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《中国协和医科大学》 2005年
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抗人乳头瘤病毒体外药效模型的探讨

吴剑波  
【摘要】:人乳头瘤病毒(HPV)可引起人类多种良恶性疾患。HPV16、18等高危型由于和宫颈癌等多种恶性肿瘤关系密切,研究较为深入;HPV6、11等低危型是引起尖锐湿疣与呼吸道乳头瘤病的主要病原,随着发病率的增加近年来也日益受到重视。HPV由于生活周期对上皮分化严格依赖,不能在常规的细胞培养体系中传代扩增,长期以来阻碍着人们对其研究的深入;而近年来组织培养与分子生物学技术的进步则为HPV的细胞模型研究注入了新的内容与可能性。本研究选择低危型HPV6、11为研究对象,以人永生化角质形成细胞HaCaT作为宿主细胞,通过转染及感染方式获取携带有HPVDNA的阳性细胞,并对相关感染标志进行检测,旨在在HPV体外研究领域进行初步尝试,为下一步HPV体外药效评价模型的建立及药物抗HPV活性的检测打下基础。全文具体分为两部分。 第一部分 HPV11基因组DNA对HaCaT细胞的转染与检测 目的 探讨应用转染与筛选技术获取稳定携带有HPV11基因组DNA的细胞的可能性;探索合适的HPV感染检测指标与方法。 方法 对含有pBR322.HPV11质粒的大肠杆菌培养扩增,然后进行质粒的提取与纯化,并用限制性内切酶BamHI切割下HPV11全长基因;低熔点琼脂糖回收后,用T4 DNA连接酶进行线状DNA的自身环化,再与PTK-neo质粒按比例混合,以Lipofectamine试剂共转染HaCaT细胞;最后通过G418筛选而得到阳性细胞克隆。将阳性克隆细胞合并与培养扩增后,用FQ-PCR及PRINS技术检测所得细胞内HPV11DNA的存在,用巢式RT—PCR技术检测HPV11 E1^4mRNA的表达,用免疫组化技术检测HPV衣壳抗原的表达。 结果 G418筛选约两周后,培养皿内即可见到对G418抵抗的阳性细胞克隆出现,其形态与普通HaCaT细胞无区别。FQ—PCR与PRINS方法均可在筛选后的HaCaT细胞中检测到HPV11DNA的存在。RT—PCR扩增产物行琼脂糖凝胶电泳可检测到特异性的628bp阳性条带。免疫组化染色未检测到HPV衣壳抗原表达。 结论 HPV11基因组DNA可通过脂质体转染法成功导入HaCaT细胞内,通
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R965

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王淼,陈连凤,许雪梅,王立良,陈建国,刘士德,司静懿,宋国兴;重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒诱导中和抗体[J];病毒学报;2003年01期
2 陆振华 ,田厚文;人类乳头瘤病毒(H~1PV)病毒样颗粒的研究进展[J];国外医学.病毒学分册;2002年04期
3 蔡萍;人乳头瘤病毒16型对细胞增殖、分化及凋亡的影响[J];国外医学.病毒学分册;2002年05期
4 张蓓;实时荧光定量PCR的研究进展及其应用[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2003年06期
5 吴元胜,范瑞强,禤国维,江光明,孙静;核酸荧光定量PCR检测“疣毒净”洗剂对体外人乳头瘤病毒清除作用的实验研究[J];实用中西医结合临床;2003年02期
6 蒋仁举,王泓;人乳头瘤病毒与细胞凋亡[J];微生物学免疫学进展;2004年01期
7 蔡有龄,谭淑珍,吴燕;中药“疣毒清”(Verrucout)对尖锐湿疣病毒(HPV)杀灭作用的实验研究[J];中国艾滋病性病;2002年02期
8 黄莺,王康敏,何长武,靳耀锋,强雷;人乳头瘤病毒6,11的原位检测[J];中国皮肤性病学杂志;2002年04期
9 邵椒青,许素玲,吴泽文,韩宝康,陈艳;荧光定量PCR检测人类乳头瘤病毒在尖锐湿疣中的应用[J];中国皮肤性病学杂志;2002年05期
10 范雪莉,李汉臣,党育平;人乳头瘤病毒与皮肤病[J];中国皮肤性病学杂志;2004年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年04期
2 程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
3 温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;NADH对二乙基亚硝胺所致L02人肝细胞株p53基因突变和c-erbB2基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
4 金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;ERCC1和XPD单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性的关系[J];癌变·畸变·突变;2010年05期
