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《中国协和医科大学》 2010年
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遗传性扩张型心肌病LMNA基因突变的致病机理研究

孙莉萍  
【摘要】: 核纤层蛋白基因突变可以引起扩张型心肌病,其特点是以房室传导阻滞为首发症状,心脏扩张症状出现迟于电生理异常;患者猝死率高,死因常为恶性心律失常。其发病机制现在尚不清楚,本研究从分子电生理机制方面探讨传导阻滞首发的原因,为疾病表型的发生机理提供一个可能的假说。 第一部分遗传性扩张型心肌病LMNA基因突变体表达载体的构建 目的:构建遗传性扩张型心肌病LMNA基因E82K、R644C、N195K突变体表达载体。方法:利用快速PCR定点突变技术,设计一对引物(包含预定的突变),通过PCR扩增出含突变位点的质粒,然后转化到超级感受态细胞中,用碱裂解法抽提质粒,进行测序鉴定,得到构建遗传性扩张型心肌病LMNA E82K、R644C、N195K突变体HEK293细胞异源表达载体;通过测序验证突变的正确性。结果:测序验证我们成功构建了遗传性扩张型心肌病LMNA基因E82K、R644C、N195K突变体表达载体。结论:成功构建表达载体为下一步研究奠定基础。 第二部分致遗传性扩张型心肌病房室伴传导阻滞的核纤层蛋白基因突变下调钠电流密度 目的:传导阻滞和恶性心律失常常与钠通道障碍有关。因此,本部分研究核纤层蛋白基因突变对钠通道功能的影响。方法:采用聚合酶链反应法制备相关LMNA突变体:E82K、R644C和N195K。将突变和野生的LMNA突变体和SCN5A的cDNA共转到HEK293细胞,应用全细胞膜片钳技术记录通道电流;利用实时定量RT-PCR和Western blot分析SCN5A基因表达水平。结果:相比于野生型,LMNA E82K明显降低HEK293细胞钠电流密度LMNA(86.19±9.36pA/pF,n=30 vs.155.73±19.09pA/pF,n=47;p=0.001),而LMNA R644C和N195K对此无明显影响。LMNA突变体不影响SCN5A的转录水平,但是LMNA E82K会抑制SCN5A蛋白表达,幅度达到30%。其他两个突变对蛋白表达水平并无影响。结论:核纤层蛋白导致的钠电流密度减小可能是核纤层蛋白突变致心脏传导阻滞的机制之一,它通过抑制蛋白表达水平抑制电流,而不影响转录水平;但它并非是唯一机制,LMNA N195K可能通过其它机制引起临床上传导阻滞的疾病表型。 第三部分致遗传性扩张型心肌病伴房室传导阻滞的核纤层蛋白基因突变引起缝隙连接43重构 目的:核纤层蛋白基因突变引起的扩张型心肌病的特点是以房室传导阻滞为首发症状,心脏扩张症状出现较迟。这种疾病表型与缝隙链接蛋白异常引起的心脏疾病相似。本部分研究核纤层蛋白基因突变对缝隙链接蛋白的影响。方法:利用野生和突变(E82K和R644C)的核纤层蛋白基因转染乳鼠心肌细胞,通过共聚焦显微镜和蛋白印迹分析探索缝隙链接改变。结果:E82K突变使缝隙链接蛋白43的表达量减少40%,其定位也发生改变,由细胞连接处转移到细胞内;但该突变对缝隙链接蛋白40影响不显著。而R644C突变对缝隙链接蛋白43和40都无明显影响。结论:核纤层蛋白基因突变导致的缝隙链接蛋白表达和定位的改变可能是导致心脏传导阻滞表现的机制之一。
【学位授予单位】:中国协和医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R542.2

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 宋书娟,章远志,Nanbert ZHONG;核纤层蛋白病——一个基因,多种疾病[J];北京大学学报(医学版);2005年01期
2 霍丽蓉;钟南;;A型核纤层蛋白——多种结合蛋白共同的“脚手架”[J];国际遗传学杂志;2006年04期
3 叶冬梅;赵琳;;扩张型心肌病各类心衰的心律失常特点[J];时珍国医国药;2006年12期
4 王虎;核纤层蛋白Lamins的结构、功能及相关疾病的研究[J];中国分子心脏病学杂志;2002年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 霍丽蓉;钟南;;A型核纤层蛋白——多种结合蛋白共同的“脚手架”[J];国际遗传学杂志;2006年04期
2 邢德广;王军;王运杰;欧绍武;;电压-门控Na~+通道在神经系统中的分布及与胶质瘤的关系[J];解剖科学进展;2013年04期
3 蔡滨欣;郭玉峰;张智;张黎明;;作用于电压门控Na~+通道的海洋生物毒素[J];中国生化药物杂志;2009年06期
4 高春海;刘新光;周中军;;A型核纤层蛋白的研究进展[J];生理科学进展;2009年03期
5 王军;欧绍武;王运杰;宗志红;;电压-门控Na~+通道α亚单位Nav1·5[J];中国生物化学与分子生物学报;2008年04期
6 邢德广;王军;王运杰;欧绍武;丁大领;管格非;仇波;;电压-门控钠离子通道Nav1.5与肿瘤关系研究进展[J];现代肿瘤医学;2013年11期
