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《首都医科大学》 2017年
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糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞TGF-β1和P38MAPK表达的影响

彭麒朕  
【摘要】:【目的】从细胞分子水平观察高糖环境培养下的小鼠系膜细胞转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,p38MAPK)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMPresponse element binding protein,CREB)、纤维连接蛋(fibronectin,FN)等蛋白的表达,探讨中药复方糖肾宁抑制细胞外基质增生的影响和作用机制,为中医药防治糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)提供新的思路和切入点。【方法】1.将SV40 MES 13小鼠肾小球系膜细胞在37℃、5%CO2的细胞培养箱中进行培养,用含10%胎牛血清的DMEM低糖完全培养基悬浮细胞,接种于25ml细胞培养瓶中,取3-5代细胞进行实验。2.采用健康雄性SD大鼠20只,随机将实验动物随机分为2组,含药血清组(15只)和空白对照(5只)组,大鼠给药量按人和动物体表面积折算:大鼠给药量为人体等效剂量8倍即61.2 g·kg-1·d-1进行灌胃,空白对照组用生理盐水,每天灌胃1次(2.25m L/250g),连续灌胃7天后,取血分离收集血清。3.将体外培养的SV40 MES 13小鼠肾小球系膜细胞分组并加入药物血清。实验分组:正常对照组(N组,用含5.5mmol/L葡萄糖的低糖型DMEM培养液);高糖培养组(H组,用含30mmol/L葡萄糖的高糖型DMEM培养液);高糖+糖肾宁组(T组,用含30mmol/L葡萄糖的DMEM培养液分别加以61.2 g·kg-1·d-1、30.6 g·kg-1·d-1、7.65 g·kg-1·d-1三个剂量10%糖肾宁含药血清,分别命名T组,MT组,LT组);高糖+缬沙坦组(V组,30mmol/L葡萄糖+10μmol/L缬沙坦)干预24小时。4.将各组细胞于37℃,5﹪CO2细胞培养箱中常规培养24 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中FN蛋白表达含量,依据检测结果筛选并确定含药血清最终给药浓度。5.采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾小球系膜细胞P38MAPK、P-P38MAPK、TGF-β1、CREB的蛋白含量,将各组细胞于37℃,5﹪CO2细胞培养箱中常规培养24 h后,以2.5X107/L的密度接种到60mm培养皿中,待细胞生长至对数期时,干预24小时后终止培养,弃去瓶内培养基,用PBS液冲洗2次,吸干,加入细胞裂解液(RIPA和PMSF混合液)80ul,放于冰上用细胞刮刮取3分钟,吸出培养瓶内和刮子上的液体至1.5ml的EP管中,测定各组蛋白含量,用10%的SDS-PAGE电泳分离分离蛋白质,每孔取40ug总蛋白含量上样,用电泳仪将蛋白质转印至PVDF膜,TBS-T洗膜三次,每次5分钟,5%的脱脂奶粉封闭1小时,用TGF-β1一抗、P38MAPK一抗、磷酸化P38MAPK一抗、CREB一抗,4℃孵育过夜,隔日TBS-T洗膜三次,每次5分钟,洗膜后加入辣根过氧化物酶标记的二抗,在室温条件下进行孵育1小时,再次TBS-T洗膜三次,每次5分钟,洗膜后加化学发光剂暗室胶片曝光。【结果】1.糖肾宁对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞上清液中FN表达的影响:与正常对照组比较,高糖组系膜细胞上清液中FN含量显著增加(P0.05);与高糖组比较,糖肾宁高、中剂量组上清液中FN含量均显著减少(P0.05),且呈现剂量依赖性(P0.05),低剂量组FN含量与高糖组比较无统计学差异(P0.05),糖肾宁含药血清高剂量组确定为最终给药剂量。2.糖肾宁对高糖环境下的小鼠肾小球系膜细胞裂解液p38MAPK、p-p38MAPK、TGF-β1、CREB的蛋白水平表达的影响:与正常对照组相比较,高糖组pp38MAPK、TGF-β1、CREB蛋白水平表达均明显均上调(P0.05),与高糖组比较,糖肾宁组、缬沙坦组p-p38MAPK、TGF-β1、CREB蛋白表达均明显下调(P0.05),非磷酸化p38 MAPK在各组表达无统计学差异。【结论】1.高糖环境能明显促进小鼠肾小球系膜细胞中TGF-β1、p-p38MAPK、CREB的蛋白表达,促进肾小球系膜细胞FN蛋白的分泌。2.糖肾宁能显著降低高糖环境下系膜细胞中TGF-β1、p-p38MAPK、CREB蛋白表达,抑制高糖环境下系膜细胞FN蛋白的分泌。