5 王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期
6 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期
7 陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期
8 葛宏华,肖亚中,姚建平;人心室肌球蛋白轻链1基因的克隆及其体外的表达与纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年06期
9 李泽友;中西医结合治疗尖锐湿疣的进展[J];安徽中医临床杂志;2003年02期
10 侯新东;盛桂莲;张桦;腊萍;;质粒DNA提取方法的探讨[J];安徽农学通报;2006年13期
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1 朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 韩金乐;贾继宗;李川;杨亮;何德磊;李娟;叶祥忠;李益民;;肠道病毒71抗原ELISA定量检测方法构建及其应用[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
3 徐波;张莉;李启云;王景会;姜媛媛;杨贞耐;;牛凝乳酶成熟肽基因在大肠杆菌中的表达[A];中国奶业协会年会论文集2008(下册)[C];2008年
4 刘冬光;廖娟红;于清龙;陈颖钰;陈焕春;郭爱珍;;融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用[A];中国奶业协会年会论文集2009(上册)[C];2009年
5 张海龙;田兆丰;董志;张晏如;张飞云;;多花黑麦草斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达[A];2010植物免疫机制研究及其调控研讨会论文集[C];2010年
6 闫云君;蔡勇;杨江科;;基于易错POR技术的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZO2的定向进化[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集(一)[C];2007年
7 李玫;廖宝文;;红树林湿地烷烃降解菌的分离筛选[A];第十三届中国科协年会第16分会场-沿海生态建设与城乡人居环境学术研讨会论文集[C];2011年
8 魏祥松;徐育云;丁显平;曾梅;;人精子染色体非整倍性PRINS基因诊断的研究[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年
9 郭奕斌;陈路明;孟亚仙;王晶晶;杜传书;潘敬新;;一个广东四川家庭的IDS基因新突变[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年
10 于占东;赵双宜;何启伟;王翠花;牟晋华;刘春香;;抗芜菁花叶病毒转基因大白菜的研究[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
2 姜淑贞;玉米赤霉烯酮对断奶仔猪的毒性初探及改性蒙脱石的脱毒效应研究[D];山东农业大学;2010年
3 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
4 杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 郭新军;拟黑多刺蚁肌细胞增强因子2与肌钙蛋白Ⅰ亚基基因的克隆及其在发育中的表达研究[D];陕西师范大学;2010年
7 生书晶;何首乌芪合酶基因(FmSTS)的克隆、鉴定及转化拟南芥研究[D];华南理工大学;2010年
8 陈汶;中国生殖器疣和子宫颈癌HPV感染型别流行病学研究[D];北京协和医学院;2010年
9 王蕾;单纯疱疹病毒Ⅰ型VP26蛋白在病毒感染过程中的分子生物学功能分析[D];北京协和医学院;2008年
10 梁东;苹果山梨醇代谢相关基因的分子特性研究[D];西北农林科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑毅;利用酵母双杂交技术研究流感病毒NS2蛋白与宿主蛋白的相互作用[D];华中农业大学;2010年
2 高红梅;ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响[D];华中农业大学;2010年
3 王树云;斑点叉尾鮰病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 汪艳杰;水稻polycomb基因家族甲基化状态初步检测[D];华中农业大学;2010年
