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《北京中医药大学》 2015年
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电针对原发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢保护和改善的效应与机制

王伟明  
【摘要】:[目的]探讨电针对去氧乙烯基环己烯(VCD)致原发性卵巢功能不全(POI)模型大鼠卵巢功能的保护和改善效应,并探讨其可能机制。[方法]1 电针对VCD致POI模型大鼠卵巢功能的保护效应和机制研究选取动情周期规则的32只雌性SD大鼠(10-12周),随机分为空白组、模型组、电针组和捆绑组(8只/组),空白组正常饲喂,模型组、电针组和捆绑组使用VCD(160mg/kg,腹腔注射,连续15d)造模。模型组只进行造模;电针组在造模同时,予以电针中髎和天枢穴15d,并在造模用药结束后继续电针干预15d(隔次交替针刺中髎和天枢穴;中髎穴直刺7~10mm,天枢穴直刺3~5mm,然后接SDZ-V型华佗牌电子针疗仪,调连续波,电针频率为1~3Hz,电流强度0.1~1mA,电针中髎、天枢时以穴位周围肌肉颤动为度),共30d,每次电针时间为20min,前2周5次/周,后2周3次/周;捆绑组在造模同时和造模后进行捆绑干预(共30d,每次捆绑体位、每次捆绑时间、捆绑频次、捆绑总次数均与电针组相同)。期间,观察各组大鼠的存活情况、一般情况、体重变化、动情周期变化,大鼠动情周期紊乱表示卵巢功能不全模型成功,在模型组造模成功后,将四组大鼠麻醉后取材,称重并计算各组大鼠性腺湿重和性腺指数,酶联免疫法检测血清AMH、inhibinB,放射免疫法检测血清FSH、LH、E2、P、T,显微镜下观察卵巢组织形态和卵泡数量,RT-PCR法检测卵巢组织中AMH mRNA相对表达量,Western blotting法检测卵巢组织中AMH蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋白含量。2 电针对VCD致POI模型大鼠卵巢功能的改善效应和机制研究选取动情周期规则的58只雌性SD大鼠(10-12周),分为空白组(8只),模型组、电针组、捆绑组、它莫西芬组和玉米油组(10只/组),空白组正常饲喂,其余各组使用VCD (160mg/kg,腹腔注射,连续15d)造模。造模成功后,各组进行干预治疗1月,电针组予以电针中髎和天枢穴(针刺方式、频次和电针参数同实验一中电针组),捆绑组予以捆绑干预(捆绑方式、频次同实验一中捆绑组),它莫西芬组以枸橼酸它莫西芬干预(1mg/kg体重,皮下注射,前2周每周5次,后2周每周3次),玉米油组以玉米油进行干预(0.3ml/次,皮下注射,前2周每周5次,后2周每周3次),观察大鼠的存活情况、一般情况、体重变化、动情周期变化,在1个月干预结束后,将六组大鼠麻醉后取材,称重并计算各组大鼠性腺湿重和性腺指数,酶联免疫法检测血清AMH、inhibinB,放射免疫法检测血清FSH、LH、E2,显微镜下观察卵巢组织形态和卵泡数量,Western blotting法检测卵巢组织中AMH蛋白表达量,RT-PCR法检测卵巢组织中AMH mRNA、IGF-1和IGF-1R mRNA相对表达量。[结果]1 保护效应及可能机制1.1大鼠存活情况至取材时,空白组、模型组、电针组和捆绑组各组大鼠分别是8只、7只、8只和7只。1.2大鼠一般情况空白组大鼠在整个实验期间一般情况良好(进食饮水正常,活动度好,体毛颜色光亮),模型组、电针组和捆绑组在造模期间一般情况差,造模用药结束后,逐渐转好,电针组大鼠一般情况好于模型组和捆绑组。1.3大鼠体重变化情况空白组大鼠在整个实验期间体重逐周增加,模型组、电针组和捆绑组大鼠在造模期间体重逐周降低,至15d时降至最低,停止注射造模药物后,各组大鼠体重逐渐回升,其中以电针组在电针干预期间增速最快,之后,模型组、电针组和捆绑组大鼠体重增长速度近似于空白组,实验结束时,电针组大鼠体重高于模型组、捆绑组,低于空白组。