收藏本站
《北京中医药大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

首乌方对帕金森病大鼠血液-纹状体左旋多巴药动学及神经递质的影响

孙晓芳  
【摘要】:研究背景及目的 帕金森病(PD)是一种以黑质、纹状体区多巴胺(DA)能神经元进行性退变、DA含量明显减少为特征的中枢神经系统疾病,临床常用左旋多巴(L-DOPA)替代疗法治疗。L-DOPA在体内转化为DA,可以减轻PD的症状,但随着治疗时间延长,其疗效降低,副作用增强。PD发展导致脑DA储存能力下降,当L-DOPA血药浓度超过治疗阈,而神经元对DA水平波动缓冲能力丧失时,则形成波动性刺激,诱发症状波动、运动障碍等不良反应。L-DOPA自身氧化产生自由基,也可能加速PD患者神经元变性。因此,如何合理地使用L-DOPA,以较小的剂量发挥较大的药效,减少不良反应,是目前面临的重要课题。临床应用中药首乌方与L-DOPA制剂美多芭结合治疗PD,取得了良好效果。首乌方由首乌、鹿茸、天麻等中药组成,是在中医理论指导下针对PD选出的合理中药处方。研究表明,临床使用首乌方可以协同美多芭作用,减少美多芭用量。动物实验显示其可能通过影响兴奋性毒性、氧化损伤等减小、L-DOPA的神经损伤。 微透析采样技术可以监测清醒自由活动动物特定组织细胞外液中物质的动态变化。近年来,该技术被应用于药代-药效学结合研究中,以阐明药物在作用靶部位的浓度-效应-时间三维关系。本实验通过建立血-脑双位点同步微透析采样、高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)和高效液相色谱-电化学检测(HPLC-ED)法,同步监测清醒自由活动大鼠L-DOPA血药浓度-靶部位(纹状体)药物浓度-靶部位递质水平变化情况。观察首乌方对6-羟基多巴胺(6-OHDA)导致的PD模型大鼠血液和纹状体细胞外液L-DOPA药代动力学的影响,以及由L-DOPA引起的脑内多巴胺及其代谢产物和羟自由基变化的影响,并进行药动-药效相结合的分析研究,进一步探讨首乌方对L-DOPA治疗PD的增效减毒和神经保护作用机制。 研究方法 1 HPLC-FLD测定L-DOPA的方法色谱柱为MERCK Lichrospher 100 C18 (5μm,4mm×250mm),预柱为Nova-Pak C18,柱温:35℃,激发波长278nm,发射波长325nm,流动相为:乙二胺四乙酸二钠(0.08mmol·L-1),磷酸二氢钾(70mmol·L-1),庚烷磺酸钠(2.08mmol·L-1),甲醇(10%)。流速1.0ml·min-1。 2 HPLC-ED同步测定单胺类递质、羟自由基和L-DOPA的方法色谱柱为Antec Leyden BVC18分析柱(3μm, 2.1mm×100mm)。Antec DecadeⅡSDC电化学检测器,玻璃碳电极和Ag/AgCl参考电极,工作电压为0.52v。流动相为:乙二胺四乙酸二钠(0.027mmol·L-1)、辛烷磺酸钠(0.74mmol·L-1)、氯化钾(2mmol·L-1)、磷酸二氢钠(100mmol·L-1)、甲醇(15%)、乙腈(1%)、乙酸(0.05%),用磷酸调pH值至3.32,流速0.2mL·min-1。 3大鼠纹状体注射6-OHDA造成PD模型微透析采样前7天,大鼠ip戊巴比妥钠麻醉(40mg·kg-1),埋入探针套管于右侧纹状体内(A:+0.2mm,L:+3mm,V:7.5mm),用牙科水泥固定,纹状体内缓慢注射0.2%的6-OHDA生理盐水溶液(32μg·kg-1 1μL·min-1),造成脑内单点注射6-OHDA所致的PD大鼠模型。对照组注射相应体积生理盐水。 4首乌方对大鼠血液-纹状体细胞外液L-DOPA药代动力学及脑内递质的影响 动物分组与药物处理SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、高剂量对照组、高剂量模型组、低剂量模型组,首乌方+低剂量模型组。参见上述方法造成PD模型,造模当天首次投药,高剂量对照组和高剂量模型组ig美多芭60mg·kg-1(L-DOPA 48mg·kg-1和苄丝肼12mg·kg-1),低剂量模型组ig美多芭30mg·kg-1(L-DOPA 24mg·kg-1和苄丝肼6mg·kg-1),首乌方+低剂量模型组ig首乌方煎剂(生药量:18g·kg-1)和美多芭30mg·kg-1,对照组和模型组ig等体积蒸馏水,连续6天。 