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《北京中医药大学》 2013年
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芪卫颗粒治疗DN临床观察及调节PEDF/USF_2表达对DN肾纤维化的干预机制研究

马鸣飞  
【摘要】:本论文分为文献研究、临床观察、实验研究三部分。 文献研究介绍了近年来国内外对糖尿病肾病(DN)发病机制研究的主要观点、进展情况和发展趋势,以及中医对DN病因病机、辨证论治和实验研究等方面的进展情况,初步探讨了目前研究尚待解决的问题 临床观察目的:观察芪卫颗粒防治糖尿病肾病的临床疗效。方法:将70例证属气阴两虚、肾络瘀滞的糖尿病肾病Ⅲ期及Ⅳ期患者随机分为缬沙坦组和芪卫颗粒组,缬沙坦组采用基础治疗加缬沙坦口服,芪卫颗粒组采用基础治疗加芪卫颗粒口服,疗程为3个月,观察实验前后两组患者的中医临床症状、尿蛋白、早期血清标志物TGF-β1、CRP变化情况。结果:与缬沙坦组比较,芪卫颗粒组患者临床症状明显减轻(P0.05),尿蛋白、血清TGF-β1、CRP水平明显降低(P0.05);两组综合疗效比较,芪卫颗粒组总有效率为87.9%,缬沙坦组总有效率为66.7%,芪卫颗粒组优于缬沙坦组,(P0.05);整个治疗阶段未见不良反应。结论:芪卫颗粒可明显改善DN患者的临床症状,减少尿白蛋白排泄,抑制DN机体微炎症状态、下调致纤维化因子表达水平,临床观察未见不良反应。 实验研究目的:观察芪卫颗粒调节PEDF/USF2表达对DN肾纤维化的干预作用。方法:将SPF级12周龄雄性自发性2型糖尿病动物模型KK-Ay小鼠60只按血糖值随机分为模型组,芪卫颗粒组,缬沙坦组,并选20只C57BL/6J小鼠为正常对照组。连续给药12周,实验结束时麻醉小鼠后取血并处死动物,取肾脏,检测各组血糖、糖化血红蛋白(HbAlc)、尿白蛋白排泄率(UAER)、尿微量白蛋白/尿肌酐比率(ACR)、肾重/体重(KW/BW)等指标;用光镜和电镜观察肾组织的结构变化,Masson染色观察肾脏纤维化程度,计算肾小球硬化指数。RT-PCR检测肾组织中PEDF、USF2、TGF-β1的mRNA表达;western blot检测肾组织中PEDF、USF2、TGF-β1、CTGF、ILK、MMP-9、TIMP-1的蛋白表达,免疫组化染色检测TGF-β1、Ⅳ型胶原、FN、LN在肾组织中的表达情况。 结果:实验一:与正常对照组比较,模型组肾小球面积增大、系膜区基质增多、系膜区面积/毛细血管襻面积增加、基底膜明显增厚、硬化指数(GSI)明显升高,尿蛋白明显增加(P0.05)。经治疗后,与模型组比较,芪卫颗粒组和缬沙坦组组织病理可见肾小球硬化和间质纤维化程度明显减轻,生化检验和图形半定量分析结果显示24hUAER、 ACR、KW/BW、MRA/CCA、GA、GBM、GSI等指标均明显降低(p0.05)。实验二:与正常对照组比较,模型组肾组织中USF2、TGF-β1的mRNA和蛋白表达明显升高,PEDF的mRNA和蛋白表达明显降低;经治疗后,与模型组比较,芪卫颗粒组和缬沙坦组PEDF的mRNA和蛋白表达明显上调,USF2、TGF-β1表达显著下降(p0.05);芪卫颗粒组和缬沙坦组组间比较无明显差异(p0.05);相关性分析结果显示,PEDF与TGF-β1之间相互呈负线性相关,USF2和TGF-β1表达呈正相关。免疫组化染色显示,Ⅳ型胶原、FN、LN表达主要分布于肾小球基膜、系膜区和肾小管上皮细胞;与正常对照组比较,模型组Ⅳ型胶原、FN.LN表达明显增多(P0.05);经治疗后,与模型组比较,芪卫颗粒组和缬沙坦组Ⅳ型胶原、FN.LN蛋白表达明显降低(p0.05)。芪卫颗粒组和缬沙坦组组间比较无明显差异(p0.05)。实验三:与正常对照组比较,模型组KK-Ay小鼠肾脏TGF-β1及CTGF、ILK、TDMP-1表达明显增加,同时MMP-9表达明显下降,MMP-9/TIMP-1比例失衡;经治疗后,与模型组比较,芪卫颗粒组和缬沙坦组TGF-β1及CTGF、ILK、TIMP-1蛋白表达明显降低,MMP-9明显增加(p0.05);芪卫颗粒组和缬沙坦组组间比较无明显差异(p0.05)。相关分析显示,TGF-β1与CTGF、ILK、TIMP-1表达呈正线性相关,与MMP-9表达呈负线性相关。结论:1、KK-Ay小鼠在实验过程中出现典型的DN肾脏病理改变和肾功能损害,是研究DN的理想动物模型。芪卫颗粒能减轻DN肾脏病理损害,减少尿蛋白排泄,改善肾功能。2、KK-Ay小鼠DN肾组织PEDF表达下降、USF2表达增加,使TGF-β1过表达,进而导致CTGF.ILK过表达,以及MMP-9/TIMP-1比例失衡,从而引起ECM合成增加、降解减少,ECM积聚渐至肾纤维化。3、芪卫颗粒通过刺激KK-Ay小鼠DN肾脏PEDF表达、抑制USF2表达而下调TGF-β1表达,进而下调CTGF、ILK过表达,纠正MMP-9/TIMP-1失衡,使ECM合成减少、降解增加,从而减轻ECM积聚,阻止或延缓肾纤维化病情进展。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R259