1.4大鼠动情周期变化空白组大鼠在整个实验期间动情周期正常规律。模型组、电针组和捆绑组大鼠在0~15d VCD造模期间,分别有1只(1/7,14.29%)大鼠、0只(0/8,0%)大鼠、0只(0/7,0%)大鼠出现动情周期的紊乱;在15~30d时,模型组、电针组和捆绑组各组大鼠分别有1只(1/7,14.29%)大鼠、1只(1/8,12.5%)大鼠、2只(2/7,28.57%)大鼠出现动情周期紊乱;至70d时,模型组、电针组、捆绑组全部大鼠动情周期紊乱。1.5大鼠性腺湿重和性腺指数a.卵巢湿重和卵巢指数:经过15d的VCD造模,至初次使用造模药物后70d,模型组大鼠卵巢湿重和卵巢指数低于空白组(左侧:15.43±3.21 vs 52.12±13.80;右侧:16.43±3.60 vs 48.50±8.85;卵巢指数:0.12±0.02 vs 0.35±0.06);电针组卵巢湿重和卵巢指数高于模型组(左侧:29.13±7.20 vs 15.43±3.21;右侧:28.63±6.43 vs 16.43±3.60;卵巢指数:0.20±0.04 vs 0.12±0.02),电针组卵巢指数高于捆绑组(0.20±0.04 vs 0.16(0.02))。b.子宫湿重和子宫指数:经过15d的VCD‘造模,至初次使用造模药物后70d,模型组大鼠子宫湿重低于空白组(535.43±121.38 vs 756.75±142.31);电针组子宫湿重高于模型组、捆绑组(694.38±160.79 vs 535.43±121.38 vs 541.14±85.27);四组间子宫指数未见统计学差异。1.6血清性激素水平经过15d的VCD造模,至初次使用造模药物后70d,电针组大鼠血清AMH高于模型组和捆绑组、低于空白组(6.10±1.43 vs 3.25±1.71 vs 2.96±1.78 vs 12.03±4.29):电针组大鼠血清InhibinB高于模型组和捆绑组、低于空白组(20.09±3.10 vs 14.57±2.46 vs14.06(2.43)vs 29.13±6.73);电针组大鼠血清FSH低于模型组和捆绑组、高于空白组(3.17±0.87 vs 4.98±1.08 vs 4.83±1.05 vs 2.04±0.64):电针组大鼠血清LH低于模型组和捆绑组、高于空白组(7.04±1.62 vs 10.46±1.73 vs9.88±1_38 vs 5.25±1.68):电针组大鼠血清E2高于模型组和捆绑组、低于空白组(19.94±4.64 vs12.44±6.16 vs 13.02±5.24 vs 28.47±6.76);电针组大鼠血清P高于模型组,与捆绑组无差异,低于空白组(2.76±1.23 vs 1.O(0.97) vs 2.06±1.60 vs 6.22±1.43):电针组血清T与模型组、捆绑组无差异,高于空白组(0.108(0.19)vs 0.269±0.171 vs 0.230±0.198 vs 0.066±0.045).1.7卵巢组织形态和卵泡数量与空白组相比,模型组、电针组和捆绑组大鼠卵巢颜色暗红,形态小,呈萎缩状,显微镜下电针组大鼠卵泡损伤程度较模型组、捆绑组轻。电针组大鼠卵巢原始级卵泡数高于模型组和捆绑组、低于空白组(6.50±1.20 vs 4.00±1.41 vs 3.29±1.11 vs 9.50±1.60):电针组大鼠卵巢初级卵泡数高于模型组和捆绑组、低于空白组(5.13±1.89 vs 2.86±1.35vs 4.00±2.45 vs 5.75±1.39):电针组大鼠卵巢窦状卵泡数与模型组、捆绑组无明显差异,低于空白组(2.38±1.30 vs 2.57±1.51 vs 2.14±1.07 vs 6.63±2.50):电针组大鼠卵巢闭锁卵泡数低于模型组和捆绑组、高于空白组(4.75±2.66 vs 8.86±2.41 vs 7.7l±3.04 vs2.63±1.41)。