5 王伟;恶臭假单胞菌表面展示细菌漆酶及对染料的脱色性能[D];华中农业大学;2010年
6 黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年
7 段龙川;产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2010年
8 龚瑞;粘附素ClfA和Cna对金黄色葡萄球菌乳腺炎的免疫保护研究[D];华中农业大学;2010年
9 刘源;猪胸膜肺炎放线杆菌双组分调控系统ΔnarQ/narP突变株构建及功能研究[D];华中农业大学;2010年
10 卢士强;甲型H1N1流感病毒NS1蛋白在大肠杆菌中的表达、抗体制备及在血清学检测中的应用[D];南京医科大学;2009年
【二级参考文献】
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1 洪少林,王家璧,李平川,周玲,司静懿,许雪梅,郭秀婵,曾毅;尖锐湿疣病变的人乳头瘤病毒6型L1序列多态性分析[J];病毒学报;2002年02期
2 范瑞强,褟国维,池凤好,李静;中药疣毒净治疗尖锐湿疣随机对照研究——附治疗前后血清IL-2水平的检测[J];中国医药学报;1999年02期
3 王群;男性尖锐湿疣患者尿样人类乳头瘤病毒DNA检测[J];国外医学(皮肤性病学分册);1999年01期
4 王淼,陈莲凤,宋国兴;外生殖器疣治疗现状与展望[J];临床皮肤科杂志;2002年03期
5 周平玉;尖锐湿疣的治疗进展[J];中国男科学杂志;2002年03期
6 范瑞强,池凤好;中药疣毒净制剂治疗尖锐湿疣的初步疗效观察[J];新中医;1997年09期
7 高素平,贾印峰,刘毅;用核酸荧光定量PCR技术检测尖锐湿疣HPV的研究[J];山东医药;2000年16期
8 陈元贵;紫草方治疗尖锐湿疣40例报告[J];山西临床医药;2000年08期
9 李峰,方伟岗,郑杰,由江峰,钟镐镐,衡万杰,吴秉铨;引物介导的原位标记技术在先天愚型诊断中的应用[J];中华病理学杂志;1998年05期
10 韩世范,王复梅,程金莲,王静萍,王海啸;尖锐湿疣患者疣体表面HPV DNA检测[J];中华皮肤科杂志;2000年03期
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1 周良鸿;;宫颈湿疣的超微形态研究[J];中日友好医院学报;1992年02期
2 时艳梅;叶红;肖长义;;宫颈癌变组织HPV DNA存在状态对病毒蛋白表达影响的研究[J];现代肿瘤医学;2009年04期
3 张利宁;高天祥;;人乳头瘤病毒DNA的限制性核酸内切酶分析[J];山东大学学报(医学版);1990年01期
4 沈冰,董小平,黎雪如,房益兰;分子杂交法检测女性尖锐湿疣中的人乳头瘤病毒DNA[J];西安交通大学学报(医学版);1992年03期
5 高孟;庄昉成;;人乳头瘤病毒及其疫苗的研究进展[J];浙江省医学科学院学报;2007年01期
6 张利宁;高天祥;孙晔萍;;人乳头瘤病毒形态发生学的初步探讨[J];首都医科大学学报;1989年04期
7 张煒;罗汉超;;人乳头瘤病毒及其致病性的研究进展[J];国际皮肤性病学杂志;1985年01期
8 叶正中;张玫瑰;冯婉玲;彭杰;;尖锐湿疣的超微结构观察与人乳头瘤病毒的检测[J];广州医学院学报;1993年01期
9 刘立鸿;汪凯;张富春;马正海;;人乳头瘤病毒(HPV)致癌机制研究进展[J];生命科学;2008年02期
10 邬素芳;易诚青;李静;李辅军;卢运萍;马丁;;含HPV16型反义E7基因的重组腺相关病毒rAAV-HPV16E7AS的包装、纯化及鉴定[J];中国生物制品学杂志;2007年05期
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1 夏明玉;朱文元;陆锦玉;范卫新;卢勤;陈雷;;外耳道乳头瘤超微结构和乳头瘤病毒DNA检测[A];第八次全国电子显微学会议论文摘要集(Ⅰ)[C];1994年
2 汤晓飞;欧阳喈;高木实;;成釉细胞瘤中人乳头瘤病毒HPV16和HPV18感染的检测[A];中华口腔医学会第七届全国口腔病理学术会议论文摘要汇编[C];2006年
3 王建捷;靳家玉;冯玲;郝薇;张玲;;人乳头瘤病毒负荷量与宫颈病变关系的研究[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年
4 李昆;司静懿;韩日才;王申五;张卫;宋国兴;刘世德;赵维敏;陈莲凤;贾丽萍;盛齐;麦永嫣;曾毅;谷淑燕;孙瑜;孟祥金;周宜男;王月珠;;人宫颈及外阴湿疣的病理及人乳头瘤病毒的形态发生学[A];第五次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1988年
5 蒋艺;吴洋;许宏岳;;尖锐湿疣患者治疗前后人乳头瘤病毒核酸的荧光定量分析[A];江苏省性学会第六次学术会议论文集[C];2006年