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 南征,孙新宇,赵贤俊,南红梅,赵金祥;益肾解毒汤治疗糖尿病肾病的临床研究[J];北京中医;2002年06期
2 孙建新;郑蛟东;吕芳;;试从三焦论治糖尿病肾病[J];北京中医药;2008年07期
3 仝小林,张志远,李宁,王红;糖尿病肾病的中医治疗[J];中国医药学报;1998年04期
4 华传金,仝小林;糖尿病肾病综合征病因证治初探[J];中国医药学报;2001年04期
5 陈志刚;;瓜蒌瞿麦丸治疗糖尿病肾病蛋白尿的临床观察[J];长春中医药大学学报;2009年01期
6 吴守伦;;中西医结合治疗早期糖尿病肾病158例疗效观察[J];当代医学;2012年02期
7 韩晓芳 ,潘时中 ,杨立勇;血清TGF-β_1水平与糖尿病肾病相关性研究[J];福建医药杂志;2005年02期
8 高继宁;贺娟;张靖;李红;;参芪地黄汤加味治疗早期糖尿病肾病24例[J];光明中医;2010年12期
9 邹大进,李慧;肥胖、炎症与胰岛素抵抗[J];国外医学.内分泌学分册;2004年04期
10 李能娟;李红;;肾小管上皮细胞表型转化与糖尿病肾病[J];国际内分泌代谢杂志;2006年04期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 白然;缬沙坦和氟伐他汀对糖尿病肾病肾脏保护机制的研究[D];大连医科大学;2010年
2 李黎莉;益气养阴活血通络方对糖尿病肾病大鼠足细胞的影响[D];河北医科大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 张炜;黄精多糖对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及机制研究[D];浙江大学;2011年
2 王艳靖;肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾脏NF-κB及MCP-1表达的影响[D];南方医科大学;2011年
3 张雪云;益气养阴化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及对ICAM-1/VCAM-1影响的实验研究[D];河北医科大学;2012年
【共引文献】
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1 高郁森;;CA125、CA199、CEA和AFP检测在卵巢肿瘤诊断中的价值[J];癌变·畸变·突变;2010年04期
2 邓丽丽,张小春,何文芳,雷丽芳,伍施;辨证运用中药结肠透析治疗慢性肾功能衰竭120例报告[J];安徽中医临床杂志;2000年06期
3 孙岚云;中药分期治疗反复发作性紫癜性肾炎疗效比较[J];安徽中医临床杂志;2001年02期
4 胡俊,李时琪;黄芪注射液联合复方丹参注射液治疗糖尿病肾病32例临床观察[J];安徽中医临床杂志;2001年03期
5 梁晓平;慢性肾功能衰竭的中医诊治思路[J];安徽中医临床杂志;2003年03期
6 张桃艳,胡顺金,方琦;曹氏康肾止血方治疗IgA肾病血尿疗效观察[J];安徽中医临床杂志;2003年06期
7 胡顺金,方琦;IgA肾病中医药治疗进展[J];中医药临床杂志;2004年02期
8 尤家平;益肾合剂治疗肾小球性蛋白尿临床研究[J];中医药临床杂志;2005年05期
9 程绍民;喻松仁;熊英琼;;六经辨证、卫气营血辨证、三焦辨证和经络辨证的现代研究概况[J];中医药临床杂志;2006年01期
10 刘荣莉;屠家启;许青;;舒血宁对糖尿病肾病的治疗作用[J];中医药临床杂志;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 宗亚力;尹燕耀;林云华;;中医从“毒邪伏络”论治艾滋病的思考[A];江西省中西医结合学会第九次活血化瘀学术研讨会活血化瘀临床应用新进展培训班论文集[C];2011年
2 张时文;;吴建欣中医药治疗慢性肾炎临证经验[A];江西省中医药学会2011年学术年会论文集[C];2011年
3 东红升;张秋娟;张云云;杨强;郑敏;施茵;;针药结合治疗对DPN大鼠坐骨神经VEGF表达调节作用的实验研究[A];2011中国针灸学会年会论文集(摘要)[C];2011年
4 武楠;;参芪地黄汤合补阳还五汤化裁治疗早期糖尿病肾病疗效观察[A];第四次全国民间传统诊疗技术与验方整理研究学术会论文集[C];2011年