手术和微透析第6天以同样方法麻醉大鼠,左侧颈静脉插入血探针,复方氯化钠灌流2μl·min-1过夜。大鼠腹腔埋植导管,从背部引出并固定,用于次日微透析过程中腹腔给药。第7天大鼠清醒自由活动状态下插入脑探针,进行同步血、脑双位点微透析。双位点探针用复方氯化钠灌流(2.5μL·min-1)平衡60min后,脑探针灌流液改为5mmol·L-1的水杨酸钠-复方氯化钠溶液,平衡60min后,开始收集透析液,每15min收集1管。取前4管测定目标检测物,计算均值作为基础水平。之后,各组大鼠经腹腔留置的导管ip L-DOPA和苄丝肼,给药剂量见前。对照组和模型组ip等量生理盐水,收集血、脑透析液至给药后420min。 研究结果 1 HPLC-FLD测定血透析液中L-DOPA的方法测定0.3125~5mg·L-1 5个浓度的L-DOPA标准液,线性关系良好,相关系数(R2)为0.9987。测定0.3125-5mg·L-1的L-DOPA标准,日内、日间相对变异系数(RSD)≤4.9%,最低检测限19μg·L-1。 2 HPLC-ED同时测定脑透析液中单胺类递质、羟自由基和L-DOPA的方法配置含L-DOPA、DA、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、5-羟色胺(5-HT)、2,3-二羟基苯甲酸(2,3-DHBA).2,5-二羟基苯甲酸(2,5-DHBA)、肾上腺素(EP)、去甲肾上腺素(NE)、高香草酸(HVA)的10mix标准液。测定5个不同浓度的10mix标准液,线性关系良好,各物质R2≥0.9991。各检测物在3.125~250μg·L-1浓度的日内、日间RSD≤8.7%,检测限≤1.0μg·L-1。 3 PD模型大鼠血液和纹状体细胞外液L-DOPA药代动力学同步研究PD大鼠腹腔注射L-DOPA后,药物迅速吸收入血,并通过血脑屏障进入纹状体。血液和纹状体细胞外液的药物浓度-时间曲线符合一室模型,纹状体细胞外液药物达峰时间(Tmax)晚于血液,药-时曲线下面积(AUC(o-∞))和达峰浓度(Cmax)小于血液。 4 PD模型大鼠L-DOPA血液药动学-靶部位药动学-靶部位药效学指标的相关性研究L-DOPA药动学指标选择大鼠血液、纹状体细胞外液的药物浓度,药效学指标选择大鼠纹状体细胞外液DA变化率(△DA=(测定浓度-基础值)/基础值)。腹腔注射L-DOPA后,随着血液中L-DOPA浓度的增加,纹状体细胞外液L-DOPA、ΔDA水平也逐渐增加。血液浓度与纹状体细胞外液药物浓度、血药浓度与纹状体细胞外液△DA、纹状体细胞外液药物浓度与纹状体细胞外液△DA均呈现较好的相关性。血药浓度-效应曲线、纹状体细胞外液药物浓度-效应曲线均呈典型的逆时针滞后环。当血液、纹状体细胞外液LDOPA浓度达到最大时,纹状体DA水平并未达到最大值。 5首乌方对PD模型大鼠血液和纹状体细胞外液L-DOPA药代动力学的影响与低剂量模型组相比,首乌方+低剂量模型组L-DOPA血药浓度在6个时间点升高,纹状体细胞外液药物浓度未见升高,而在15min时降低。首乌方使L-DOPA血液AUC(0-∞)增加,Tmax延后,平均驻留时间(MRT(0-∞)延长;使纹状体细胞外液Tmax滞后,MRT(0-t)延长。 6首乌方对PD大鼠纹状体细胞外液DA及其代谢产物的影响6-OHDA造模使模型组纹状体细胞外液DA水平较对照组降低,DOPAC/DA、HVA/DA比率升高。与模型组相比,低剂量模型组、首乌方+低剂量模型组DA基础水平升高,DOPAC/DA、HVA/DA比率基础值降低。腹腔注射L-DOPA后,两组DA水平均迅速升高,然后缓慢回落。与低剂量模型组相比,首乌方+低剂量模型组DA水平升高更显著,而△DA升高幅度较低。两组间DOPAC/DA、HVA/DA比率基础值及变化无差异。 7首乌方对PD大鼠纹状体细胞外液羟自由基的影响以总DHBA (2,3-DHBA与2,5-DHBA之和)代表羟自由基水平。模型组纹状体细胞外液总DHBA较对照组升高。与模型组相比,低剂量模型组、首乌方+低剂量模型组总DHBA基础水平降低。腹腔注射L-DOPA后,总DHBA逐渐升高,275min后缓慢回落。其中高剂量模型组升高最为显著,低剂量模型组居中,首乌方+低剂量模型组总DHBA最低,且有9个时间点低于低剂量模型组。 