收藏本站
《中国协和医科大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

氧浓度变化对铜绿假单胞菌生物被膜生成的影响

崔冬清  
【摘要】: 背景: 铜绿假单胞菌可以引起各种急慢性感染,并且由该菌引起的院内获得性感染的发病率远高于社区获得性感染,其原因目前并未完全明确。在众多学说中,目前认为产生生物被膜是铜绿假单胞菌耐药和躲避人体免疫系统攻击的重要手段之一。藻酸盐是生物被膜的重要组成成分,在生物被膜病的发病机制中有重要作用。氧疗是临床上常用的治疗方法,目前还没有关于高氧如何影响铜绿假单胞菌产生生物被膜的报道。密度感应系统是细菌协调群体生物学效应的一种有效手段,对于细菌毒力、耐药性等方面有重要影响,但是否在生成生物被膜这种群体行为中起调控作用目前也争议颇多。Ⅲ型分泌系统是铜绿假单胞菌主要的毒力因素之一,在急性感染中发挥重要作用,对于Ⅲ型分泌系统和生物被膜形成这两种生物学行为的关系学术界也有一些分歧。 目的: 观察氧环境变化对铜绿假单胞菌产生生物被膜及藻酸盐的影响,并探讨密度感应系统中Las系统和Rhl系统在生物被膜调控中的作用、以及Ⅲ型分泌系统表达和生物被膜形成的相互关系。 方法: 1.随机扩增DNA多态性基因分型法对23株铜绿假单胞菌临床株进行基因型鉴定,以区别是否有来源于同一克隆的菌株。 2.23株基因型不同的铜绿假单胞菌临床株分别在无氧(0%氧浓度)、低氧(10%)、正常氧(20%)、高氧(30%、40%、50%、60%)七个不同的氧浓度下连续培养3天。用结晶紫染色法检测生物被膜产生量;对-羟基联苯法测定藻酸盐产生量。 3.硝酸银染色法观察标准菌株ATCC27853在不同氧浓度环境下产胞外多糖的时间窗。 4.观察ATCC27853在不同氧浓度环境下生长曲线的差异。 5.采用实时定量PCR测定23株临床菌株在不同氧浓度环境下密度感应系统中信号分子合成酶调控基因LasⅠ和RhlⅠ的表达。 6.Western blot方法观察23株临床菌株在不同氧浓度环境下分泌Ⅲ型分泌系统的代表毒素——胞外酶ExoS的情况。 结果: 1.基因分型显示23株菌株均能产生指纹图谱,分型率为100%。根据所得DNA片段数目及大小对铜绿假单胞菌菌株进行相似度比较,当使用随机引物A时,菌株1、3、6、20、22的DNA扩增条带相似,菌株4和23、8和21分别相似;其余菌株条带均不相同;再采用引物B对菌株1、3、4、6、8、20、21、22、23 DNA进行随机扩增,结果显示扩增条带均不相同。 2.检测23株临床株分别在七种氧浓度环境下培养3天的生物被膜产生量,结果表明在氧浓度为50%时生物被膜产生量达到最高值(4.05 OD/mg/ml),趋势性分析表明随着氧浓度的升高生物被膜产生量逐渐上升,相关性分析显示生物被膜产生量与氧浓度成正相关,R为0.455,P为0.000。 3.测定23株临床株分别在七种氧浓度环境下培养3天的藻酸盐生成量,结果表明藻酸盐产生量是在氧浓度为60%的条件下达到最高值(85.22 ug/mg蛋白),趋势性分析表明随着氧浓度的升高藻酸盐产生量逐渐上升,相关性分析显示藻酸盐产生量与氧浓度成正相关,R为0.367,P为0.000。 4.银染法观察ATCC27853产生胞外多糖的时间窗,结果显示在氧浓度分别为40%、50%、60%时,菌株培养一小时即可出现胞外多糖;氧浓度分别为20%、30%时,菌株需培养2小时以上才出现胞外多糖;氧浓度为10%时,胞外多糖最早出现时间为4小时;无氧条件下,菌株培养8小时出现胞外多糖。 5.ATCC27853生长曲线结果显示当氧浓度分别为0%、10%、20%时,菌株培养3小时开始由延迟期进入对数生长期;氧浓度为30%时,培养2小时进入对数生长期;氧浓度为40%、50%、60%时,菌株培养1小时即进入对数生长期。 6.实时定量PCR结果显示相关性分析未见LasⅠ、RhlⅠ的表达和氧浓度(R分别为0.025和-0.044,P大于0.05)、对应菌株生物被膜产生量(R分别为0.001和0.11,P大于0.05)、藻酸盐产生量(R分别为0.029和0.193,P大于0.05)有统计学意义。 7.Western blot结果表明菌株1、2、3、4、5、7、8、9、10、15、16、19、23共13株菌在氧浓度为20%条件下分泌胞外酶ExoS;当氧浓度为10%时,只有菌株15、16能够分泌ExoS;当氧浓度为30%时,菌株1、2、4、5、9、10、15能够分泌ExoS;氧浓度为0%、40%、50%、60%的条件下均未见菌株分泌ExoS。 