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《北京中医药大学》 2011年
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慢性阻塞性肺疾病模型大鼠“肺病及肠”的实验观察

王毅  
【摘要】:“肺合大肠”理论源自《内经》,是具有中医特色的脏腑表里相关理论,它不仅充分地体现了脏腑之间相互作用、相互影响的特性,也深刻地反映出中医学的整体观特点。“肺合大肠”理论肺肠相关的思想常被用于指导具体临床实践,一方面应用于慢性阻塞性肺疾病(COPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺源性心脏病、肺性脑病、支气管哮喘、咳嗽等呼吸道相关疾病,另一方面则运用于消化系统相关疾病,如老年性便秘、顽固性消化性溃疡、慢性肠炎等。“肺病及肠”是“肺合大肠”理论具体表现形式之一,是对中医“肺合大肠”理论的实践认知与具体表达,通过对“肺病及肠”进行相关的观察与研究能够从一个角度印证“肺合大肠”理论,并为进一步揭示“肺合大肠”理论的科学内涵提供依据。 慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是临床常见病、疑难病,临床资料表明患者除呼吸道症状外,还常伴有腹胀、便秘等胃肠道症状。 本课题在文献、理论研究基础上,从COPD角度对“肺病及肠”进行相关实验设计通过观察组织形态学改变、加味桔梗汤的干预作用及检测不同组别不同组织神经肽含量的变化,逐步分析阐明“肺病及肠”的相关特点。论文共分三部分: 第一部分文献综述。 对中医“肺合大肠”理论的研究概况、COPD的相关研究进展进行了系统地综述。 “肺合大肠”理论是中医药学具有代表性的特色理论之一,不仅具有极高的理论价值,而且还长期有效地用于指导中医辨证用药等临床实践,当前国内外众多学者从理论、临床、实验等方面对“肺合大肠”理论进行了大量研究,并取得了一定的进展。 而近年来,日趋严重的COPD高发病率问题已在全球引起关注。严重的进行性气流受限合并诸多肺外(消化道、心血管)并发症使患者生活质量受到严重影响,社会经济负担沉重。随着对COPD临床及实验研究的不断深入,对COPD发生发展的部分机制已渐清晰,即慢性炎症与气流受限是COPD的重要特征。 第二部分理论探讨。 对慢性阻塞性肺疾病中医病机的相关认识与观点进行梳理,并对其中医辨治思路展开分析。 COPD的中医病机可简要地归纳为“本虚标实,下虚上实”。本虚、下虚是指肺、脾、肾三脏亏虚。标实、上实则是指风、寒、湿等外邪及痰、瘀、虚等内邪与病理产物,这些内外诸邪成为肺失肃降,病情加重之诱因。 由于COPD中医病机复杂,常是多种病因合而为病,且病程绵长,易于反复,治疗时应抓住病机(本虚标实)兼顾其他,分清风寒、风热、寒痰、痰热、血瘀、脾虚、肾虚、肺虚等不同而治之,总令肺气得以宣畅为要;而中医药对COPD的辨治优势则可简要概括为急性发作期以减轻症状为主,稳定期以减缓病程进展为长两方面。尤以提高COPD患者稳定期机体免疫力、缩短病程及减少复发为中医药有别于西医治疗COPD的亮点。 以仲景《伤寒论》方证为线索,对《伤寒论》方辨治咳喘的规律进行分析与探讨。 《伤寒论》治咳诸方证治法上体现出张仲景治疗咳喘兼顾表里、寒热、攻补的指导思想;《伤寒论》认为咳喘治疗应视其病之所起而辨证论治,体现出仲景治咳必求于本的治疗原则;《伤寒论》治咳诸方证分列于太阳经、阳明经、太阴经、少阴经、厥阴经等篇中,显示出张仲景重视对咳喘不同表现,不同阶段的动态观察。 第三部分实验研究。 通过观察COPD模型大鼠组织形态学改变确认COPD中存在“肺病及肠”现象。从炎症细胞、细胞因子角度观察加味桔梗汤从肺治肠的干预作用,印证“肺病及肠”。检测不同组别不同组织神经激肽A (NKA).血管活性肠肽(VIP)含量变化,分析探讨加味桔梗汤对于COPD模型大鼠“肺病及肠”从肺论治的可能机制,并以此为基础进一步分析阐明“肺病及肠”NKA、VIP含量变化的相关特点,为更深入地揭示“肺病及肠”发生机制奠定基础。 实验一:COPD模型大鼠“肺病及肠”的病理改变及加味桔梗汤的干预作用 采用气管滴注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型。采用随机数字表法随机分为正常组、模型组、模型给药组、正常给药组,共4组。正常组、模型组灌胃蒸馏水,各给药组于第2-13天、15-28天以加味桔梗汤(桔梗、生甘草、紫苑、浙贝)灌胃。取大鼠肺、肠、心、肝、肾制作光镜标本,观察COPD模型大鼠组织形态学改变。观察结果:①光镜下可见模型组肺组织及支气管显著病理改变(间质增厚,肺泡结构紊乱,炎性细胞浸润,上皮细胞脱落),提示模型组肺泡结构破坏,肺组织受损;②模型给药组肺泡间质炎症减轻(肺泡壁血管充血及炎性细胞浸润改善),提示给予加味桔梗汤能有效改善肺部炎症,减少肺组织损伤;③模型组镜下可见肠组织黏膜层内淋巴细胞增多,腺体排列欠齐整、紧凑等,提示COPD模型大鼠同时存在肠的病理学改变;④模型给药组黏膜层内淋巴细胞明显减少为主要改善,提示加味桔梗汤对COPD模型大鼠的肠组织损伤有改善作用;⑤心、肝、肾组织结构完整,均未见明显异常,提示较之其他脏器,COPD对肠的影响更显著。 通过对不同组织病理形态学观察,可初步确认采用气管滴注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型中存在“肺病及肠”现象。 