【学位授予单位】:首都医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R285.5

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈张敏;李荣科;张鹏飞;万生芳;张凌伟;郭钰龙;王秋兰;;当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β_1表达的影响[J];中国实验方剂学杂志;2017年05期
2 黄静;常保超;刘磊;张燕;陈卫东;;糖尿病肾病与炎性细胞因子的研究现状[J];蚌埠医学院学报;2016年10期
3 刘紫庭;李雨捷;赵伟;徐世元;;NOX在糖尿病肾病发病机制中的作用[J];广东医学;2016年19期
4 黄丽丽;祝小林;邓伟谦;段娜;梁秀洁;王悦;郭婷婷;束双双;向晓红;姜婷婷;汤珣;章俊;;p38 MAPK信号通路介导晚期氧化蛋白产物诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化[J];南方医科大学学报;2016年09期
5 米佳;朴春丽;王秀阁;南征;;南征教授基于“络病”理论治疗消渴肾病的经验[J];国医论坛;2016年05期
6 何笑云;欧春麟;肖艳华;周素娴;;PAF介导TGF-β1表达对系膜细胞分泌细胞外基质的影响[J];江苏医药;2016年16期
7 吴志琴;;瑞格列奈治疗2型糖尿病临床效果分析[J];糖尿病新世界;2016年15期
8 程娜娜;王祥生;;糖尿病肾病中医治疗进展[J];中医临床研究;2016年16期
9 金鑫;李小娟;;络病与糖尿病周围神经病变[J];实用中医内科杂志;2016年06期
10 刘小伟;殷国海;南征;;杞精消肾安汤治疗消渴肾病(糖尿病肾病)临床疗效[J];现代医药卫生;2016年10期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 吴以嶺;;络病理论体系构建及其学科价值[A];络病理论及其应用经典论文选编[C];2014年
2 肖炜;魏连波;;肾康丸对DN大鼠TGF-β1/Smad 信号通路的影响[A];2008年全国中西医结合肾脏病南京论坛论文汇编[C];2008年
3 李平;刘苹;熊仁平;赵艳;陈星云;刘霞;周元国;;Smad3基因siRNA对TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖的影响[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
4 李明辉;张延群;;糖尿病肾病中医研究及治疗概述[A];全国中西医结合内分泌代谢病学术会议论文汇编[C];2006年
5 张宗礼;张兴坤;;浅谈糖尿病肾病的病机[A];第十九次全国中医肾病学术交流会论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 魏凤江;高尿酸血症、2型糖尿病及糖尿病微血管病变的群体遗传学研究[D];天津医科大学;2015年
2 王丽晖;p38MAPK信号转导通路在糖尿病肾病发病中的作用及HMG-CoA还原酶抑制剂的影响[D];河北医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 耿嘉男;茵陈提取物对糖尿病肾病防治作用的研究[D];吉林大学;2015年
2 刘岩;缬沙坦对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1和P38MAPK表达的影响[D];大连医科大学;2010年
3 王宏;糖克煎剂对2型糖尿病大鼠血管内皮释放一氧化氮水平影响的研究[D];辽宁中医药大学;2010年
4 王晓红;P38MAPK对高糖诱导肾小球系膜细胞ICAM-1和VCAM-1表达的影响[D];天津医科大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 郭小雷;周玲;韩希福;张军平;;调和阴阳法治疗糖尿病肾病的研究进展[J];中国临床医生杂志;2017年10期
2 章俊;向晓红;梁秀洁;束双双;姜婷婷;郭婷婷;汤珣;;晚期氧化蛋白产物调节人肾小管上皮细胞自噬的研究[J];重庆医学;2017年25期
3 邓跃毅;陈熤;;肾病综合征常用中药及其方剂[J];中华肾病研究电子杂志;2017年04期
4 刘欢;;糖尿病患者心血管疾病发病机制的研究进展[J];心血管病防治知识(学术版);2017年06期
5 张强;;消渴汤加减治疗气阴两虚型消渴病的效果分析[J];当代医药论丛;2017年12期
6 王琳琳;李志鹏;郝秀轻;程锦绣;左路广;刘华;刘圣君;;丹参多酚酸盐联合氯沙坦钾对老年糖尿病肾病患者肾功能的影响[J];宁夏医科大学学报;2017年03期
