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《北京中医药大学》 2012年
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活血安心方有效组分配伍对高脂血症大鼠急性心肌梗死后心室重塑的影响及机理研究

张云  
【摘要】:冠心病属中医“胸痹”、“心痛”范畴,急性心肌梗死(AMI)中医认为是“胸痹”、“心痛”的重症,归纳为“真心痛”。其根本病机为本虚标实,表现为心、肾、气、血虚损和血淤、痰浊、气滞、寒凝等病理症状,临床常合并有高脂血症或糖尿病。积极防治AMI后左心室重塑对于预防心力衰竭的发生,改善AMI患者的预后有着重要的临床意义。目前国内外尚无改善AMI后心室重塑的特效药物,活血安心方是导师在多年临床实践过程中提炼的治疗冠心病疗效确切的经验方,采用靶向相对明确的有效组分配伍组方新模式,便于质量控制和疗效评价。并根据标本兼顾的治疗原则采用益气活血、祛痰化瘀加养心安神法,临床疗效显著。本研究观察活血安心方有效组分的五种不同配伍组对高脂血症大鼠AMI后心室重塑相关药效学指标的改善作用,进行有效组分配伍的优化研究,并针对优化配伍方进行改善高脂血症大鼠AMI后心室重塑的机理探讨。 目的 1观察活血安心方有效组分不同配伍方对高脂血症大鼠AMI后心室重塑相关指标及血脂的影响,筛选疗效最佳的优化配伍方。 2从抗炎症损伤、抗过氧化损伤、抑制基质降解和促血管新生等方面探讨筛选出的最佳优化配伍方对高脂血症大鼠AMI后心室重塑的影响机理。 材料与方法 1采用高脂饲料预先喂养大鼠15d,测血脂升高后行冠状动脉左前降支结扎制作高脂血症急性心肌梗死大鼠模型。分为正常组,假手术组,模型组,阳性对照药复方丹参滴丸组和五个有效组分不同配伍组。观察给药7d和21d这两个时间点的心脏指数、心肌梗死面积、无创伤心功能检测心室内径、心室容量、心脏射血分数和左心室短轴缩短率以及石蜡切片HE染色和电镜心肌形态结构等具有代表性的反应心室重塑的指标,系统全面地评价活血安心方各有效组分配伍对AMI后心室重塑的药效作用。 2采用高脂血症大鼠AMI模型,分为假手术组、模型组、阳性对照药复方丹参滴丸组和活血安心方有效组分优化配伍组。(1)探讨活血安心方有效组分配伍抗炎症性损伤在心室重塑全过程中发挥作用的机理:RT-PCR去检测左心室心肌梗死区、边缘区和非梗死区TLR4和NFκB mRNA表达水平,WB法检测左心室心肌梗死区、边缘区和非梗死区TLR4和NFκB蛋白表达水平,ELISA法检测左心室心肌梗死区、边缘区、非梗死区和血清中炎性细胞因子TNF a和IL1β的表达水平;(2)探讨活血安心方有效组分配伍抗过氧化损伤在心室重塑进展阶段发挥作用的机理:紫外分光光度计法检测左心室心肌梗死区、边缘区、非梗死区和血清中iNOS和eNOS的活力、内源性抗氧化酶tSOD活力以及过氧化产物MDA的含量;(3)探讨活血安心方有效组分配伍在心室重塑的恶化阶段抑制损伤分子MMP9和促进血管新生发挥保护作用的机理:采用RT-PCR法检测左心室心肌梗死区、边缘区和非梗死区HIF1α和VEGF mRNA表达水平,WB法检测左心室心肌梗死区、边缘区和非梗死区HIF1α和VEGF蛋白表达水平,ELISA法检测左心室心肌梗死区、边缘区、非梗死区和血清中基质金属蛋白酶MMP9和TXB2的表达水平。 结果 1高脂血症大鼠AMI后心肌病理、心脏指数及心功能的变化高脂血症大鼠AMI后7d左心室的病理改变有:全心指数和左心指数显著增加,左室舒张末期容量和左室收缩末期容量显著增加,心脏射血分数和左室缩短分数显著下降,每博量无显著改变;AMI后21d左心室的病理改变有:全心指数和左心指数明显高于假手术组但较7d无进一步增加,心肌梗死面积较7d进一步扩大(56.43±11.32 VS 44.26±8.18)且心肌胶原沉积和纤维化较7d明显加重,左室舒张期内径和左室收缩期内径较7d进一步明显扩大,尤其是舒张末期内径扩大更明显(LVIDd:0.71±0.06 VS 0.64±0.05,LVIDs:0.50±0.05 VS 0.48±0.05),左室舒张末期容量和左室收缩末期容量较7d进一步显著增加(EDV:0.78±0.14 VS0.50±0.06,ESV:0.42±0.12VS0.17±0.05),每博量较7d减少(SV:0.34±0.12VS 0.30±0.08)。 