7 马延超;许寿生;周越;王瑞元;;核纤层蛋白Lamin A的结构及功能和代谢特征[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年46期
8 鞠莉;张淑芝;赵苒;姚耿东;;氢醌刺激后人肝细胞蛋白质谱表达的变化[J];中华劳动卫生职业病杂志;2006年11期
9 谢薇;梁清华;杨波;蔡颖;何金华;关勇军;左晓霞;;胶原诱导性关节炎大鼠滑膜双向凝胶电泳图谱建立及差异分析[J];中国免疫学杂志;2007年03期
10 戴慧蓉;李莉;;心肌梗死基因学研究进展[J];中华临床医师杂志(电子版);2013年07期
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 李保应;葡萄子原花青素对糖尿病大鼠主动脉保护机制的研究[D];山东大学;2008年
2 高瑞;电压门控钠通道亚型Nav1.5在卵巢癌中功能性表达的意义[D];华中科技大学;2009年
3 王军;人脑组织Nav1.5 Na~+通道编码基因的克隆及表达分析[D];中国医科大学;2010年
4 孙德光;蛋白磷酸化检测技术的建立及其在肝细胞肝癌中的应用研究[D];大连医科大学;2010年
5 罗成;先天性心脏病伴肢体畸形相关基因突变分析和拷贝数变异研究[D];中南大学;2012年
6 赵振营;清肺消炎丸及有效成分缓解哮喘的系统生物学研究[D];南开大学;2013年
7 邓文帅;大鼠丘脑底核HCN通道的电生理学及行为学研究[D];青岛大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王华;超微通阳调心方对阿霉素所致扩张型心肌病大鼠BNP及细胞凋亡因子影响[D];湖南中医药大学;2010年
2 成利霞;肢带型肌营养不良的临床及肌肉病理特点分析[D];吉林大学;2011年
3 赵有龙;镇痛抗肿瘤肽AGAP对人脑胶质瘤细胞SHG-44增殖和迁移的抑制作用[D];南京师范大学;2011年
4 鞠莉;氢醌对L-02型人正常肝细胞蛋白质表达谱的影响[D];浙江大学;2006年
5 谢薇;痹肿消汤干预胶原诱导性关节炎大鼠的差异蛋白质组学分析[D];中南大学;2007年
6 赵艳敏;1.两种蜘蛛多肽毒素诱饵载体的构建及初步鉴定 2.电压门控钠离子通道嵌合体的构建以及生理活性的检测[D];湖南师范大学;2010年
7 蔡滨欣;发形霞水母触手提取物对大鼠离体心脏和血管的影响及机理研究[D];第二军医大学;2010年
8 汤冬娥;基于iTRAQ结合质谱技术在狼疮性肾炎肾组织中的差异蛋白质组研究[D];广西师范大学;2012年
9 孙晓宇;应用蛋白质组学技术筛选胃癌细胞差异表达蛋白[D];泰山医学院;2012年
10 付芬芬;SCN4B基因变异与心房颤动的遗传学研究[D];华中科技大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 宋书娟,章远志,Nanbert ZHONG;核纤层蛋白病——一个基因,多种疾病[J];北京大学学报(医学版);2005年01期
2 蔡军;充血性心力衰竭伴发室性心律失常的发生机制及有关药物治疗[J];中国心脏起搏与心电生理杂志;2002年05期
3 张修伟,杨英珍,王齐冰,陈瑞珍,何梅先,童步高,蔡乃绳,李高平,沈学东,陈灏珠;扩张型心肌病102例临床分析[J];中华心血管病杂志;2001年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜惠荣;扩张型心肌病的心电图特征[J];实用心电学杂志;1995年04期
2 王东,崔景晶,高云秀,张爱红;扩张型心肌病的临床鉴别分析[J];齐齐哈尔医学院学报;2005年01期
3 宋治远;;缺血性心肌病的诊断和鉴别诊断[J];中国医师进修杂志;2006年28期
4 张静;郑兴;;核纤层蛋白基因及其致扩张型心肌病的研究进展[J];实用医药杂志;2008年02期
5 畅芳叶;;实时三维超声心动图在扩张型心肌病中的诊断价值[J];山西医药杂志(下半月刊);2009年12期
6 余希文;吴宁波;;茯苓杏仁甘草汤加味配合西药治疗扩张型心肌病58例[J];湖北民族学院学报(医学版);2010年03期
7 苏代泉;;特发性扩张型心肌病的室性心律失常[J];心血管病学进展;1985年01期
8 刘建华;程祖亨;;酷似心包病变的扩张型心肌病一例报告[J];新疆医科大学学报;1987年02期
9 章冬琴;孙经荣;周永明;;充血性扩张型心肌病一家系5例报告[J];临床内科杂志;1988年02期
10 马壮;;继发于溶血性尿毒综合征的扩张型心肌病[J];国际泌尿系统杂志;1988年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙敏;田家玮;姜双全;何宁;;应用QTVI技术评价阿霉素所致兔扩张型心肌病模型的实验研究[A];中华医学会第十次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2009年
2 赵世华;;MRI在心肌病诊断和鉴别诊断中的应用价值[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年
