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《北京中医药大学》 2012年
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甘石青黛膏对大鼠湿疹模型皮损作用机制研究

孙占学  
【摘要】:目的 1观察中药甘石青黛膏对大鼠湿疹模型皮损作用的治疗效果。 2从湿疹皮损LTB4水平、CysLTR1和CysLTR2表达、角质形成细胞(KC)与淋巴细胞(LYM)的凋亡以及皮损Bcl-α与Bax蛋白调控表达方面探讨中药甘石青黛膏治疗湿疹的可能作用机制。 方法 本课题研究采用两部分进行: 1甘石青黛膏对大鼠湿疹模型皮损作用的疗效观察 大鼠湿疹模型造模成功后进行中药甘石青黛膏干预,并与安慰剂对比。皮损的评分采用赵辨EASI评分法,皮损总体疗效判定标准参照郑筱萸主编之《中药新药临床研究指导原则》(试行)执行,进一步观察湿疹模型红斑、水肿、表皮剥脱、苔藓化等变化。 2甘石青黛膏对大鼠湿疹模型皮损作用机制研究 ①采用ELISA法,在实验0天、7天、14天测定治疗组和对照组大鼠湿疹模型皮损白三烯B4(LTB4)含量。 ②采用Western blot法,检测治疗组和对照组大鼠湿疹模型干预前后皮损半胱氨酰白三烯受体(CysLTR1和CysLTR2)表达。 ③采用TUNEL法检测治疗组和对照组大鼠湿疹模型皮损角质形成细胞(KC)与淋巴细胞(LYM)的凋亡情况。 ④采用原位杂交技术检测治疗组和对照组大鼠湿疹模型皮损Bcl-α与Bax蛋白调控表达。 结果 1疗效:甘石青黛膏干预大鼠湿疹模型皮损,在皮损的红斑、水肿、表皮剥脱以及苔藓化方面,与干预前相比,差异极显著(P0.01),干预后与安慰剂组相比差异极显著(P0.000),各项指标疗效优于安慰剂组;对于两组大鼠湿疹模型皮损干预后总体疗效评价中,安慰剂组总有效率为42.10%,甘石青黛膏组总有效率为72.22%,经统计学处理,P0.05,差异显著,甘石青黛膏总体疗效优于安慰剂组。 2机制: ①LTB4水平:空白组大鼠在实验前后皮损LTB4浓度基本持平,安慰剂组和甘石青黛膏组大鼠干预后皮损LTB4浓度较干预前明显降低(P0.01),而甘石青黛膏组大鼠皮损LTB4浓度降低最明显,与安慰剂组疗后相比具有明显差异(P0.01);而且随用药时间延续,LTB4含量逐渐降低。研究结果表明甘石青黛膏能够抑制皮肤LTB4释放,而且对LTB4释放控制程度,随疗程增加而增加。 ②CysLTR1和CysLTR2:在干预前模型组皮损的CysLTR含量明显高于空白大鼠皮肤CysLTR蛋白含量;干预2周以后,中药甘石青黛膏组和安慰剂组CysLTR含量均有减少,但甘石青黛膏组CysLTR含量减少最明显,二者相比具有明显差异(P0.01);而在干预后,应用Western-blot法测定受体蛋白表达,中药甘石青黛膏组CysLTR1和CysLTR2表达明显弱于空白组和安慰剂组。 ③角质形成细胞(KC)与淋巴细胞(LYM)的凋亡:空白组大鼠皮肤在实验0天和14天均可见少量凋亡细胞,两者相比没有差异(P0.05);安慰剂组大鼠皮损干预前可见少量凋亡细胞,干预后凋亡细胞数量增加,与疗前相比较具有显著性差异,(P0.05);甘石青黛膏组大鼠皮损干预前可见少量凋亡细胞,与安慰剂组相比没有显著性差异,干预后凋亡细胞数量明显增加,与疗前相比较具有极显著性差异(P0.001),具有统计学意义;安慰剂组和甘石青黛膏组疗后相比,具有极显著性差异(P0.000),后者优于前者。 ④Bcl-α与Bax蛋白表达:甘石青黛膏组大鼠皮损在0d角质形成细胞和淋巴细胞Bcl-α蛋白呈强阳性表达,在14d后阳性表达明显减弱,前后相比有极显著性差异(P0.001);安慰剂组和甘石青黛膏组在Od Bcl-α蛋白表达相比没有显著性差异(P0.05),14d后Bcl-α蛋白表达相比有极显著性差异(F=11.79,P0.001),甘石青黛膏组对Bcl-α蛋白抑制优于安慰剂组;甘石青黛膏组大鼠皮损在0d角质形成细胞和淋巴细胞Bax蛋白呈阳性表达,在14d后阳性表达增强,前后相比有极显著性差异(P0.001);安慰剂组和甘石青黛膏组在Od Bax蛋白表达相比没有显著性差异(P0.05),14d后Bax蛋白表达相比有极显著性差异(F=-31.30,P0.001)。甘石青黛膏组对Bax蛋白具有促进作用,其作用优于安慰剂组。 结论 中药甘石青黛膏对大鼠湿疹模型皮损具有控制红斑,消除水肿,促进破损的表皮修复,抑制苔藓化作用;中药甘石青黛膏能够抑制抑制LTB4释放、抑制或拮抗皮损中CysLTR、抑制角质形成细胞增殖和促进角质细胞和淋巴细胞凋亡、抑制角质形成细胞和淋巴细胞Bcl-α蛋白表达,促进角质形成细胞和淋巴细胞Bax蛋白表达作用。本课题创新点是首次从湿疹炎症因子与受体、细胞凋亡与凋亡调控蛋白角度对中药外治湿疹作用机制进行研究。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R285.5

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