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《中国协和医科大学》 2010年
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低剂量棉酚与甾体激素联合用药对大鼠睾丸Cdc25A、cyclin B1及AR蛋白表达的影响

张凤枝  
【摘要】: 本实验采用大鼠喂服棉酚和甾体激素联合用药方式[棉酚12.5mg/(kg·d)去氧孕烯125μg/(kg·d)+炔雌醇25μg/(kg·d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg·d)],与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察Cdc25A、cyclin B1及AR蛋白表达的变化,进而了解低剂量棉酚与甾体激素联合应用(棉甾联合用药)对大鼠睾丸Cdc25A、cyclinB1及AR蛋白表达的影响。 Cdc25A免疫组织化学显示,在从精原细胞转变到前细线期精母细胞的过程中,Cdc25A的阳性部位出现在细胞核;进入粗线期精母细胞之后到双线期精母细胞这一阶段,Cdc25A的阳性定位在细胞质中;圆形精子细胞内的Cdc25A主要集中在顶体部位表达。用药6周时,棉甾联合用药组Cdc25A在顶体和间质中的表达较对照组减弱,均有显著性差异(P0.05);用药8周和10周时,Cdc25A在同一时间点间质和顶体的表达趋势与用药6周时相同。用药8周时,棉甾联合用药组Cdc25A在精母细胞中表达较对照组增强。Western blotting结果显示,棉甾联合用药组大鼠睾丸组织的总蛋白中Cdc25A的表达量呈上升趋势,与对照组的变化趋势相反。 Cyclin B1免疫组化结果显示其主要定位在大鼠睾丸组织的间质细胞和圆形精子细胞中。棉甾联合用药组中cyclin B1在间质细胞中的表达量明显降低(P0.05),但在圆形精子细胞中的表达量没有明显改变。Western blotting结果显示,棉甾联合用药组大鼠睾丸组织总蛋白中cyclin B1的含量与对照组没有显著差异。 AR免疫组化结果显示其定位于大鼠睾丸组织的细线期和偶线期精母细胞核、11期精子头部以及间质细胞胞质中。棉甾联合用药组间质细胞的阳性出现在细胞核。 综上所述,Cdc25A定位于正常大鼠睾丸精母细胞和圆形精子细胞的不同部位,表明其在精子发生过程中发挥重要作用。Cdc25A在圆形精子细胞顶体部位的大量表达提示Cdc25A与顶体的形成有关。低剂量棉酚与甾体激素联合用药使Cdc25A在各部位的表达趋势改变,说明棉甾联合用药对精子发生减数分裂过程中Cdc25A功能的正常发挥产生潜在影响。Cyclin B1定位于大鼠睾丸组织的间质细胞和圆形精子细胞中,棉甾联合用药组中cyclin B1的变化结果证实棉甾联合用药明显影响间质细胞的功能,而对精子发生过程中cyclin B1的功能发挥没有产生直接影响。检测AR的蛋白表达水平,发现棉甾联合用药影响间质细胞中AR的功能状态,但对AR在细线期和偶线期精母细胞中的调节作用没有显著影响。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R965

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【参考文献】
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