5 钱古柃;黄雷;刘爱民;顾伟忠;傅海东;毛建华;;儿童蚕豆病诱发急性肾功能衰竭一例[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年
6 陈松;杨永刚;;尿液电导率与肾脏远曲小管功能的相关关系分析[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年
7 周必发;陆备军;周雪玲;陈明军;张莹雯;;周巷镇糖尿病患者尿微量白蛋白检测的意义[A];浙江省第十九届农村卫生改革与发展学术会议大会论文集[C];2011年
8 沈毅;;运用络病理论治疗老年人高血压良性肾硬化66例临床观察[A];北京中医药学会络病专业委员会2010学术年会青年论坛暨急性冠脉综合征(ACS)规范化治疗与中西医结合治疗进展培训班学术论文集[C];2010年
9 杨婧华;郭丽娅;牛燕运;李展斌;;论络病学说在糖尿病肾病中的应用[A];北京中医药学会络病专业委员会2010学术年会青年论坛暨急性冠脉综合征(ACS)规范化治疗与中西医结合治疗进展培训班学术论文集[C];2010年
10 李学港;;血液灌流并血液透析救治重度急性药物及毒物中毒的临床研究[A];第二届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2005年
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1 陆晨;乌鲁木齐市天山区成人慢性肾脏病流行病学调查及社区干预模式的建立[D];华中科技大学;2010年
2 王晓源;复方胡黄连胶囊治疗肝损伤的药效学研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
3 黄吉峰;肾白宁对糖尿病肾病大鼠模型CTGF mRNA及肾组织细胞凋亡影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
4 陈敏;参芪复方调控GK大鼠大血管病变炎症状态及血管内皮凋亡的实验研究[D];成都中医药大学;2010年
5 庄灿;参芪复方对GK大鼠大血管病变血管紧张素Ⅱ及其受体影响的实验研究[D];成都中医药大学;2010年
6 胡泉;清热通络复方对糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin和Podocin作用研究[D];成都中医药大学;2010年
7 涂翔;清热通络法对早期糖尿病肾病大鼠蛋白尿的作用及其机制研究[D];成都中医药大学;2010年
8 路晓光;L-FABP/GPx3/TGF-β三种蛋白在2型糖尿病肾病中的作用及中医药干预研究[D];北京中医药大学;2011年
9 曲志成;糖尿病及其早期微血管病变的阴虚血瘀证研究[D];北京中医药大学;2011年
10 韩辉;益气养阴活血法改善糖尿病合并脑缺血大鼠记忆能力及神经再生研究[D];北京中医药大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 袁子育;血清TK1对乳腺癌辅助诊断及术后化疗效果评估的意义[D];南京医科大学;2010年
2 李琳;中药水蛭对糖尿病大鼠早期肾脏病变干预作用的实验研究[D];郑州大学;2010年
3 崔林刚;40例胡桃夹综合征诊治体会[D];郑州大学;2010年
4 刘威;替米沙坦对糖尿病肾病的干预作用及其对Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达的影响[D];郑州大学;2010年
5 明霞;降糖益肾方干预氧化应激反应改善MKR转基因2型糖尿病鼠肾损伤的实验研究[D];湖南中医药大学;2010年
6 王梦华;不同降压方案对血液透析患者高血压的疗效分析[D];中国医科大学;2010年
7 王洋;肾性贫血对血液透析患者生存质量的影响[D];中国医科大学;2010年
8 王凯;应用基准剂量法评价砷接触人群肾功能损害危险性的研究[D];中国医科大学;2010年
9 彭敏;绞股蓝颗粒剂对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax的影响[D];浙江中医药大学;2010年
10 李响;温针灸法治疗糖尿病周围神经病的临床观察[D];黑龙江中医药大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王磊;王宗仁;马静;谢娟;;消糖胶囊对糖尿病性肾病大鼠血浆血管紧张素Ⅱ和醛固酮的影响[J];安徽中医学院学报;2006年02期
2 王永均;治疗慢性肾功能衰竭实践和体会[J];浙江中医学院学报;2003年02期
3 刘小菊;叶玉珠;;补阳还五汤加减治疗早期糖尿病肾病58例[J];浙江中医药大学学报;2009年01期
4 ;糖尿病肾病的中医诊治[J];北京中医;1989年02期