2五个有效组分配伍方对高脂血症大鼠AMI后梗死面积、心脏指数、心功能的影响给药7d:有效组分配伍组三号方和五号方明显缩小梗死面积,缩小左室舒张期内径和左室收缩期内径,其中配伍三号方和五号方作用较一号方有显著优势。配伍五号方给药7d对左室收缩末期容量有显著下调作用,显著升高心脏射血分数和左室缩短分数。三号方和五号方梗死部位外膜、肌层和内膜层轮廓尚可见,心肌细胞残存较多,胶原沉积和炎症细胞浸润较模型组明显减少;给药21d:有效组分配伍五号方能明显降低全心指数和左心指数,明显缩小左心室梗死面积,缩小左室舒张期内径和左室收缩期内径,减少左室舒张末期容量和收缩末期容量,升高心脏射血分数和左室缩短分数。 3五个有效组分配伍方对血脂的影响给药7d:活血安心方五个有效组分配伍组均能显著降低血清CHO.TG和VLDL的水平。配伍二号方能降低血清LDL的水平。给药21d:活血安心方有效组分配伍四号、五号方对血脂各项指标均有显著下调作用,三号方对TG、LDL和VLDL也有下调作用。其中有效组分配伍四号和五号方对各项血脂的下调作用比配伍一号、二号方作用更明显。 4 AMI后与心室重塑相关的炎症性损伤、过氧化损伤、血管新生、基质降解与血凝状态的变化(1)炎症性损伤:高脂血症大鼠急性心肌梗死后7d左心室心肌梗死区和边缘区心肌组织TLR4和NF K B mRNA和蛋白表达水平显著升高,炎症细胞因子TNFα和IL1β在血清、心肌梗死区和边缘区均显著升高。梗死后21d左心室心肌梗死边缘区和非梗死区TLR4和NFκB mRNA和蛋白表达水平显著升高,炎症细胞因子TNFα和ILlβ在心肌梗死边缘区和非梗死区均显著升高,血清中TNFα也明显升高;(2)过氧化损伤:高脂血症大鼠急性心肌梗死后7d左心室心肌梗死区、边缘区和非梗死区iNOS的活力均显著升高,而在相同区域eNOS的活力则显著下降,左心室心肌梗死区和边缘区抗氧化酶tSOD的活力显著下降,而过氧化产物MDA在心肌梗死区、边缘区、非梗死区和血清中的含量均显著升高。梗死后21d左心室心肌梗死边缘区和非梗死区iNOS的活力显著升高,而在三个区域的活力均显著下降。血清中iNOS和eNOS的活力改变不明显,左心室心肌梗死区、边缘区和非梗死区tSOD的活力均显著下降,而MDA的含量在心肌梗死边缘区、非梗死区和血清中均显著升高;(3)血管新生、基质降解与血凝状态:高脂血症大鼠心肌梗死后7d和21d左心室心肌梗死区HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白的表达水平均升高,而梗死边缘区和非梗死区HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白的表达水平均不升高。高脂血症大鼠AMI后7d和21d左心室心肌梗死区和边缘区心肌组织MMP9蛋白的表达量明显增高。高脂血症大鼠AMI后7d和21d血清和心肌组织各区域中TXB2水平均无显著性改变。 5活血安心方有效组分配伍对高脂血症大鼠AMI后TLR4、NFκB、iNOS、tSOD、HIF-1α和VEGF的影响(1)抗炎症性损伤:活血安心方给药7d能显著下调心肌梗死边缘区TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达水平,显著下调心肌梗死区和边缘区TNFα和IL1β的表达水平。给药21d能能显著下调心肌梗死边缘区和非梗死区TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达水平,显著下调心肌梗死边缘区和非梗死区TNFα和IL1β的表达水平,给药21d对血清中的TNFα亦有明显下调作用。