6 胡越;凌志强;刘洋;朱雪琼;;人乳头瘤病毒感染状态原发性宫颈癌细胞染色体DNA拷贝数变化特征[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年
7 张慧敏;章晓鹰;潘祥龙;徐平;;SYBR Green实时荧光PCR方法在检测广谱人乳头瘤病毒中的应用[A];2011全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2011年
8 张慧敏;章晓鹰;潘祥龙;徐平;;SYBR Green实时荧光PCR方法在检测广谱人乳头瘤病毒中的应用[A];2011全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2011年
9 司静懿;李昆;张卫;韩日才;陈莲凤;赵维敏;宋国兴;刘世德;贾丽萍;麦永嫣;曾毅;;基因工程重组人乳头瘤病毒亚基因致癌的分子生物学及超微结构研究[A];第六次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1990年
10 杨建林;柳长柏;李丹莉;;人乳头瘤病毒16型E2融合钙网蛋白抗肿瘤的实验研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
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1 田红 记者 胥茜;论文无创新 一票能否决[N];中国教育报;2005年
2 王握文周珞晶 吴丹;11篇全国优秀博士学位论文的启示[N];科技日报;2008年
3 记者 欧阳春艳;全国百篇优秀博士学位论文评选揭晓[N];长江日报;2005年
4 本报特约通讯员  汤宏;播撒创新的种子[N];解放军报;2006年
5 学位办;研究生院奖励优秀博士学位论文[N];中国社会科学院院报;2008年
6 徐宜军;哈工大博士学位论文实行匿名评议制度[N];新华每日电讯;2005年
7 周玲玲;2007年全国优秀博士学位论文评选结果公布[N];中国教育报;2007年
8 王曼;充分利用院图书馆特色文献信息资源[N];中国社会科学院院报;2005年
9 张中桥;肺鳞癌与人乳头瘤病毒感染有关[N];中国医药报;2006年
10 记者 王坤宁;国图馆藏博士学位论文陆续结集[N];中国新闻出版报;2007年
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1 吴剑波;抗人乳头瘤病毒体外药效模型的探讨[D];中国协和医科大学;2005年
2 车雅敏;尖锐湿疣复发机制的研究[D];中国协和医科大学;2005年
3 陈芳;重组腺病毒载体介导p16~(INK4A)和p14~(ARF)的基因导入对人胰腺癌细胞生长影响的研究[D];中国协和医科大学;2005年
4 吴娟;重组腺病毒介导HAV结构蛋白基因表达及其表达产物的免疫学性质研究[D];中国协和医科大学;2002年
5 潘建刚;基因重组TK-IRES-Endostatin腺相关病毒双靶点治疗膀胱癌的实验研究[D];天津医科大学;2007年
6 卫积书;MUC4多表位嵌合疫苗诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外杀伤功能的实验研究[D];南京医科大学;2008年
7 梁海乾;骨桥蛋白在大鼠脑创伤中的作用研究[D];天津医科大学;2008年
8 李晖;APOBEC3G转录调控机制研究[D];南方医科大学;2009年
9 王淼;人乳头瘤病毒6型衣壳蛋白L1和L2基因的克隆、表达及病毒样颗粒的装配与免疫学分析[D];中国协和医科大学;2002年
10 张明策;人乳头瘤病毒11型L1基因的克隆、表达与表达产物的免疫学分析[D];中国协和医科大学;2001年
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1 卢五迅;人乳头瘤病毒假病毒中和模型的建立和应用[D];厦门大学;2006年
2 李菁菁;人乳头瘤病毒16型E2基因的克隆、表达及鉴定[D];新疆大学;2008年
3 郑舟;人乳头瘤病毒假病毒制备方法的优化以及高通量中和实验检测系统的建立[D];厦门大学;2008年
4 袁太宁;HPV外壳蛋白L1的B细胞共同表位短肽免疫学特性的研究[D];三峡大学;2005年
5 计雄飞;人乳头瘤病毒6b型L1基因的克隆及真核表达[D];暨南大学;2006年
6 佟惠春;人乳头瘤病毒11型L1基因原核表达系统的构建及鉴定[D];天津医科大学;2007年
7 牛淑芳;人乳头瘤病毒与宫颈病变的相关研究[D];山西医科大学;2007年
8 殷董;人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达[D];暨南大学;2007年
9 张东红;人乳头瘤病毒在食管癌中的感染及整合状况研究[D];汕头大学;2008年
10 邵为荣;重组人干扰素α2b阴道泡腾片对宫颈糜烂治疗的相关病毒学实验研究[D];吉林大学;2006年
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