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《北京中医药大学》 2011年
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基于突触可塑性的加味四逆散对睡眠剥夺大鼠学习记忆障碍的调控机制研究

范新六  
【摘要】:学习和记忆是脑的最高机能——智能的重要组成部分。学习指个体对新知识的获得过程,而记忆是指对这种获得知识的编码、巩固、检索,或者说记忆是刺激消失后在心理上保持下来的代表原刺激的讯息。睡眠和学习记忆能力关系密切。而睡眠障碍已成为困扰当代人群日常工作、学习和生活的一种常见因素。因此,本课题以睡眠剥夺复制学习记忆障碍模型,观察加味四逆散调控模型动物学习记忆能力的神经生物学机制。 上篇理论研究 对中医经典文献、历代医家专著和期刊文献涉及学习记忆的资料,进行整理、分析、归纳和总结。从五藏神与学习记忆的关系入手研究,侧重论述了心、肝和肾在学习与记忆过程中的作用。心神、肝魂和肾志调控学习记忆过程,依赖于心主血脉、肝主疏泄和肾藏精的功能或物质基础。在心神“任物“的主宰下,肝魂和肾志神相互作用、相互影响调控学习的获得、记忆的储存和再现过程。睡眠一觉醒周期受五藏神的调控,而睡眠剥夺主要影响了心主神明、肝藏魂和肾藏志的功能,导致学习记忆能力障碍。 下篇实验研究 实验研究一SD大鼠一般状况及学习记忆成绩的评价 方法:应用Y迷宫评价各组大鼠学习记忆能力的状况,并对各组一般状况进行观察和记录。结果:①体重变化:在SD72h和168h时点,与模型组比较,四逆散组和加味四逆散组大鼠体重减轻量有统计学差异(p0.05);与其余四组体重量呈现减少的表现相反,对照组大鼠体重量呈现增加的表现。②血清酶学变化:模型组大鼠血清LDH较对照组明显增多(p0.05)。加味四逆散组血清LDH较模型组明显降低(p0.01)。③SD168h后,大鼠Y迷宫正确百分率较造模前明显下降(p0.05),与对照组比较也明显下降(p0.05)。在三个中药复方中,加味四逆散能明显增加模型大鼠迷宫成绩(p0.05),而四逆散、生慧汤对模型大鼠迷宫成绩无明显变化。结论:①SD导致大鼠学习记忆能力下降,并出现躯体疲劳;②加味四逆能明显改善SD致学习记忆能力障碍,而四逆散和生慧汤对SD致学习记忆能力障碍改变不明显 实验研究二SD大鼠行为学变化及加味四逆散对其调控作用 方法:应用旷场和高架十字迷宫评价各组大鼠精神行为的变化。结果:①OFT变化:在水平活动上,各组大鼠SD168h后,模型组在总穿格次数上明显高于对照组(p0.01);模型组在中央格停留时间明显高于对照组(p0.01);模型组在中央格停留次数明显高于对照组(p0.05),而生慧汤组和加味四逆散组明显低于模型组(p0.05)。在垂直活动上,模型组站立次数明显高于对照组(p0.01),加味四逆散组明显低于模型组(p0.01);生慧汤组也低于模型组(p0.05)。②EPM变化:在水平活动上,模型组在进入开放臂时间百分比上明显高于对照组(p0.05),而加味四逆散组明显低于模型组(p0.05)。在垂直活动上,模型组向下探究时间明显高于对照组(p0.05)。结论:①SD大鼠减少了焦虑样行为和增强了探索行为。②加味四逆散能显著改善SD所致大鼠焦虑样行为减少和探索行为增强的异常变化。生慧汤和四逆散仅能部分改善SD所致大鼠焦虑样行为减少和探索行为增强的异常变化。 实验研究三SD大鼠PFC和海马CA3区突触界面结构的变化及加味四逆散对其调节作用 方法:采用透射电镜技术,观察各组大鼠PFC和海马CA3区神经元突触界面超微结构的变化。结果:①PFC神经元突触界面超微结构的变化:与对照组比较,模型组大鼠PFC神经元突触间隙明显变宽(P0.05),PSD厚度明显变薄(P0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠PFC神经元、PSD厚度明显变厚(P0.05)。②海马CA3区神经元突触界面超微结构的变化:与对照组比较,模型组大鼠海马CA3区神经元突触PSD厚度明显变薄(P0.05),突触间隙厚度变宽(P0.05)。与模型组比较,四逆散组和生慧汤组大鼠海马CA3区神经元突触间隙厚度明显变窄(P0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠海马CA3区神经元PSD厚度明显增厚(P0.05),突触间隙厚度明显变窄(P0.05)。结论:①加味四逆散能增加SD大鼠PFC和海马CA3区神经元突触PSD厚度、调整海马CA3区突触间隙宽度,影响突触结构可塑性,增加突触传递效能。