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《北京中医药大学》 2012年
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艾燃烧生成物抗衰老效应机制及嗅觉通路作用途径研究

许焕芳  
【摘要】:目的:探讨艾燃烧生成物的抗衰老作用、适宜干预条件、作用机制及作用途径。 方法:(1)以浓度和时间为两因素,采用2×3析因设计,将70只SAMP8小鼠随机分为6个艾烟干预组:低浓度15min组(A1组),低浓度30min组(A2组),中浓度15min组(B1组),中浓度30min组(B2),高浓度15min组(C1组),高浓度30min组(C2组)和模型组(M组),每组各10只。另设10只正常老化小鼠SAMR1为正常组(Z组)。6个艾烟干预组分别用相应浓度和时间的艾烟熏灸4周,M组和Z组只进行相同的抓取。通过避暗实验、Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆行为学的改变;HE染色观察肺组织的病理改变;ELISA法检测脑和血清单胺类神经递质及细胞因子的含量;比色法检测脑和血清抗氧化酶及胆碱类神经递质的含量;RP-HPLC法检测脑内氨基酸类神经递质的含量;PCR-ELISA法检测肝脏端粒酶活性;Western-Blot法检测海马组织中ERK.p38 MAPK和JNK的活性变化。(2)60只昆明小鼠随机分为空白组、艾熏组、假手术组、模型组和模型艾熏组。模型组和模型艾熏组各15只,其余各组均10只。模型组和模型艾熏组采用硫酸锌滴鼻的方法造嗅觉障碍动物模型,假手术组采用蒸馏水滴鼻。以中浓度20min的艾烟干预条件对艾熏组和模型艾熏组进行为期4周的熏灸,其余各组只进行相同的抓取。以埋藏食物小球实验评估造模小鼠的嗅觉障碍,ELISA法检测脑单胺类神经递质和血清细胞因子的含量。 结果:艾燃烧生成物抗衰老效应机制研究的实验结果如下: (1)行为学:M组、艾烟干预6组及Z组小鼠避暗实验的潜伏期及错误次数差异无统计学意义。M组、艾烟干预6组及Z组小鼠Morris水迷宫定位航行实验的潜伏期随训练天数的增加呈波动性下降趋势,但8组间差异无统计学意义;训练天数对潜伏期的影响显著,尚不能看出艾烟干预时间、浓度及两者的交互作用对潜伏期的影响;总游程随训练天数的增加呈波动性下降趋势,训练天数对总游程的影响显著,艾烟干预时间和浓度的交互作用可能对其有影响;Morris水迷宫的空间探索实验各指标在8组间差异无统计学意义。 (2)细胞因子:M组小鼠IL-4(脑、血清和脾脏)和IL-10(血清和脾脏)等Th2细胞因子的水平显著低于Z组,而IFN-γ(脑、血清和脾脏)、IL-2(血清)及TNF-α(血清和脾脏)等Thl细胞因子的水平显著高于Z组。艾烟干预各组各项指标或优于M组,或与M组无差异。 (3)抗氧化能力:M组血清和脑MDA的含量显著高于Z组,但其血清SOD和GSH-Px活性和脑GSH-Px活性则显著低于z组。艾烟干预各组各项指标或优于M组,或与M组无差异。析因分析显示,时间和浓度两因素对血清SOD、血清和脑GSH-Px的影响均存在交互作用,艾烟干预各组中血清SOD活性以B2组(中浓度30min)为优,而血清和脑GSH-Px活性均以B1组(中浓度15min)为优。 (4)胆碱类神经递质:M组脑AChE的活力高于z组,而ChAT的活力低于z组,差异有统计学意义。艾烟干预各组小鼠AChE的活力与M组无显著差异,A2组、B1组和B2组小鼠脑ChAT的活力显著高于M组,其余各组与M组无差异。 (5)单胺类神经递质:M组血清和脑内3种单胺类神经递质的含量与Z组相比均显著降低。