活血安心方给药21d对心肌非梗死区TLR4和NFκB mRNA和蛋白、TNFα和ILlβ的下调作用较复方丹参滴丸组作用明显;(2)抗过氧化损伤:活血安心方给药7d能显著下调心肌梗死区和边缘区iNOS的活力,上调梗死区、边缘区和非梗死区eNOS的活力,显著降低心肌各区域及血清中MDA的含量,提高梗死边缘区tSOD的活力;给药21d能显著下调心肌梗死边缘区和非梗死区iNOS的活力,上调心肌梗死区、边缘区和非梗死区eNOS的活力,显著下调梗死边缘区、非梗死区和血清中MDA的含量,提高梗死边缘区和非梗死区tSOD的活力。活血安心方给药21d对心肌梗死边缘区iNOS活力的下调作用和tSOD活力的上调作用较复方丹参滴丸明显;(3)促血管新生和减轻基质降解:活血安心方有效组分配伍给药7d和21d组左心室心肌梗死区HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白的表达水平均较模型组和阳性对照药组显著升高。活血安心方有效组分配伍和阳性对照药复方丹参滴丸给药7d和给药21d均能显著减少左心室心肌梗死区和边缘区心肌组织MMP9蛋白的表达量。血安心方和复方丹参滴丸对TXB2水平均无明显调节作用。 结论 1高脂血症大鼠AMI后7d至21d心室重塑各项指标均在进行性加重,活血安心方有效组分配伍五号方即全方具有显著的降脂和抗心室重塑的作用。随着给药时间的延长其作用明显优于中药对照药和其他有效组分配伍组。 2炎症性损伤在心室重塑的全过程中均起重要作用,氧化应激诱导细胞凋亡促进心室重塑的进一步发展,基质降解和血管新生是心室重塑恶化阶段的损伤与保护机制。活血安心方有效组分优化配伍方具有显著的抗炎、抗氧化、抑制基质降解和促血管新生的作用,其抗炎和抗氧化作用优于中药对照药复方丹参滴丸。 3 TLR4是近年来发现的介导无菌性炎性损伤的膜表面分子。本文从TLR4-NFκB-炎性因子通路加以深入探讨。此外,促血管新生被认为是治疗急性心肌梗死的新曙光,本文从HIF1α-VEGF途径探讨了中药促血管新生对梗死后心室重塑的影响。发现活血安心方有效组分优化配伍方对高脂血症急性心肌梗死的保护作用是通过抑制TLR4-NFκB-炎性因子通路、抗过氧化损伤、抑制基质降解和促血管新生实现的。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R285.5

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9 张澍;犬自体骨髓干细胞移植修复受损心肌的实验研究[D];武汉大学;2004年
10 倪玉霞;冠心Ⅱ号联合骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究[D];广西医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄海森;瓜蒌通脉丸对高脂血症大鼠血管内皮和血小板功能及L-Arg/NO通路的影响[D];河北大学;2010年
2 刘小虎;山葛降脂分散片的药效学研究[D];辽宁中医药大学;2010年
3 张孟瑜;FXR调控下Bsep和Ntcp在高脂血症大鼠胆固醇代谢中的作用机制[D];泸州医学院;2011年
4 杨光;枳椇子水煎液对高脂血症大鼠TC/TG影响的实验研究[D];长春中医药大学;2009年
5 杨诗杰;消栓降脂丸对高脂血症大鼠血脂和血液流变学的影响[D];郑州大学;2005年
6 胡浩;高胆固醇血症中医辨证分型研究[D];北京中医药大学;2008年
7 杨智源;枳椇子水煎液对高脂血症大鼠LDL-C、HDL-C影响的实验研究[D];长春中医药大学;2009年
8 苏琳;祛痰化瘀、补益肝肾方对高脂模型大鼠脂蛋白受体表达的对比研究[D];辽宁中医药大学;2008年
9 黄敬文;降脂方对高脂血症大鼠血脂及脂质过氧化的影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2007年
10 李巍巍;自拟降脂汤对实验性高脂血症大鼠TC、TG干预的实验研究[D];长春中医药大学;2009年
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