5 梁正宇;苏文弟;闫威;张柏林;;张柏林治疗糖尿病肾病的经验[J];北京中医药;2011年05期
6 刘霆,张桂珍,卜丽莎,牟明威;STZ小剂量多次注射诱导大鼠胰岛素依赖性糖尿病动物模型探讨[J];白求恩医科大学学报;2001年06期
7 熊曼琪,苗理平;加味桃核承气汤对糖尿病鼠肾超微结构的影响[J];中国医药学报;1990年05期
8 荣琳琳,黄海长,喻陆,李惊子;低氧通过p38丝裂素激活蛋白激酶途径刺激人肾间质成纤维细胞表达结缔组织生长因子[J];北京大学学报(医学版);2005年04期
9 邓晓初;尿白蛋白/肌酐比值检测法在早期2型糖尿病肾病中的应用[J];重庆医学;2005年01期
10 徐颖;周世文;汤建林;黄永平;陈莎;;黄连总生物碱对实验性糖尿病肾病大鼠肾功能保护作用的研究[J];重庆医学;2007年06期
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1 常伟;周岐新;杨俊霞;;小檗碱对高胆固醇血症的影响可能涉及肝脏Insig-2基因表达[A];全国生化与分子药理学药物靶点研讨会论文摘要集[C];2008年
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1 赵永山;芪蛭肾消方治疗糖尿病肾病及对血AGEs、Hcy、TXB_2、6-keto-PGF_(1α)水平影响的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2003年
2 覃乔静;糖尿病肾小球足细胞和裂孔膜损害机制及药物干预的实验研究[D];重庆医科大学;2004年
3 封翠芸;糖尿病肾病中医药数据库建立及证治规律初探[D];广州中医药大学;2007年
4 周英;加味真武汤治疗糖尿病肾病的临床与实验研究[D];广州中医药大学;2007年
5 徐颖;黄连总生物碱的提取及其对实验性糖尿病肾病大鼠的保护作用及机制的初步研究[D];第三军医大学;2006年
6 赵雯红;益气养阴消癥通络中药对糖尿病肾病的干预及其对氧化应激和p38MAPK信号转导通路的影响[D];河北医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 褚芹;针刺治疗糖尿病肾病的临床研究[D];山东中医药大学;2003年
2 刘芳;黄连品质评价的研究及其应用[D];四川大学;2005年
3 王树国;葛根素治疗2型糖尿病肾病80例临床研究[D];吉林大学;2007年
4 陈香;火把花根片干预糖尿病肾病进展的临床研究[D];广州中医药大学;2007年
5 周良发;肾衰合剂联合清热解毒灌肠液治疗糖尿病肾病Ⅳ期临床研究[D];湖北中医学院;2007年
6 金丹;黄连解毒汤及黄连素对2型糖尿病大鼠靶组织中磷脂酰肌醇-3激酶mRNA和蛋白表达的影响[D];华中科技大学;2006年
7 吴玉娟;黄连多糖的提取及活性研究[D];西南交通大学;2007年
8 夏云;中西医结合治疗糖尿病肾病的临床研究[D];湖北中医学院;2008年
9 施钰琳;虫草制剂对糖尿病肾病肾小管间质损伤保护作用的临床研究[D];湖北中医学院;2008年
10 柏丽冬;王镁教授辨治糖尿病肾病临床经验[D];辽宁中医药大学;2010年
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1 张世杰;色素上皮源性因子的研究进展[J];国外医学.眼科学分册;2003年04期
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3 季迅达;色素上皮源性因子在眼部的作用研究[J];国外医学.眼科学分册;2003年04期
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5 金姬,关明;色素上皮细胞衍生因子:一种高效的新生血管抑制因子[J];眼科新进展;2002年01期
6 方建晨,邵春奎,苏祖兰;色素上皮源性因子与肿瘤[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2004年03期
7 刘庆淮,谢平;色素上皮衍生因子与视网膜疾病的研究进展[J];中华眼底病杂志;2003年01期
8 张雷,王康孙;色素上皮衍生因子与眼部新生血管性疾病[J];眼科新进展;2004年06期
9 史雪辉,何守志,赵世红;色素上皮衍生因子在大鼠脉络膜新生血管中的表达及意义[J];中华眼科杂志;2004年06期
10 赵晓娟,李彬;色素上皮细胞衍生因子在眼内抗血管生成作用的研究进展[J];国外医学.眼科学分册;2004年03期
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1 宋晗;;葛根素对糖尿病大鼠视网膜PEDF表达的影响[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年