结论 1本实验建立了大鼠血-脑双位点微透析采样、HPLC-ED同时检测脑透析液中单胺类递质、羟自由基和L-DOPA的方法。成功地对清醒自由活动大鼠L-DOPA血药浓度-纹状体细胞外液药物浓度-纹状体细胞外液多种递质水平进行了相同生物个体的同步动态研究。 2清醒PD模型大鼠L-DOPA血药浓度、纹状体细胞外液药物浓度、纹状体细胞外液△DA三者间具有明显的相关性,血药浓度可以在一定程度上反映靶部位药物浓度及效应指标的变化趋势。 3首乌方可减慢L-DOPA消除,增加血液L-DOPA的吸收,减少纹状体L-DOPA药物浓度波动。 4首乌方协同L-DOPA治疗PD,可使纹状体细胞外液DA浓度更长时间维持在较高水平,同时可以降低△DA,减少DA水平的波动。此协同作用与首乌方对L-DOPA药动学的影响密切相关。 5低剂量L-DOPA可以降低纹状体细胞外液羟自由基基础水平,与首乌方合用降低作用更为显著。首乌方具有抗氧化作用。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 姜宁玲;张培培;陈安九;王德旺;王永庆;;HPLC-荧光法测定血浆及尿左旋多巴浓度的分析[J];江苏医药;2011年11期
2 陆征宇;赵虹;汪涛;陈洁;张琦君;金环;李文婷;;补肾养肝熄风汤对帕金森病小鼠纹状体神经递质和多巴胺受体的影响[J];中医杂志;2011年14期
3 孙伯民;张璟;;帕金森病的药物治疗[J];健康博览;2011年08期
4 吴娜;刘振国;;G蛋白耦连受体激酶在帕金森病发病机制中的研究进展[J];上海交通大学学报(医学版);2011年08期
5 陈生弟;汪锡金;;帕金森病的神经保护治疗——现状与分析[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2010年03期
6 邹勇;黄国琪;;Clinical Observation on Acupuncture Treatment ofParkinson's Syndrome[J];Journal of Acupuncture and Tuina Science;2006年04期
7 邱喜雄;刘品霓;刘立红;蔡晓东;杜立新;雷益;王佩萍;;质子磁共振波谱在帕金森病患者纹状体中的应用研究[J];深圳中西医结合杂志;2011年04期
8 杨宇;;普拉克索治疗帕金森病的疗效分析与评价[J];临床合理用药杂志;2011年29期
9 吴文凤;;帕金森病的研究现状[J];当代医学;2011年18期
10 张磊;陈墅;檀琳;陈良为;;神经干细胞移植治疗帕金森病的研究进展[J];医学综述;2011年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄译腺;李丹;罗蔚锋;刘春风;;CSC对左旋多巴诱发异动症大鼠行为、纹状体A2A受体和mGluR5蛋白表达的影响[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
2 孙晓芳;王丹巧;吴兆恩;李鹏;牛建昭;王继峰;王巍;;帕金森病模型大鼠血液和纹状体细胞外液左旋多巴药代动力学同步研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
3 管强;孙圣刚;曹学兵;徐岩;王岚;;左旋多巴诱发异动症大鼠纹状体前强啡肽原基因与DARPP-32蛋白磷酸化的关系[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
4 骆志坚;段凤菊;王涛;徐岩;;多巴胺D1和谷氨酸NMDA受体参与调控异动症大鼠纹状体△FosB蛋白的表达[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
5 马雅萍;宋璐;刘振国;;大麻素CB1受体在帕金森病运动并发症大鼠基底节的表达研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
6 王巍;赵德忠;孙晓芳;张春颖;;中药首茸方对左旋多巴诱发帕金森病大鼠脑内羟自由基增高的影响(摘要)[A];第七次全国中西医结合虚证与老年病学术会议论文摘要集[C];2003年
7 莫骄;俞蕾平;金国章;镇学初;;左旋千金藤啶碱对左旋多巴诱导运动障碍的作用研究[A];第十二届全国神经精神药理学学术交流会论文集[C];2006年
