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人工血管携腺病毒介导血管内皮生长因子基因对内皮细胞生长的影响

蒋大铭  
【摘要】: 背景: 小口径人工血管移植术后出现内膜增生和血栓形成,导致通畅率不理想,主要是因为人工血管表面缺乏完整的内皮层。目前已经证实通过人工血管表面快速内皮化可以减少再狭窄的发生。人工血管内皮化的研究已经从种植内皮细胞进展到基因分子水平。血管内皮生长因子(VEGF)是诱导血管内皮细胞生长作用最强、特异性最高的一种生长因子。VEGF蛋白涂层和基因质粒转染都有其明显的缺陷。而腺病毒作为载体转染取得了很好的效果。 目的: 观察人工血管携带腺病毒介导的VEGF基因转染内皮细胞的效果、VEGF基因和蛋白的表达以及对内皮细胞生长的影响。 材料和方法: 1.ad5-EGFP转染EAhy926转染率的测定。 2.人工血管携带腺病毒在静水中的释放情况。 3.人工血管上内皮细胞的贴附情况。 4.ad5-VEGF165-IRES-EGFP转染EAhy926,RT-PCR半定量检测VEGF基因水平表达。 5.人工血管携带ad5-VEGF165-IRES-EGFP转染EAhy926,ELISA法检测VEGF蛋白水平表达。 6.人工血管携带ad5-VEGF165-IRES-EGFP转染EAhy926,MTT法检测对内皮细胞生长的影响。 结果: 1.ad5转染率随MOI的增加而增加,MOI 200时达到87.3%。 2.人工血管上消化下来发荧光的细胞在最初的1h内,下降最为明显。稀释液中基本没有发荧光的细胞。 3.电镜显示内皮细胞贴附在人工血管上。 4.ad5-VEGF165转染组RT-PCR有VEGF基因的表达,第3天比第1天表达强烈。对照组没有表达。 5.ad5-VEGF165转染组上清液中有VEGF蛋白的表达,呈上升趋势第5天达峰后开始下降。对照组没有表达。 6.ad5-VEGF165转染组OD值呈快速上升趋势,对照组上升缓慢。 结论: 1.ad5转染EAhy926的最适MOI为200。 2.人工血管上携带的病毒静水中能在人工血管上保留1h左右,这是一个逐渐释放的过程,而不是瞬时释放。 3.内皮细胞能够附着在人工血管上。 4.ad5-VEGF165-IRES-EGFP能转染EAhy926,hVEGF165基因水平成功表达。 5.人工血管携带ad5-VEGF165-IRES-EGFP能转染EAhy926,hVEGF165蛋白水平成功表达 6.人工血管携带ad5-VEGF165-IRES-EGFP能促进内皮细胞的增殖。


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