实验二:COPD模型大鼠“肺病及肠”的气道炎症与胃肠功能改变及加味桔梗汤的干预作用 采用气管滴注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型。模型给药组与正常给药组于第2-13天、15-28天以加味桔梗汤(桔梗、生甘草、紫苑、浙贝)灌胃进行治疗干预,正常组、模型组灌胃蒸馏水进行对照。 一方面,对实验动物进行肺泡灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并用ABC-ELISA法测定BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)含量及淋巴细胞计数,同时观察各组动物体重及肠推进率变化。观察结果:①模型组大鼠BALF中TNF-α、IL-1β含量及淋巴细胞计数均明显增高,提示COPD存在气道炎症与炎症细胞浸润发生;②模型给药组BALF中TNF-a含量及淋巴细胞计数均降低,IL-1β含量也表现出下降趋势,提示给予加味桔梗汤后,COPD气道炎症显著改善。 通过对炎症细胞与细胞因子检测,确认了加味桔梗汤对COPD(“肺病”)气道炎症的治疗作用。 另一方面,观察各组动物体重及肠推进率变化,结果显示:①模型组大鼠肠炭末推进率、体重增长明显降低,提示COPD能够对胃肠传输能力及营养状态产生抑制作用;②模型给药组大鼠肠炭末推进率、体重增长明显改善,提示加味桔梗汤通过对COPD的治疗能够改善胃肠传输能力及营养状态。 通过对肠推进率与体重变化的相关观察,确认了加味桔梗汤对COPD引起的胃肠传输能力及营养状态下降(“肺病及肠”)有改善作用。 对加味桔梗汤药效学指标检测结果综合分析可知,加味桔梗汤从肺论治不仅能有效控制COPD气道炎症,减少肺组织病理损伤,同时对于COPD引起的肠道传输功能障碍及营养状态低下(“肺病及肠”)等病理改变同样具有治疗、改善作用,即从肺论治,改善肺组织病理改变的同时,肠道病理改变亦同时减轻。 实验三:COPD模型大鼠“肺病及肠”的NKA、VIP含量变化及加味桔梗汤的干预作用 以气管滴注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,取各组大鼠肺、肠、心、肝、脾、胃、脑、肾组织,用放免法检测肺、肠等组织中VIP、NKA含量。检测结果:①模型组大鼠肺、肠组织中NKA含量升高,VIP含量降低,其中以肺内NKA增高最具显著性,提示COPD能够引起肺、肠组织中NKA、VIP含量变化,NKA、VIP含量变化与“肺病及肠”有关;②模型给药组大鼠肺、肠组织中NKA含量降低,VIP含量升高,提示加味桔梗汤对COPD引起的肺、肠组织中NKA、VIP含量变化有调节作用;③肺组织中NKA、VIP含量与BALF中TNF-α、IL-1β含量及淋巴细胞计数相关性分析结果提示,加味桔梗汤对COPD气道炎症及肺组织病变的治疗改善作用可能与肺组织中NKA、VIP含量调节有关;④同时各组大鼠心、肝、脾、胃、脑、肾组织中NKA、VIP含量均无显著性差异,上升或下降趋势均不明显,提示COPD对NKA、VIP含量的影响以肺、肠组织间最为显著;⑤肺、肠组织中NKA、VIP含量相关性分析结果,可知肺、肠组织中NKA、VIP含量变化趋势表现出显著的同步性特点,即NKA、VIP含量在肺、肠组织间呈显著的正相关性,加味桔梗汤对COPD气道炎症(“肺病”)及其肠道传输功能障碍与营养状态低下(“肺病及肠”)的调节作用可能与调节肺、肠组织中NKA、VIP含量有关。 结论: ①采用气管滴注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立的COPD大鼠模型,除有肺的病理改变外,还同时伴有肠组织的病理改变,且心、肝、肾组织均未见明显异常。因此,采用气管滴注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立的COPD大鼠模型,肺组织病理改变的同时能引起肠道的特异性的改变(“肺病及肠”)。 ②采用气管滴注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立的COPD大鼠模型,通过给予加味桔梗汤进行药物干预,炎症细胞浸润及细胞因子过度释放均得到缓解,COPD引起的肠道传输功能障碍及营养状态低下(“肺病及肠”)也明显改善。因此,加味桔梗汤从肺论治改善肺组织病理改变的同时,肠道病理改变亦减轻。 ③采用气管滴注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立的COPD大鼠模型,加味桔梗汤治疗干预后大鼠肺肠组织中NKA、VIP含量变化显著,心、脑、脾、胃、肝、肾组织中NKA、VIP NKA、VIP含量变化不仅与气道炎症反应相关指标改变有关,还与肠组织中NKA、VIP含量变化趋势表现出显著的同步性特点(正相关性)。加味桔梗汤从肺治肠治疗“肺病及肠”的效应机制可能与调节肺肠组织中NKA、VIP的含量有关,其具体机制有待进一步深入研究。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R259

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9 李成;电针对脑缺血再灌注模型大鼠谷胱甘肽抗氧化系统调节机理的研究[D];南京中医药大学;2010年
10 王茗蓂;肾白宁对糖尿病肾病模型大鼠单核细胞趋化蛋白—1影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
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