7 侯建永;姚武;郝长付;;游离二氧化硅所致肺成纤维细胞转分化过程中DNA甲基化差异基因的MeDIP-seq检测[J];郑州大学学报(医学版);2017年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 孙成博;miRNA-21在茵陈提取物干预大鼠糖尿病肾病中的作用及机制[D];吉林大学;2017年
2 彭麒朕;糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞TGF-β1和P38MAPK表达的影响[D];首都医科大学;2017年
3 陈杰;缬沙坦对大鼠急性心肌梗死后骨架蛋白F-actin与HSP27表达的影响[D];郑州大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 沈明亮;谭丽华;李玉玲;;坎地沙坦联合金水宝胶囊治疗早期2型糖尿病肾病的疗效观察[J];中国现代药物应用;2015年21期
2 马丽芬;刘彦君;苏振丽;郑瑜;;高压氧联合厄贝沙坦预防2型糖尿病患者微血管病变的临床效果[J];中国医学前沿杂志(电子版);2015年09期
3 ;中国成人糖尿病肾脏病临床诊断的专家共识[J];中华内分泌代谢杂志;2015年05期
4 李涛;冯爱桥;刘一卓;;六味地黄丸治疗急性肾小球肾炎35例[J];河南中医;2015年04期
5 俞韩;何泽民;;链脲佐菌素联合高脂高糖饲料诱导糖尿病大鼠模型的建立[J];江苏医药;2015年04期
6 李春慧;;那格列奈和瑞格列奈对2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的改善作用[J];中国老年学杂志;2015年04期
7 刘艳华;任喜洁;王健;张守琳;;任继学应用喉肾相关理论诊治慢性肾风经验[J];中医杂志;2015年04期
8 罗霞;邓玲艳;许文娟;程黎明;;腺苷酸活化蛋白激酶通过抑制mTOR信号通路缓解糖尿病大鼠肾脏细胞外基质沉积[J];华中科技大学学报(医学版);2015年01期
9 胡勤锦;闫振成;;尿毒清联合ARB/ACEI治疗糖尿病肾病大量蛋白尿的疗效观察[J];重庆医学;2014年26期
10 郭菊梅;杨光;陈慧昱;王文潇;程卫东;;红芪替换黄芪后益气养血汤对老龄鼠抗氧化损伤及抗免疫衰老作用的比较研究[J];西部中医药;2014年08期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐勇,张妮,黄颂敏,付平,刘小菁,张海燕,强欧;两种不同状态系膜细胞的培养及其功能研究[J];华西医科大学学报;2002年02期
2 章道恒,肖克峰,江洪涛,房杰群;人系膜细胞中组织金属蛋白酶抑制剂1基因的稳定表达[J];中国现代医学杂志;2004年06期
3 王远程,叶志斌,周钦,张宗梁,吴兆龙;丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子-β_1表达[J];复旦学报(医学版);2005年02期
4 朱晓雷;;中药及有效成分对系膜细胞作用的研究进展[J];江西中医药;2006年10期
5 段惠军;李英;张涛;刘茂东;史永红;;高糖对系膜细胞胞外调节蛋白激酶表达及细胞外基质合成的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年01期
6 夏志银,宫崎正信,阿部,河野茂,吉雄扬子,西野友战,范亚平,蒋季杰;系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型的关系[J];南通医学院学报;2002年02期
7 陈玲;贾汝汉;邱昌建;丁国华;;脱氢抗坏血酸对高糖诱导系膜细胞产生氧自由基的影响[J];中华肾脏病杂志;2006年09期
8 许钟镐;孙晶;贾冶;苗里宁;;12-脂氧化酶对系膜细胞血管紧张素Ⅱ1型受体表达的影响[J];中华肾脏病杂志;2006年10期
9 胡伟新;黎磊石;庄一义;;大黄及低密度脂蛋白对系膜细胞生长的影响[J];金陵医院学报;1993年01期
10 朱晓玲,王永钧,程晓霞,童孟立,陈洪宇,张满生;尿毒净Ⅱ号对人肾系膜细胞Cyclin D_1及CDK_4表达的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2004年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘海英;关广聚;柳刚;文蓉珠;张艳;陈兵;李学刚;;高糖对系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体家族表达的影响[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
2 袁军;贾汝汉;包艳;;螺内酯对系膜细胞合成纤溶酶原激活剂抑制物-1的影响[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
