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《中国协和医科大学》 2005年
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组织工程动脉血管组织构建的初步实验研究

刘庆阳  
【摘要】:[目的] 1)运用细胞培养技术获取犬的血管平滑肌细胞,并培养扩增,为组织工程动脉的构建提供种子细胞;2)评价bFGF调控犬血管平滑肌细胞增殖的合理剂量,及其对平滑肌细胞在生物可降解材料上生长的影响;3)对新合成的生物可降解材料进行细胞毒性及生物相容性评价,探讨它们作为组织工程动脉血管支架材料的可行性;4)进行组织工程动脉组织构建的初步实验,为最终获得组织工程动脉移植体并应用到临床奠定实验基础。 [方法] 1)采用组织贴块法培养犬的血管平滑肌细胞,并进行细胞传代培养。观察细胞的形态、生长情况,进行免疫组织化学染色,及电镜检测。了解平滑肌细胞的纯度、细胞形态学特征及细胞的增殖生长情况。 2)对培养的平滑肌细胞给予不同剂量的bFGF,作用不同时间后应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测,比较不同剂量bFGF组之间的平滑肌细胞增殖情况。用含3ng/mL bFGF的培养液在生物可降解载体上培养平滑肌细胞,并设对照组,作用不同时间后比较两组间平滑肌细胞增殖的情况。 3)应用L929细胞株进行生长抑制实验,结合MTT法分别对几种新合成支架材料的细胞毒性进行评价。通过测定接触角比较几种材料的亲水性;将犬的主动脉平滑肌细胞接种于支架材料上,MTT法测定其相对增殖率,比较细胞在不同材料支架上的增殖情况,并应用FITC荧光染色和扫描电镜观察细胞在支架上的生长情况。 4)将平滑肌细胞种植于胶原膜上,培养13天后形成多层生长的平滑肌细胞层,再将内皮细胞接种在其表面培养两天,形成单层内皮细胞层和多层平滑肌层组成的血管组织。 [结果] 1)通过常规的组织贴块法及酶消化法即可获得高纯度的平滑肌细胞。光镜下细胞具有典型的形态学特征;免疫组化染色显示平滑肌细胞α-肌动蛋白抗体染色阳性。电镜提示平滑肌细胞具有典型细胞形态学特征。 2)使用MTT法测定,不同浓度bFGF组的平滑肌细胞的吸光度值均高于无bFGF组(P<0.05),3ng/mL浓度以上组同1ng/mL组之间有显著差异(P<0.05),应用3ng/mL bFGF的平滑肌细胞在PEGT/PBT载体上的增殖明显高于对照组(P<0.05)。 3)水凝胶、PHBV、PU、PHBV和PU共混体的细胞毒性均在0-Ⅰ级。平滑肌细胞可以在T20、PHBV、PEGT/PBT载体材料上黏附生长,
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R318

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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