1.8卵巢组织中AMHmRNA相对表达量经过15d的VCD造模,至初次使用造模药物后70d,电针组卵巢组织AMH mRNA相对表达量高于模型组和捆绑组,低于空白组(2以△CT值:0.590±0.021vs 0.383±0.098 vs0.293±0.129 vs 1.073±0.120)。1.9卵巢组织中AMH蛋白、Bax蛋白和Bcl-2蛋白含量经过15d的VCD造模,至初次使用造模药物后70d,电针组卵巢组织AMH蛋白表达量高于模型组,与捆绑组相当,低于空白组(蛋白表达灰度值:0.289±0.26 vs 0.134±0.020 vs 0.219±0.048 vs 0.390±0.066);电针组卵巢组织Bax蛋白相对表达量低于模型组,与捆绑组相当,高于空白组(蛋白表达灰度值:0.271±0.078 vs 0.398±0.025 vs0.299±0.036 vs 0.139±0.011);电针组卵巢组织Bcl-2蛋白相对表达量高于模型组,与捆绑组相当,低于空白组(蛋白表达灰度值:0.264±0.090 vs 0.120±0.022 vs 0.225±0.036vs 0.414±0.087)。2 改善效应及可能机制2.1大鼠存活情况至取材时,空白组、模型组、电针组、捆绑组、它莫西芬组和玉米油组各组大鼠分别是8只、7只、7只、7只、7只和7只。2.2大鼠一般情况空白组大鼠在整个实验期间一般情况良好(进食饮水正常,活动度好,体毛颜色光亮),其余各组在造模期间一般情况差,在等待模型成功期间,逐渐转好,治疗干预期间,电针组大鼠一般情况好于模型组和捆绑组,与它莫西芬组相当。2.3大鼠体重变化情况空白组大鼠在整个实验期间体重逐周增加,其余各组大鼠在造模期间体重逐周降低,至15d时降至最低,停止注射造模药物后,各组大鼠体重逐渐回升,各组大鼠体重增加速率大致一致,至取材时,电针组和它莫西芬组大鼠体重略高于模型组、捆绑组和玉米油组,低于空白组。2.4大鼠动情周期变化空白组大鼠在整个实验期间动情周期正常规律。模型组、电针组、捆绑组、它莫西芬组和玉米油组大鼠在0-15d VCD造模期间,分别有1只(1/7,14.29%)大鼠、0只(0/7,0%)大鼠、0只(0/7,0%)、1只(4/7,57.14%)大鼠、1只(1/7,14.29%)大鼠出现动情周期的紊乱,至70d时,所有造模大鼠均动情周期紊乱;在70~98d治疗干预期间,空白组大鼠动情周期规律,除电针组有1只大鼠出现了正常动情周期(2个周期),剩余大鼠及模型组、捆绑组、它莫西芬组、玉米油组所有大鼠均动情周期紊乱。2.5大鼠性腺湿重和性腺指数a.卵巢湿重和卵巢指数:经过1个月的治疗干预,电针组卵巢湿重和卵巢指数与模型组间无差异(左侧:16.71±5.31 vs 14.86±4.06;右侧:18.71±5.31 vs 17.00±6.16;卵巢指数:0.126±0.042 vs 0.118±0.039),电针组卵巢湿重和卵巢指数与捆绑组、它莫西芬组间无差异(左侧:16.71±5.31 vs 13.43±8.01 vs 20.00±6.08;右侧:18.71±5.31 vs15.00±6.56 vs 21.86±12.71;卵巢指数:O.126±0.042 vs 0.103±0.047 vs 0.147±0.055).b.子宫湿重和子宫指数:经过1个月的治疗干预,电针组子宫湿重和子宫指数与模型组间无差异(子宫湿重:605.71±121.60 vs 541.00±122.72;子宫指数:2.26±0.36vs1.99±0.51;电针组子宫湿重和子宫指数与捆绑组、它莫西芬组间无差异(子宫湿重:605.71±121.60 vs 611.00±78.39 vs 583.86±123.86;子宫指数:2.25(0.13)vs 2.26±0.36vs 2.05±0.46)。