3 张怡;黄国良;;高糖诱导系膜细胞表达TNF-a的机制探讨[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
4 张怡;黄国良;;高糖对系膜细胞表达IL-6的影响及其机制探讨[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
5 吴兆龙;王远程;叶志斌;;丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子β_1表达[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
6 姜宗培;徐知延;张海燕;余学清;;H_2O_2介导高糖诱导的系膜细胞纤维蛋白溶酶系统变化[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
7 吴慧娟;王小刚;刘晔;赵仲华;冯秀艳;王慧君;张志刚;;系膜细胞的饰胶蛋白聚糖泛素化调节的研究[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
8 张庆红;丁国华;张建鄂;白寿军;罗昌霞;肖厚勤;;COX-2抑制剂对高糖诱导系膜细胞CT-GF表达的影响[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
9 毛山山;张农;;IL-1b诱导人系膜细胞表达NGALR[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
10 刘铜华;吕仁和;黄启福;高彦彬;;止消通脉宁对高糖培养的系膜细胞合成胶原的影响[A];糖尿病(消渴病)中医诊治荟萃——全国第五次中医糖尿病学术大会论文集[C];1999年
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1 郭水明;IgA肾病患者可溶性尿激酶受体水平与FSGS样病理损伤的临床和基础研究[D];华中科技大学;2016年
2 孟可欣;TRPC3/6通道在CaSR介导肾小球系膜细胞钙信号中的作用[D];哈尔滨医科大学;2014年
3 江颖娟;Exendin-4对高糖条件下大鼠系膜细胞的保护作用及其机制初探[D];南方医科大学;2013年
4 李静;脂蛋白脂酶在人系膜细胞摄取极低密度脂蛋白中作用的探讨[D];中国协和医科大学;2008年
5 吴元俊;白细胞介素-10在人类肾小球疾病肾组织中的表达及其对系膜细胞的作用和机制探讨[D];南京医科大学;2002年
6 周素娴;高糖高脂环境下PAF在内皮细胞与系膜细胞相互关系中作用的研究[D];中南大学;2009年
7 兰洋;NF-κB调控氧化LDL激活系膜细胞TGF-β1转录的研究[D];复旦大学;2004年
8 张爱华;白细胞介素-13拮抗肾小球系膜细胞炎症效应及其信号转导机制的研究[D];南京医科大学;2001年
9 刘洁;Megsin及p38MAPK信号通路在糖尿病肾病发病机制中的作用[D];河北医科大学;2010年
10 孙敏;高血糖—糖化氧化—系膜细胞肥大和基质积聚与糖尿病肾病及其高血糖记忆的细胞病理学关系的研究[D];南京中医药大学;2004年
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1 赵芳;丙泊酚对脂多糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞的影响[D];华北理工大学;2016年
2 仇芝;内质网应激在前列腺素E2受体1、3亚型参与TGF-β1诱导的肾脏纤维化过程中的作用[D];南通大学;2015年
3 杨丽铃;甲基双加氧酶2在高糖刺激肾小球系膜细胞TGF-β1表达中的作用研究[D];第三军医大学;2016年
4 黄红;基质素2对糖尿病肾小球硬化的作用机制研究[D];青海大学;2017年
5 彭麒朕;糖肾宁对高糖培养的小鼠系膜细胞TGF-β1和P38MAPK表达的影响[D];首都医科大学;2017年
6 易红;LncRNA Gm4419通过NF-kappaB/NLRP3炎症小体信号通路调控糖尿病肾病炎症的分子机制研究[D];重庆医科大学;2017年
7 周书琴;重组人红细胞生成素影响系膜细胞生长与纤维连接蛋白表达的实验研究[D];南京医科大学;2008年
8 刘友霞;大黄素对高糖环境下系膜细胞收缩功能的影响[D];山东大学;2011年
9 陈建平;活性维生素D_3及其受体对人系膜细胞中mTOR蛋白表达的影响[D];石河子大学;2014年
10 封晓娟;HMGB1对小鼠系膜细胞细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响[D];河北医科大学;2011年
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