结论: 1.铜绿假单胞菌在高氧环境下更容易产生生物被膜,且随着环境氧浓度的升高,生物被膜和藻酸盐产生量增加,表明高氧促进了铜绿假单胞菌产生生物被膜的能力,从而有利于铜绿假单胞菌在人体内的耐药和寄植,不利于肌体对病原菌的清除和抗生素杀菌作用的发挥,所以针对有铜绿假单胞菌感染高危因素的患者应该避免过高浓度的氧疗。 2.在不同氧浓度环境下虽然铜绿假单胞菌产生生物被膜的能力有显著差异,但是生物被膜形成的早期密度感应系统中Las系统和Rhl系统关键基因表达无明显趋势性变化,因此Las系统和Rhl系统可能在生物被膜形成早期阶段因为菌群数量处于低水平而未参与生物被膜的调控过程。 3.随着氧浓度的升高铜绿假单胞菌产生生物被膜增多,但是Ⅲ型分泌系统的代表毒素胞外酶ExoS分泌下调,表明铜绿假单胞菌生物被膜产生增多的同时Ⅲ型分泌系统的表达下调,侵袭力下降。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R516

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张秀芳;孔东辉;柴杰;;172株铜绿假单胞菌的临床分布及耐药性分析[J];检验医学与临床;2011年13期
2 梁群;孙晖;蒋希成;;大蒜提取液对铜绿假单胞菌LAS基因转录水平影响的研究[J];中医药信息;2011年04期
3 Ishii Y;Eto M;Mano Y;王鹏;王明贵;;新型金属β内酰胺酶抑制剂ME1071体外增强碳青霉烯类抗生素对产金属β内酰胺酶铜绿假单胞菌的抗菌活性研究[J];中国感染与化疗杂志;2011年04期
4 卢锦萍;罗征秀;罗健;刘恩梅;符州;;儿童铜绿假单胞菌医院获得性肺炎临床特点及危险因素分析[J];临床儿科杂志;2011年08期
5 陈亚芳;葛称;;2008—2010年我院铜绿假单胞菌临床分布及耐药性分析[J];中国医院用药评价与分析;2011年08期
6 徐红萍;李红;徐笛;;铜绿假单胞茵分布及耐药性分析[J];内蒙古中医药;2010年13期
7 徐红萍;李红;徐笛;;铜绿假单胞菌分布及耐药性分析[J];内蒙古中医药;2010年17期
8 童郁;周铁丽;费静娴;侯佳惠;;铜绿假单胞菌ESBLs基因分布及同源性分析[J];中国现代医生;2011年18期
9 温从丛;朱晓娜;胡国新;葛仁山;李庆兴;;医院内铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的5年耐药性变化[J];中国临床药学杂志;2011年03期
10 冯东霞;董方;宋文琪;徐樨巍;;铜绿假单胞菌的分离情况及耐药性分析[J];新乡医学院学报;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周天恩;何志捷;邓义军;黄子通;蒋龙元;;ICU铜绿假单胞菌感染的药物敏感监测[A];中华医学会急诊医学分会第十次全国复苏中毒学术论文交流会论文汇编[C];2004年
2 陈亚红;姚婉贞;刘振英;张晓伟;;2000至2005年耐亚胺培南铜绿假单胞菌的变迁及耐药性[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
3 张丽霞;张立;杜佰风;冯爽;;162株铜绿假单胞菌的耐药性分析[A];中华医学会第11届全国内科学术会议论文汇编[C];2007年
4 唐爱琴;王小娜;范玲玲;;86株铜绿假单胞菌耐药性分析[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
5 沈继录;朱德妹;;耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌多药外排泵机制研究[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
6 何晓锋;曹晋桂;张虎;马文杰;吴镝;焦力群;王敏;方鉴;;铜绿假单胞菌的耐药性变化及其DNA多态性分析[A];中国医院协会第十五届全国医院感染管理学术年会资料汇编[C];2008年
7 窦懿;;烧伤病房11年抗菌药物使用与铜绿假单胞菌耐药率变化[A];全国烧伤早期处理专题研讨会论文集[C];2002年
8 殷少军;何礼贤;瞿介明;欧周罗;胡必杰;王葆青;陈雪华;;免疫受损宿主铜绿假单胞菌肺部感染时趋化因子基因表达研究[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
