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内皮素-1、血管紧张素Ⅱ、心钠素对心脏细胞肥大与增殖的网络调节作用及机制的研究

油红文  
【摘要】:研究背景 心肌肥厚是高血压病常见的并发症,是心血管疾病的独立危险因素。心脏肥厚包括心肌细胞肥大、间质的成纤维细胞增殖和分泌细胞外基质的增多和沉积。除压力超负荷的机械刺激外,神经体液因子及血管活性物质在致心肌肥厚过程中的作用越来越引人注目。研究发现心脏细胞以内分泌/旁分泌方式分泌的血管活性物质如血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素(ET)、心钠素(ANP)、肾上腺髓质素等,在局部对心脏细胞肥大和增殖起重要的调节作用。血管活性物质除了自身对心脏细胞有调节作用外,它们的合成、分泌和功能还相互影响,使心脏的重塑活动处于多种物质的网络调控之下。既往的研究多是关注一种血管活性物质对一种心脏细胞肥大或增殖的调节作用,关于多种血管活性物质对心脏细胞的网络调节作用的研究甚少,这个领域还有许多问题尚未阐明。但是这方面的研究对更深入的了解心肌肥厚的发病机制和未来研发新的治疗药物都有很重要的意义。因此本研究拟探讨三种最主要的且对心血管系统有重要生理功能的血管活性多肽——AngⅡ、ET-1、ANP对心肌肥厚的网络调节作用并初步探讨其机制。 目的 本研究以培养的乳鼠心肌细胞和成纤维细胞为实验模型,观察AngⅡ、ET-1及ANP单独和联合应用对心肌细胞的肥大和成纤维细胞的增殖的作用及对自身含量的影响,并初步探讨其机制。 方法 1.原代培养新生SD大鼠心肌细胞,用10~(-9)~10~(-7)mol/L ET-1分别孵育24小时,以DNA合成增加、蛋白合成增加、总蛋白含量增加、ANP分泌增多、细胞数目无增加为细胞肥大指标,分别采用~3H-TdR掺入法测DNA合成、~3H-Leu掺入法测蛋白合成;Bradford法测细胞总蛋白含量;RT-PCR方法测ANPmRNA的表达;MTT法测活细胞数目,评价ET-1对心肌细胞肥大的作用;再用针对ET_AR、ET_BR的特异性拮抗剂BQ123、BQ788分别阻断ET_AR和ET_BR,用10~(-8)mol/L ET-1孵育心肌细胞,观察两种受体在ET-1促细胞肥大过程的作用。 2.培养的第2~3代新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用10~(-9)~10~(-7)mol/L ET-1分


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