②四逆散和生慧汤仅能调整海马CA3区神经元突触间隙宽度,对突触传递效能影响低于加味四逆散组。 实验研究四SD大鼠PFC和海马CA3区NMDA和EphB2受体蛋白质表达的变化及加味四逆散对其调节作用 方法:采用Western blot技术,观察各组大鼠PFC和海马CA3区NMDA和EphB2受体蛋白质表达的变化。结果:①NMDA受体NR2A亚基蛋白质表达变化:与对照组比较,SD168h后大鼠PFC脑区NMDA受体MNR2A亚基蛋白质的表达明显减少(p0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠PFC脑区NMDA受体MNR2A亚基蛋白质的表达明显增多(p0.05)。与四逆散组比较,加味四逆散组大鼠PFC脑区NMDA受体MNR2A亚基蛋白质的表达明显增多(p0.05)。②NMDA受体NR2B亚基蛋白质表达变化:与对照组比较,SD168h后,大鼠PFC和海马CA3区NMDA受体NR2B蛋白质的表达明显减少(p0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠PFC和海马CA3区NMDA受体NR2B蛋白质的表达均明显增多(p0.05)。与四逆散组比较,加味四逆散组大鼠PFC脑区NMDA受体NR2B蛋白质的表达均明显增多(p0.05)。③NMDA受体NR2B (Tyr1472)蛋白质表达变化:与对照组比较,SD168h后大鼠PFC脑区NMDA受体NR2B (Tyr1472)蛋白质的表达明显减少(p0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠PFC脑区NMDA受体NR2B (Tyr1472)蛋白质的表达均明显增多(p0.05)。各组大鼠海马CA3区NMDA受体NR2B (Y1472)蛋白质的表达比较均无明显变化。④EphB2受体蛋白质表达变化:与对照组比较,SD168h后,大鼠PFC脑区EphB2受体蛋白质的表达明显减少(p0.05)。与模型组比较,四逆散组、生慧汤组、加味四逆散组大鼠PFC脑区EphB2受体蛋白质的表达表达均明显增加(p0.05)。各组大鼠海马CA3区EphB2受体蛋白质的表达比较均无明显变化。结论:①加味四逆散能上调SD大鼠PFC区的学习记忆相关受体NR2B、NR2B (Tyr1472)和EphB2蛋白质的表达;并上调海马CA3区NR2B受体蛋白质的表达。②四逆散和生慧汤仅能上调SD大鼠PFC区的EphB2蛋白质的表达。 实验研究五SD大鼠海马CA1区NMDA和EphB2受体基因表达的变化及加味四逆散对其调节作用 方法:采用实时荧光定量PCR技术,观察各组大鼠海马CA1区中枢神经受体基因表达的变化。结果:与对照组比较,模型组大鼠海马CA1区NMDA受体NR2B亚基和EphB2的mRNA表达明显减少(p0.01), NMDA受体NR2A基因表达无明显变化。与模型组比较,加味四逆散组能明显增加大鼠海马CA1区NMDA受体NR2A, NR2B和EphB2的mRNA表达(p0.01)。与模型组比较,生慧汤组能明显增加大鼠海马CA1区NMDA受体NR2A的mRNA表达(p0.01)。结论:加味四逆散能明显上调SD大鼠海马CA1区学习记忆相关中枢神经受体基因表达的变化,而四逆散和生慧汤对其影响不明显。 小结 对研究数据进行分析,可以总结为四点:一是加味四逆散(疏肝补肾养心法)对SD大鼠从行为学、形态学、基因表达、蛋白质表达等多个层面进行调控,能明显改善SD大鼠学习记忆成绩。四逆散(疏肝法)和生慧汤(补肾养心法)仅影响SD大鼠在形态学、蛋白质表达等部分层面的部分靶点,对SD大鼠学习记忆成绩改变无统计学上的影响。二是PFC、海马CA1和CA3亚区相比较来说,加味四逆散对SD大鼠PFC区影响最为明显,特别是对PFC区学习记忆相关受体蛋白质表达的变化。三是加味四逆散(疏肝补肾养心法)改善SD大鼠学习记忆能力障碍,与增加SD大鼠PFC和海马CA3神经元PSD厚度,增加PFC区NMDA受体NR2B亚基和NR2B (Y1472)蛋白质的表达,上调海马CA3区NMDA受体NR2B亚基和EphB2受体蛋白质的表达,上调海马CA1区NR2B和EphB2的mRNA的表达有关。四是疏肝法和补肾养心法都参与了学习记忆过程的调控,是调控学习记忆过程的重要参与者,但不能独立发挥作用。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

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【引证文献】
