complete Freund's adjuvant,CFA)的乳剂,加用百日咳减毒活菌免疫近交系动物,C57BL/6小鼠,仅此一次,不再进行加强免疫。 2.ABR法检测反应阈的改变,ELISA法检测血清中抗IEAg抗体水平,光镜下对H.E.染色的切片进行内耳形态学改变的评价,免疫组化法鉴定内耳中浸润的炎性细胞。 3.提取小鼠耳蜗组织RNA,免疫前后耳蜗中Fas、FasL和Bcl-2 mRNA的变化由RT-PCR法半定量检测,以β-actin mRNA为内对照。 4.TUNEL法检测耳蜗组织内凋亡的表达,耳蜗中Fas,FasL和Bcl-2分子的表达变化由免疫组化法检测。 5.实验数据以均值±标准差表示,行方差分析或t检验等统计学处理。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R-332;R764

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【参考文献】
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