3 蒋锦琪;娄樱;袁方;谢文晖;张鹏;樊济海;;扩张型心肌病患者双嘧达莫负荷心肌201T1 SPECT显像的分析[A];中华医学会急诊医学分会第十三次全国急诊医学学术年会大会论文集[C];2010年
4 刘奇才;欧启水;;NPPB基因5'侧翼端CTTT重复序列多态性与肥厚型心肌病及扩张型心肌病发病的关系[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
5 许瑞生;;真武汤治疗扩张型心肌病[A];全国中西医结合教育学术研讨会论文集[C];2000年
6 刘晓伟;李治安;;速度向量成像技术评价扩张型心肌病心脏扭转运动[A];中华医学会第十次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2009年
7 陆赛君;;扩张型心肌病心室、左房大小与ST-T波改变、房颤的关系探讨[A];第四届全国心功能学术研讨会论文摘要集[C];1994年
8 孙敏;田家玮;姜双全;何宁;;应用QTVI技术评价阿霉素所致兔扩张型心肌病模型的实验研究[A];庆祝中国超声诊断50年暨第十届全国超声医学学术会议论文汇编[C];2008年
9 彭冬迪;曾春燕;;36例扩张型心肌病患者随访分析[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年
10 罗素红;赵茂林;陶礼;;硫酸镁联合替米沙坦治疗扩张型心肌病心力衰竭32例[A];2011年全国医药学术论坛交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 黄登喜;扩张型心肌病有望治愈[N];医药导报;2004年
2 刘启明;治疗扩张型心肌病有新法[N];大众卫生报;2001年
3 何德功;基因疗法可治疗动物扩张型心肌病[N];农民日报;2004年
4 吴强;外科治疗扩张型心肌病[N];福建科技报;2000年
5 彭晓兰;扩张型心肌病与自身免疫相关[N];健康报;2003年
6 ;我国“扩张型心肌病”诊断治疗取得重大进展[N];今日信息报;2003年
7 张沙沙;市医院为一例扩张型心肌病患者成功实施手术[N];太行日报;2010年
8 吴力勇 衣晓峰;“牛心”回缩有望了[N];中国医药报;2000年
9 衣晓峰;硬膜外阻滞对付扩张型心肌病[N];健康报;2004年
10 记者 史向阳;省康复医院攻克重症扩张型心肌病[N];黑龙江日报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邓斌;罗陆一教授学术思想及临床治疗扩张型心肌病的研究[D];广州中医药大学;2011年
2 张明昌;致心律失常性右室心肌病病理学特征及其与桥粒蛋白的相关性研究[D];复旦大学;2012年
3 孙莉萍;遗传性扩张型心肌病LMNA基因突变的致病机理研究[D];中国协和医科大学;2010年
4 吕丹;Dkk3与Wif1对扩张型心肌病的调节机制研究[D];北京协和医学院;2009年
5 周岩;骨髓间充质干细胞移植对扩张型心肌病大鼠模型促修复作用的研究[D];吉林大学;2010年
6 赵海苹;中药单体对cTnT~(R141W)转基因扩张型心肌病小鼠模型的治疗作用及机理研究[D];中国协和医科大学;2009年
7 张丽;Hepc1对扩张型心肌病的调节机制研究[D];北京协和医学院;2010年
8 邹长虹;非缺血性扩张型心肌病患者左心室逆重构的临床研究[D];北京协和医学院;2014年
9 童锴;单心动周期全容积实时三维超声心动图定量评估扩张型心肌病患者左心室收缩功能[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
10 张伟;CYP2E1对扩张型心肌病及肥厚型心肌病的调节机制研究[D];北京协和医学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 马展成;钙网蛋白及基质金属蛋白酶在扩张型心肌病发病机制中的作用[D];汕头大学;2010年
2 黄斯斯;扩张型心肌病患者外周血单个核细胞白细胞介素-34、白细胞介素-35表达及分泌的初步研究[D];广西医科大学;2010年
3 晏娟娟;自体骨髓间充质干细胞移植治疗扩张型心肌病的临床观察[D];郑州大学;2012年
4 王海燕;心电图在扩张型心肌病患者猝死危险性评估的价值[D];河北医科大学;2012年
5 孙婧;杨积武教授中西医结合治疗扩张型心肌病伴心力衰竭经验[D];辽宁中医药大学;2010年
6 李倩晓;骨髓间充质干细胞移植对扩张型心肌病胶原重塑影响的实验研究[D];遵义医学院;2012年
7 周必;养心通络汤治疗扩张型心肌病的临床疗效观察[D];湖北中医药大学;2012年
8 黄粮;扩张型心肌病患者中miR-155表达下调[D];华中科技大学;2013年
9 吴燕妮;四维超声心动图对扩张型心肌病患者右心室功能的定量评价[D];苏州大学;2014年
10 段少博;瞬时波强技术对扩张型心肌病患者外周血管血流动力学与心功能的研究[D];郑州大学;2010年
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