艾烟干预各组单胺类神经递质的含量或优于M组,或与M组无差异。析因分析显示,时间和浓度两因素对3种单胺类神经递质均存在交互作用。艾烟干预各组血清和脑内3种单胺类神经递质的含量均以B1组为最高。 (6)氨基酸类神经递质:M组GABA的含量低于Z组,而Glu和Asp的含量则高于Z组,差异均有统计学意义。艾烟干预各组小鼠3种氨基酸类神经递质的含量或与M组无差异,或优于M组。对GABA的析因分析显示,时间和浓度两因素间不存在交互作用,但两因素对GABA的含量均有影响。艾烟干预各组中,以B2组的结果为优。 (7)肺组织病理:各组小鼠肺泡腔及间质均可见到不同程度的红细胞及炎性细胞浸润。 (8)端粒酶:M组肝脏端粒酶活性显著高于Z组,艾烟干预各组中B1组、B2组和C1组端粒酶活性均低于M组,差异有统计学意义,其余各组与M组无差异。 (9)MAPK:M组小鼠海马ERK.P38.JNK的灰度值显著高于z组,艾烟干预各组小鼠海马P38、ERK.JNK的灰度值均显著低于M组。析因分析显示,在对P38的影响中,艾烟的适宜干预参数为:中浓度;对JNK的影响中,艾烟的适宜干预参数为:低浓度,30min。 艾燃烧生成物嗅觉通路作用的研究结果如下: (1)体重:实验前各组体重无显著差异,实验后空白组、艾熏组和假手术组3组体重均高于模型组和模型艾熏组。 (2)BFPT实验:造模前,各组小鼠BFPT实验及对照实验成绩无显著差异;造模后,模型组和模型艾熏组BFPT实验及对照实验均显著高于其它3组。实验后,模型艾熏组小鼠BFPT实验及对照实验成绩显著高于其它4组,且4组间无显著差异。模型组的成绩较造模后降低,并与假手术组无差异。模型艾熏组小鼠成绩较造模后亦有所降低,但高于模型组,差异有统计学意义。艾熏组小鼠BFPT成绩与空白组和假手术组无显著差异。 (3)脑单胺类神经递质:5组间差异无统计学意义。 (4)血清细胞因子:模型组和假手术组血清细胞因子的含量未见差异。模型组、模型艾熏组和假手术组血清IFN-γ和IL-2含量均高于空白组,血清IL-4和IL-10的含量与空白组无差异,但有80%的把握发现模型艾熏组血清IL-10的含量低于空白组。此外,艾熏组和空白组间除有80%把握发现艾熏组血清IL-2的含量高于空白组外,其它细胞因子在两组间未见差异。 结论:艾燃烧生成物抗衰老效应机制研究的结论如下: (1)艾烟干预不会加重SAMP8小鼠的衰老进程,艾烟干预可通过提高胆碱类和单胺类神经递质的含量,降低氨基酸类神经递质的神经毒性作用,提高抗氧化损伤能力、调整Thl/Th2细胞因子的偏移状态及降低肝脏端粒酶的过表达等起到抗衰老作用。 (2)艾烟干预的适宜参数因指标的不同而有所变化:对提高单胺类神经递质含量而言,艾烟的适宜干预参数为中浓度15min;对提高抗氧化能力而言,艾烟的适宜干预参数为中浓度15min或30min;对调整Th1/Th2细胞因子的偏移而言,艾烟的适宜干预参数为中浓度。 (3)艾烟干预对SAMP8小鼠学习记忆行为学的影响不显著。 (4)艾烟干预可通过MAPK通路起作用,对降低P38灰度值而言,艾烟的适宜干预参数为中浓度,对降低JNK的灰度值而言,艾烟的适宜干预参数为低浓度30min。 艾燃烧生成物嗅觉通路作用的结论如下: (1)10μ15%ZnS04连续4天滴鼻确可造成小鼠嗅觉障碍模型,但此模型可逆,嗅觉障碍于4周内逐渐恢复。 (2)硫酸锌滴鼻造模方法能引起小鼠应激反应,促使炎症的发生。 (3)本实验尚不能看出艾烟的嗅觉通路作用。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R245.8

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