9 詹毅;余兰;;老年病科铜绿假单胞菌医院感染危险因素调查[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
10 倪明;田德英;宋佩辉;余冰;陈红云;李霞;;DNaseI对非黏液型和黏液型铜绿假单胞菌生物膜的影响[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王振岭;铜绿假单胞菌耐药问题严重[N];中国医药报;2002年
2 李曙平;铜绿假单胞菌 老年病房的主要致病菌[N];中国中医药报;2003年
3 天津医科大学总医院检验科 胡志东;关注铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药[N];健康报;2009年
4 小雄;有多少可以通过?[N];中国包装报;2011年
5 林红燕 叶晓光;医院革兰阴性杆菌耐药变化规律研究[N];中国中医药报;2003年
6 驻沪记者 张莉;先声药业重拳出击高端抗生素[N];医药经济报;2008年
7 宫高;断绝肿瘤“粮草”[N];卫生与生活报;2003年
8 北京朝阳医院 张洪玉教授;生物被膜病在作怪[N];健康报;2000年
9 张洁;鲜氧多空调 让家回归自然[N];中国信息报;2003年
10 王选锭;呼吸机相关肺炎的抗生素治疗(二)[N];中国中医药报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 崔冬清;氧浓度变化对铜绿假单胞菌生物被膜生成的影响[D];中国协和医科大学;2009年
2 陈林;铜绿假单胞菌内在耐药性相关基因的筛选及研究[D];西北大学;2010年
3 陈一强;绿原酸对铜绿假单胞菌生物膜抑制作用及其机制的体内外研究[D];广西医科大学;2010年
4 王杰;中国部分地区碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌耐药机制及分子流行病学研究[D];浙江大学;2011年
5 俞莺;常压低温等离子体对小鼠伤口定植绿脓杆菌的作用研究[D];华中科技大学;2011年
6 陈媛媛;粘附分子MAdCAM-1/VCAM-1在奶牛乳腺炎作用中的初步研究[D];吉林大学;2012年
7 王平;铜绿假单胞菌临床分离株致病特征及Quorum Sensing系统调控机制研究[D];华中科技大学;2010年
8 魏殿军;临床分离菌株耐药性分析及铜绿假单胞菌耐药机制的探讨[D];天津医科大学;2004年
9 胡洪波;机械通气新生儿铜绿假单胞菌定植或/和感染的流行病学研究[D];华中科技大学;2010年
10 叶露;pvdQ基因在人肠道上皮细胞中的表达作用以及对铜绿假单胞菌致病性影响的研究[D];华中科技大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 魏志华;多药耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排系统的耐药作用及其调控基因mexR的突变情况[D];安徽医科大学;2010年
2 李良;铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM与碳青霉烯类药物耐药的关系研究[D];山西医科大学;2011年
3 刘加彤;ICU耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及危险因素分析[D];南京医科大学;2011年
4 林丽华;大蒜素对铜绿假单胞菌生物被膜的干预作用及机制初步研究[D];重庆医科大学;2009年
5 段佳丽;铜绿假单胞菌中影响RsmA调节基因的筛选及调节途径研究[D];西北大学;2011年
6 汪浙炯;PhoQ/PhoP与外膜蛋白OprH在铜绿假单胞菌对氨基糖甙类抗生素耐药性中的相互关系和作用机制[D];浙江大学;2011年
7 曾祥萍;AL-1单用及联合用药对铜绿假单胞菌生物膜形成的抑制作用及其作用机理研究[D];暨南大学;2011年
8 郭生玉;铜绿假单胞菌生物被膜肺感染模型的建立及抗生素干预的研究[D];中国医科大学;2002年
9 吴雷;医院感染铜绿假单胞菌肺炎细菌耐药性及预后分析[D];南方医科大学;2010年
10 章喻军;铜绿假单胞菌外膜耐药和保护原功能蛋白组学的研究[D];厦门大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026