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《北京中医药大学》 2013年
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匙羹藤总皂苷干预KK-Ay小鼠胰岛素抵抗及作用机制研究

秦灵灵  
【摘要】:本文由综述部分和实验部分组成,综述部分由2型糖尿病胰岛素抵抗发病机制研究进展、中药活性成分抗糖尿病作用机制研究进展以及匙羹藤现代药理作用研究进展三部分组成。实验部分由匙羹藤总皂苷对KK-Ay小鼠的干预作用、匙羹藤总皂苷对KK-Ay小鼠脂肪组织胰岛素信号通路的影响两部分组成。 实验部分一匙羹藤总皂苷对KK-Ay小鼠的干预作用 目的:观察匙羹藤总皂苷对2型糖尿病KK-Ay小鼠血糖、血脂以及胰岛素抵抗的干预作用。方法:以自发型2型糖尿病胰岛素抵抗小鼠(KK-Ay小鼠)为实验对象,将成模KK-Ay小鼠随机分为模型组、吡格列酮组(每天4.05mg/g体重)、匙羹藤总皂苷组A(每天15g生药材/g体重),选取C57BL/6J小鼠随机分为正常组,匙羹藤总皂苷给药组B(每天15g生药材/g体重),进行以下研究:1、每周观察血糖、体重以及摄食量变化情况;2、第4、8周进行口服葡萄糖耐量(OGTT)实验,计算曲线下面积;3、实验结束后,取血清用生化法测定血总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白浓度,用放免法测定空腹血清胰岛素(Fins)浓度,并计算胰岛素敏感指数(ISI)。结果:①在给药过程中,模型组小鼠在8周实验的过程中空腹血糖呈逐渐上升的趋势。与模型组相比,吡格列酮组小鼠空度血糖在给药5周后开始降低(P0.05,P0.01)并持续到实验结束,匙羹藤总皂苷组A在给药4周后开始显著降低(P0.01),并持续到实验结束;与正常组小鼠相比,模型组血糖显著升高(P0.01),匙羹藤总皂苷组B小鼠血糖没有变化。②在给药过程中,模型组小鼠体重从实验开始到第6周逐渐增高,从第6周到第8周略有下降趋势。与模型组相比,吡格列酮组小鼠体重从第7周开始降低(P0.05),匙羹藤总皂苷给药组A从第3周开始降低(P0.05),从第4周开始显著降低,并持续到实验结束;与正常组小鼠相比,模型组小鼠体重明显升高(P0.01),匙羹藤总皂苷组B小鼠体重没有变化。③与正常组相比,模型组FPG、Fins水平明显升高(P0.01),ISI明显降低(P0.01),匙羹藤总皂苷组BFPG、Fins、ISI没有差异性改变;与模型组相比,吡格列酮组FPG、Fins水平降低(P0.05,P0.01),ISI升高(P0.01),匙羹藤总皂苷组AFPG、Fins水平降低(P0.05),ISI升高(P0.05)。④药物干预8周后,与正常组相比,模型组小鼠总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白均明显高于(P0.01),匙羹藤总皂苷给药组B血脂没有差异性变化;与模型组相比,匙羹藤总皂苷组A甘油三酯、低密度脂蛋白有所降低(P0.05),总胆固醇,高密度脂蛋白水平没有明显改变。⑤第四周:与正常组相比,模型组曲线下面积(AUC)明显升高(P0.01),匙羹藤总皂苷组B没有差异性改变;与模型组相比,吡格列酮组AUC降低(P0.05),匙羹藤总皂苷组AAUC明显降低(P0.01)。第八周:与正常组相比,模型组AUC明显升高(P0.01),匙羹藤总皂苷组B没有差异性改变;与模型组相比,吡格列酮组AUC明显降低(P0.01),匙羹藤总皂苷组A AUC明显降低(P0.01)。结论:匙羹藤总皂苷对具有胰岛素抵抗特征的2型糖尿病KK-Ay小鼠有治疗作用,并推测与改善胰岛素抵抗有关。 实验部分二匙羹藤总皂苷对KK-Ay小鼠脂肪组织胰岛素信号通路的影响 目的:探讨匙羹藤总皂苷对2型糖尿病KK-Ay小鼠脂肪组织胰岛素信号通路的影响。方法:以27只自发型2型糖尿病胰岛素抵抗小鼠(KK-Ay小鼠)为实验对象,将成模KK-Ay小鼠随机分为模型组、吡格列酮组(每天4.05mg/g体重)、匙羹藤总皂苷组A(每天15g生药材/g体重),选取9只C57BL/6J小鼠随机分为正常组,进行以下研究:1、采用蛋白免疫印迹法测定脂肪组织中蛋白激酶B (AKT), P-AKT (Ser473), P-AKT (Thr308)、PDK-1蛋白表达量;2、采用实时荧光PCR法测定脂肪组织中PPAR γ mRNA、 APNmRNA、PI3κ-p85mRNA、PTENmRNA、GmT4mRNA、CAPmRNA的表达量。结果:①与正常组相比,模型组脂肪组织PPAR γ mRNA表达量降低(P0.01);与模型组相比,吡格列酮组、匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织PPAR γ mRNA均增加(P0.05)。②与正常组相比,模型组脂肪组织APNmRNA表达量降低(P0.05);与模型组相比,吡格列酮组、匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织APNmRNA表达量均增加(P0.01)。③与正常组相比,模型组脂肪组织PI3κ-p85mRNA表达量降低(P0.05);与模型组相比,匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织PI3κ-p85mRNA增加(P0.05)。④与正常组相比,模型组P-AKT (Thr308)蛋白表达量显著降低(P0.01);与模型组相比,吡格列酮组小鼠脂肪组织P-AKT (Thr308)蛋白表达量升高(P0.05),匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织P-AKT (Thr308)蛋白表达量显著升高(P0.01)。与正常组相比,模型组P-AKT (Ser473)蛋白表达量降低(P0.05);与模型组相比,匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织P-AKT (Ser473)蛋白表达量升高(P0.05)。与正常组相比,模型组AKT第308位Thr磷酸化程度显著降低(P0.01);与模型组相比,吡格列酮组、匙羹藤总皂苷组A小鼠AKT第308位Thr磷酸化程度均显著升高(P0.01)。与正常组相比,模型组AKT第473位Ser磷酸化程度显著降低(P0.01);与模型组相比,匙羹藤总皂苷组A小鼠AKT第473位Ser磷酸化程度显著升高(P0.01)。⑤与正常组相比,模型组脂肪组织PDK-1蛋白表达量显著增加(P0.01);与模型组相比,吡格列酮组小鼠脂肪组织PDK-1蛋白表达量降低(P0.05),匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织PDK1蛋白表达量显著降低(P0.01)。⑥与正常组相比,模型组脂肪组织PTENmRNA表达量没有显著变化,但是与模型组相比,吡格列酮组、匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织PTENmRNA降低(P0.05)。⑦与正常组相比,模型组脂肪组织GluT4mRNA表达量降低(P0.05),与模型组相比,吡格列酮组、匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织GluT4mRNA显著升高(P0.01)。⑧与正常组相比,模型组脂肪组织CAPmRNA表达量显著降低(P0.01),与模型组相比,吡格列酮组、匙羹藤总皂苷组A小鼠脂肪组织CAPmRNA显著升高(P0.01)。结论:匙羹藤总皂苷可通过作用于脂肪组织胰岛素介导的信号通路缓解胰岛素抵抗。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R259

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