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《首都医科大学》 2017年
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大黄(?)虫丸加味对免疫性肝纤维化大鼠肝组织PDGF及ERKs信号通路的影响

王金光  
【摘要】:【目的】研究大黄(?)虫丸配伍黄芪、水红花子水煎液对IHF(Immune Hepatic Fibrosis,免疫性肝纤维化)大鼠肝组织PDGF(platelet derived growth factor,血小板衍生因子)及ERKs(extracellular regulated protein kinases,细胞外调节蛋白激酶)表达调控的影响,为中医益气化瘀通络法拮抗肝纤维化提供实验依据。【方法】采用猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠模型,造模时间为12周,在造模开始6周后进行大黄(?)虫丸配伍黄芪、水红花子水煎液灌胃干预治疗,选用西药秋水仙碱灌胃对照,灌胃时间为6周,设正常组、模型组、中药组、秋水仙碱组。光镜下观察大鼠肝组织病理HE(hematoxylin-eosin,苏木精-伊红)染色;生化法检测大鼠血清肝功能指标;碱水解法检测大鼠肝组织中HYP(hydroxy proline,羟脯氨酸)含量;WB(western blot,免疫印迹)法观察肝组织PDGF-BB(platelet derived growth factor-BB,血小板衍生因子-BB)、PDGFR(Plateletderived growth factor receptor,血小板衍生因子受体)及ERK1/2(extracellular regulated protein kinase1/2,细胞外调节蛋白激酶1/2)蛋白的表达;RT-PCR(reverse transcription-PCR,反转录PCR)观察大鼠肝组织ERKs的m RNA(Messenger RNA,信使RNA)的转录表达。【结果】1、大鼠一般情况从毛色、大便、行为上看,与正常组比,模型组大鼠毛色较黄略蓬乱;大便颜色较浅,质地较松散;动作迟缓,个别性情凶狠,攻击性较强。与模型组比,中药组和秋水仙碱组大鼠的毛色、大便和行为均有所好转。2、大鼠肝脏HE染色正常组肝小叶结构完整,肝细胞无变性、坏死,由中央静脉向四周呈放射状排列,未见胶原纤维增生;模型组肝小叶结构破坏,肝细胞排列紊乱,汇管区扩大伴炎性细胞浸润、胶原纤维明显增粗增厚;中药组与秋水仙碱组肝细胞排列较为整齐,汇管区有少量胶原纤维沉积。3、大鼠血清肝功能与正常组相比,模型组大鼠血清ALT(alanine aminotransferase,谷丙转氨酶)、AST(aspartate aminotransferase,谷草转氨酶)、ALP(alkaline phosphatase,碱性磷酸酶)、r-GGT(r-glutamine transferase,r-谷氨酰转肽酶)水平均升高,差异有统计学意义(P0.01),与模型组相比,中药组和秋水仙碱组的ALT、AST、ALP、r-GGT均有降低,并且具有统计学差异(P0.05或P0.01),中药组与秋水仙碱组之间未见明显差异(P0.05);与正常组相比,模型组大鼠A/G(albumin/globulin,白球比)有所降低,且差异有统计学意义(P0.05),与模型组比较,中药组和秋水仙碱组均有升高趋势,但中药组差异有统计学意义(P0.05),秋水仙碱组差异无统计学意义(P0.05);与正常组相比,模型组TP(total protein,总蛋白)、Tbil有(total bilirubin,总胆红素)升高趋势,差异无统计学意义(P0.05),与模型组相比,中药组和秋水仙碱组均有下降趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。4、大鼠肝组织羟脯氨酸与正常组相比,模型组大鼠肝组织羟脯氨酸含量增加(P0.01);与模型组相比,中药组及西药组肝组织羟脯氨酸含量减少(P0.05),中药组与西药组比较未见明显差异(P0.05)。5、大鼠肝组织PDGF、PDGFR及ERK1/2蛋白与正常组相比,模型组大鼠肝组织PDGF-BB、PDGFR及ERK1/2蛋白的表达明显增加(P0.01)。与模型组相比,中药组及西药组大鼠肝组织PDGF-BB、PDGFR及ERK1/2蛋白的表达明显减少(P0.01)。中药组与西药组表达量未见明显差异(P0.05)。6、大鼠肝组织ERKs m RNA的转录表达与正常组相比,模型组大鼠肝组织ERKs m RNA的表达增加(P0.01),与模型组相比,中药组及西药组肝组织ERKs蛋白及ERKs m RNA的表达减少(P0.01),中药组与西药组相比未见明显差异(P0.05)。【结论】大黄(?)虫丸加味能改善肝纤维化病理,保护肝功能,降低肝组织PDGF-BB、PDGFR及ERKs蛋白的表达,提示大黄(?)虫丸加味黄芪、水红花子抗肝纤维化作用与其抑制肝星状细胞活化有关。本实验为阐释大黄(?)虫丸配伍黄芪、水红花子对免疫性肝纤维化的拮抗作用提供了一定的实验数据支持,为中医临床合理应用大黄(?)虫丸配伍芪红水煎液抗肝纤维化提供了一定的实验依据。
【学位授予单位】:首都医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R285.5

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