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8 李彧;贺红莉;薛晓鸥;赵宗江;牛建昭;王继峰;;温脾汤对大鼠残余肾组织中核转录因子-κ B/Iκ B表达的影响[A];第八届全国中西医结合实验医学研讨会论文汇编[C];2006年
9 杨鉴冰;孟巧绒;陈梅;刘东平;朱丽红;;祛异康对子宫内膜异位症模型大鼠血管内皮生长因子的影响[A];全国第八次中医妇科学术研讨会论文汇编[C];2008年
10 陈福安;;加味四逆散治疗慢性胃炎52例[A];中国中西医结合学会第十二次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;加味四逆散治疗脂肪肝[N];中国中医药报;2003年
2 ;加味四逆散对脂肪肝患者降脂作用明显[N];中国中医药报;2003年
3 江苏省姜堰市中医院 主任医师 谢兆丰;加味四逆散治疗经行乳房胀痛[N];家庭医生报;2004年
4 ;加味四逆散治疗肝源性胃炎疗效满意[N];中国中医药报;2004年
5 刘华;雌二醇可减轻大鼠模型急性胰腺炎的器官损害[N];医药导报;2004年
6 ;电针对帕金森病大鼠模型抗氧化酶有影响[N];中国中医药报;2005年
7 张艳 方素清 姜凯 宋婷婷;慢心衰气虚血瘀证大鼠模型[N];中国中医药报;2006年
8 内蒙古医学院中医学院 任秀玲;“肺气虚”大鼠模型微观基础表达的实验研究[N];中国中医药报;2007年
9 姜之炎 吴玉晶;小儿敷贴粉可改善哮喘大鼠气道反应[N];中国医药报;2005年
10 记者 靖九江;H2S在肾血管性高血压中发挥作用[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 范新六;基于突触可塑性的加味四逆散对睡眠剥夺大鼠学习记忆障碍的调控机制研究[D];北京中医药大学;2011年
2 刘明;梓醇对脑缺血损伤大鼠恢复早期神经功能的影响及其机制研究[D];北京中医药大学;2011年
3 孙凤平;参芪复方对GK大鼠肾脏NF-κB及PPARγ的影响[D];成都中医药大学;2011年
4 祖宁;Ⅰ型干扰素系统在多发性肌炎/皮肌炎患者和炎性肌病大鼠模型中的表达[D];北京协和医学院;2011年
5 刘桠;参芪复方调控GK大鼠血管PTEN/PI3K通路与血管新生的实验研究[D];成都中医药大学;2010年
6 王海涛;PTSD大鼠海马和下丘脑5-HT1A受体活性及前额皮质ERK变化的实验研究[D];中国医科大学;2010年
7 张国伟;猪苓质量控制及其利水功效在BBN诱导的大鼠膀胱癌治疗中机制研究[D];广州中医药大学;2010年
8 王建枫;锌对大鼠肝脏硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)的影响及其调控机理研究[D];浙江大学;2008年
9 周春雷;五肽化合物PLNPK对大鼠抗GBM肾炎的治疗作用及其作用机制的研究[D];天津医科大学;2008年
10 云宇;缺血后处理抗大鼠肾缺血—再灌注损伤的作用机制研究[D];昆明医学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵馥;加味四逆散对应激性溃疡大鼠血浆热休克蛋白70含量的影响[D];广州中医药大学;2011年
2 于明明;硫酸化壳聚糖衍生物对实验性大鼠脂肪肝的防治作用研究[D];中国海洋大学;2010年
3 袁浩;红霉素对慢性阻塞性肺疾病大鼠TGFβ_1、SLPI表达水平的影响[D];中南大学;2010年
4 顾海燕;维生素D缺乏对子代大鼠肺形态结构及血小板源性生长因子-A表达影响的实验研究[D];南京医科大学;2009年
5 赵坤;中药逆萎康对大鼠慢性萎缩性胃炎干预作用的研究[D];青岛大学;2012年
6 詹增土;慢性全脑低灌注大鼠侧脑室旁白质改变及MMP-2,3和7的表达[D];福建医科大学;2010年
7 汪春彦;金荞麦对克雷伯杆菌肺炎大鼠的保护作用及其机制[D];安徽医科大学;2011年
8 胡晓丹;白芍七物颗粒治疗大鼠溃疡性结肠炎的实验研究[D];湖南中医药大学;2012年
9 石凤芹;参松养心胶囊、扶正化瘀胶囊改善大鼠心肌肥厚及对其电生理影响的研究[D];北京中医药大学;2010年
10 周建波;米诺环素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠凋亡相关蛋白表达的影响[D];广西医科大学;2011年
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