2 曹明芳;刘安;金威尔;;VEGF、bFGF、PEDF在视瞻昏渺发病机理的实验研究中的表达[A];全国第九次中医、中西医结合眼科学术年会论文汇编[C];2010年
3 陈红敏;李竞;洪练;;PEDF对高糖培养下人肾小球系膜细胞JAK2/STAT1信号蛋白的影响[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
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5 黄海齐;兰丽珍;;GLP-1类似物对糖尿病肾病大鼠肾组织PEDF、TGF-β1表达的影响[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
6 高兰;李竞;陈红敏;洪练;;PEDF对高糖诱导人肾系膜细胞P38MAPK/CREB通路及FN的影响[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
7 毛拓华;李竞;李荟芹;;PEDF对高糖诱导的人肾小球系膜细胞TGF-beta1、FN和ColⅣ表达的影响[A];中华医学会第12次全国内科学术会议论文汇编[C];2009年
8 王惠英;;氩离子激光视网膜光凝后糖尿病大鼠眼玻璃体内PEDF表达水平的变化[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
9 郑学栋;徐国兴;;联合共培养系统诱导骨髓间充质干细胞分化为视网膜色素上皮细胞的研究[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年
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1 梁宏亮;骨髓基质干细胞表达PEDF的年龄相关性改变及基因干预对急性心肌梗死治疗的影响[D];第四军医大学;2011年
2 吴英;PEDF蛋白对子痫前期发病影响的研究[D];南方医科大学;2013年
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4 钟立;色素上皮衍生因子与脂代谢及胰岛素抵抗相关性研究[D];重庆医科大学;2011年
5 高云;色素上皮衍生因子基因修饰的间充质干细胞靶向治疗肝癌的实验研究[D];南京医科大学;2010年
6 戴智育;Serpins家族成员PEDF调控脂代谢和KBP抗炎作用和机制研究[D];中山大学;2013年
7 马鸣飞;芪卫颗粒治疗DN临床观察及调节PEDF/USF_2表达对DN肾纤维化的干预机制研究[D];北京中医药大学;2013年
8 宋娜;肩峰下滑囊间充质干细胞多能性的探讨及PEDF蛋白在成骨分化过程中的作用[D];吉林大学;2013年
9 童平;Hox基因在高糖诱导人视网膜色素上皮细胞增殖分化中的作用研究[D];中南大学;2010年
10 戴仪;重组人色素上皮衍生因子的制备及生物学活性研究[D];复旦大学;2010年
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1 张小燕;PEDF基因多态性与渗出性年龄相关性黄斑变性危险性的研究[D];山东大学;2011年
2 明扬;脑胶质瘤的PEDF表达水平与其恶性程度的相关性分析胼胝体切开术治疗儿童难治性癫痫的临床研究[D];泸州医学院;2010年
3 金程;不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞PEDF表达的影响[D];安徽医科大学;2014年
4 孙艳美;PEDF治疗实验性子宫内膜异位症的疗效及机制研究[D];浙江大学;2012年
5 孔程;PEDF在乳腺疾病中的表达及其与乳腺癌超声征象的相关性研究[D];南方医科大学;2013年
6 刘振华;色素上皮衍生因子对缺氧复氧后血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响的实验性研究[D];第四军医大学;2012年
7 陈园静;色素上皮衍生因子与血管内皮生长因子在乳腺浸润性导管癌中的相关性研究[D];福建医科大学;2013年
8 王莉苹;不同类型非小细胞肺癌细胞株中PEDF的表达水平[D];安徽医科大学;2013年
9 夏伟;色素上皮衍生因子与炎症的相关性研究[D];重庆医科大学;2012年
10 张伟;血清血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子与卵巢过度刺激综合征的相关性研究[D];青岛大学;2013年
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