2.6血清性激素水平经过1个月的治疗干预,电针组大鼠血清AMH高于模型组和捆绑组、与它莫西芬组相当,低于空白组(8.63±2.87 vs 2.73±1.34 vs 2.57±0.86 vs 9.40±3.29 vs 12.23± 3.96):电针组大鼠血清InhibinB高于模型组和捆绑组、与它莫西芬组相当,低于空白组(19.75±3.31 vs 13.29±3.6 vs 12.78±2.23 vs 20.09±2.72 vs 24.45±6.80);电针组大鼠血清FSH低于模型组和捆绑组、与它莫西芬组相当,高于空白组(4.30(0.72)vs 46.08±0.74 vs 5.92±0.72 vs 4.18±0.94 vs 2.77±1.16);电针组大鼠血清LH低于模型组和捆绑组、与它莫西芬组相当,高于空白组(7.29±1.62 vs 12.50±1.09 vs 13.34±1.42 vs 7.33±1.48 vs 5.39(1.34));电针组大鼠血清E2高于模型组和捆绑组、与它莫西芬组相当,低于空白组(17.83±4.71 vs 10.93±4.71 vs 9.74±3.66 vs 18.36±5.42 vs 26.02±2.72)。2.7卵巢组织形态和卵泡数量:与空白组相比,模型组、电针组、捆绑组、它莫西芬组和玉米油组大鼠卵巢颜色暗红,形态小,呈萎缩状,显微镜下电针组大鼠卵泡损伤程度较模型组、捆绑组轻,与它莫西芬组相当。电针组大鼠卵巢原始卵泡数与模型组、捆绑组和它莫西芬组间没有差异,低于空白组(2.29±0.76 vs 1.86±0.69 vs 1.0(1.0) vs 2.14±1.21 vs 8.88±2.10);电针组大鼠卵巢初级卵泡数与模型组、捆绑组和它莫西芬组间没有差异,低于空白组(3.86±1.35 vs 2.86±1.07 vs 2.7l±1.25 vs 3.14±1.21 vs 5.63±1.41);电针组大鼠卵巢窦状卵泡数与模型组、捆绑组、它莫西芬组和空白组间没有差异(2.43±1.40 vs 2.57±1.27 vs 2.14±0.90 vs 2.0(2.0) vs 2.50±1.19);电针组大鼠卵巢闭锁卵泡数低于模型组和捆绑组、与它莫西芬相当,高于空白组(7.14±2.41 vs 10.14±1.68 vs 9.71±2.29 vs 6.57±1.72 vs 3.63±1.41)。2.8卵巢组织中AMH蛋白含量:经过1个月的干预,电针组大鼠卵巢组织AMH蛋白含量高于模型组、捆绑组,与它莫西芬组相当,低于空白组(蛋白表达灰度值:0-304±0.059 vs 0.119±0.039 vs 0.140 ±0.073 vs 0.328±0.050 vs 0.432±0.0571).2.9卵巢组织中AMH、IGF-1和IGF-1R mRNA相对表达量:经过1个月的干预,电针组大鼠卵巢组织AMH mRNA相对表达量高于模型组、捆绑组,与它莫西芬组相当,低于空白组(2-△△CT值:0.69±0.59 vs 0.13±0.02 vs 0.15±0.08 vs 0.71±0.31 vs 1.26±0.21);电针组大鼠卵巢组织IGF-1相对表达量与模型组、捆绑组、它莫西芬组和空白组间无差异(2-△△CT值:1.38±0.64 vs 1.96±0.52 vs 1.40±0.16 vs 1.10 ±0.20 vs 0.95±0.08):电针组大鼠卵巢组织IGF-1R mRNA相对表达量低于模型组、捆绑组,与它莫西芬组、空白组相当(2-△△CT值:0.78±0.13 vs 1.86±0.30 vs 1.02±0.11 vs 0.80±0.20 vs 0.73±0.25).[结论]1 电针对VCD致POI模型大鼠的卵巢功能有一定的保护作用和改善作用。2 电针对卵巢功能的保护作用和改善作用是电针自身效应,而非电针过程中由捆绑产生的应激效应。3 电针对卵巢功能的保护作用可能是通过上调卵巢颗粒细胞抑制凋亡因子Blc-2蛋白的表达,下调促凋亡因子Bax蛋白的表达来实现。4 电针对卵巢功能的改善作用可能是通过下调卵巢组织中IGF-1R mRNA的表达,进而影响IGF-1/IGF-1R轴来实现。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R245

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