8 苗海锋;;恩他卡朋联合左旋多巴治疗有剂末现象帕金森病的初步研究[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
9 王巍;赵德忠;孙晓芳;张春颖;;首茸方协助左旋多巴治疗帕金森病的药效研究[A];第五次全国中西医结合养生学与康复医学学术研讨会论文集[C];2006年
10 赵喜林;梁中琴;韩蓉;秦正红;;BBA对实验性帕金森病的治疗作用及其机制研究[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;左旋多巴的药理作用和不良反应[N];上海中医药报;2009年
2 本报记者 石谙丁 (实习);左旋多巴,请用复方制剂[N];医药经济报;2011年
3 魏开敏;服左旋多巴 要防“剂末”和“开关”现象[N];大众卫生报;2009年
4 伊遥;左旋多巴后无来者?[N];医药经济报;2011年
5 魏开敏;服用左旋多巴防“剂末”和“开关”现象[N];农村医药报(汉);2009年
6 副主任医师 龙安民;服用左旋多巴七不宜[N];大众卫生报;2002年
7 范晓艳;左旋多巴可能会引发心脏病[N];医药经济报;2004年
8 本报记者 慕欣;拒绝颤抖的伤痛[N];医药经济报;2011年
9 菲琳;左旋多巴、右苯丙胺可促进脑功能恢复[N];中国医药报;2003年
10 ;小鸟“牙牙学语”似人[N];新华每日电讯;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙晓芳;首乌方对帕金森病大鼠血液-纹状体左旋多巴药动学及神经递质的影响[D];北京中医药大学;2011年
2 林浩;帕金森病大鼠模型中去神经支配纹状体差异表达基因的筛选和帕金森病人脑脊液蛋白质组学分析[D];第二军医大学;2004年
3 夏鹰;雪旺氏细胞和神经干细胞共移植治疗帕金森病动物模型的实验研究[D];复旦大学;2006年
4 张华;慢性缺血对大鼠黑质和纹状体结构及功能的影响[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
5 姚伟;大鼠纹状体多巴胺分泌的电化学记录技术及其在体(in vivo)研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2007年
6 鲁靖;SAPAP3基因敲除小鼠中的皮层—纹状体突触功能缺陷和类OCD行为[D];浙江大学;2007年
7 孔岩;急性脑片中内源性多巴胺对皮层—纹状体突触短时程可塑性的作用[D];苏州大学;2009年
8 王德恒;背部纹状体在奖励和目标导向性行为中的作用[D];华东师范大学;2010年
9 吕红;宁动颗粒及天麻素治疗抽动—秽语综合征的分子机制研究[D];山东大学;2009年
10 王爱萍;可持续多巴胺能刺激治疗帕金森病的罗替戈汀微球的研究[D];吉林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙超;左旋多巴鼻用羧甲基淀粉微球的研制[D];延边大学;2010年
2 蔡敬杰;低剂量左旋多巴对帕金森病大鼠纹状体乙酰胆碱及M_1、M_2受体的影响[D];华中科技大学;2010年
3 冯国栋;肌苷对海人藻酸引起纹状体损伤的保护作用[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
4 徐敬峰;基于MRI的健康成人与帕金森病人的纹状体体积测量研究[D];浙江大学;2008年
5 李芳;皮层电刺激对左旋多巴诱发异动症大鼠纹状体c-fos及ENK表达的影响[D];安徽医科大学;2010年
6 常铮;左旋多巴对帕金森病神经细胞毒性作用及相关保护因素的研究[D];山东大学;2010年
7 郭云云;慢性间断性缺氧对帕金森病模型小鼠行为学及纹状体多巴胺含量的影响[D];石河子大学;2008年
8 吉慧军;Bmi-1沉默对神经干细胞增殖的影响及其作用机制[D];青岛大学;2009年
9 马秀玲;母爱剥夺对雄性成年大鼠行为及纹状体DAT基因表达的影响[D];中南大学;2009年
10 吕立;乙酰左旋多巴乙酯的合成、降解动力学及药代动力学研究[D];广西医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026