收藏本站
《北京中医药大学》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

开心散含药血清对Aβ诱导神经细胞损伤的作用研究

张景泉  
【摘要】:研究背景:阿尔茨海默症是一种神经退行性病变,主要病理表现为神经元细胞外淀粉样斑块沉积、神经元细胞内Tau蛋白高度磷酸化的神经纤维缠结以及神经细胞和突触数量减少。致病原因尚不明确,但Aβ假说被广泛认同,即Aβ的胞外聚集为阿尔茨海默症的主要发病原因。随着该假说的不断发展,现认为Aβ寡聚体最具毒性也是致病的最基本原因,Aβ在阿尔茨海默症患者脑中聚集,形成老年斑。在细胞水平上来说是Aβ于胞外沉积,使细胞内离子紊乱,环境稳态失衡,导致细胞凋亡。细胞凋亡的途径包括线粒体功能发生障碍,线粒体膜电位降低,膜通透性增强,导致活性氧释放增多,与细胞凋亡相关的蛋白表达有所变化,促凋亡蛋白表达上调,抗凋亡蛋白表达下调。提示Aβ损伤细胞可能通过损伤线粒体功能进而造成细胞凋亡。Aβ寡聚体由APP蛋白裂解而成,常见寡聚体有AβI-40及Aβ1-42,本实验采用Aβ25-35片段,Aβ25-35片段为Aβ1_42有效片段,且具备细胞毒性。开心散始见与唐代孙思邈《备急千金要方》,经近代药理研究,是治疗抑郁症等疾病的基础药物。开心散的药物组成人参、远志、石菖蒲及茯苓亦是治疗阿尔茨海默症的高频药物,进而提示开心散可以作为治疗阿尔茨海默症药物进行研究。中医认为,阿尔茨海默病的病因病机为“肾虚髓亏为本,痰瘀阻滞为标”,五脏失调,脑髓失用。传统的中药药理体外研究采用直接给药方法,但由于中药及中药复方成分复杂,以及直接给药法难以模拟体内真实环境,故提出血清药理学方法,即将中药或中药复方给动物灌服,取动物血清作为药物源进行体外实验。血清药理学方法弥补了直接给药法的不足,为中药药理的体外研究提供了新的思路。基于以上研究背景,现探讨开心散含药血清是否对Aβ25-35造成的神经细胞损伤有保护作用,且初步探讨其保护作用机制,即是否通过保护线粒体功能而发挥作用。目的:本实验通过Aβ25_35损伤人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y作为研究模型,采用血清药理方法探讨开心散是否具有神经保护作用,并初步探讨可能的机制。方法:大鼠随机分为四组,分别连续灌服开心散药粉三个剂量(0.58g/Kg,1.16g/Kg,2.32g/Kg)及等量蒸馏水,连续7天,灌药量10mL/kg,每天2次。于第8日给药后1h经腹主动脉取血,静置离心,制备血清,灭活,以开心散含药血清为药物源进行实验。高效液相色谱-质谱联合检测含药血清中药物有效成分情况;SH-SY5Y细胞预先用空白鼠血清及含药鼠血清培养细胞2h,给予10μmol/LAβ25-35处理24h,然后按各实验操作进行指标检测。为探讨开心散对神经细胞的保护作用及可能的机制,采用MTT比色法检测细胞活力;Annexin V-PI染色,激光共聚焦显微镜拍照,流式细胞仪检测凋亡率检测细胞凋亡情况;激光共聚焦显微镜拍照,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化;荧光倒置显微镜拍照,流式细胞仪检测细胞内活性氧水平;Western Blot检测Bcl-2、BAX、Caspase-3、Akt1/2/3 及p-Akt 蛋白表达水平;结论:Aβ25_35可通过损伤线粒体来启动细胞凋亡,最终导致神经细胞损伤。开心散可以针对线粒体,维持其内稳态,对抗细胞凋亡,从而对Aβ25-35造成的细胞损伤起到保护作用。结果:经高效液相色谱-质谱联用技术对开心散含药血清的检测中,经一级质谱图推测开心散含药血清中包括 sibiricose A5, sibiricose A6, tenuifoliside B, tenuifoliside C,tenuifolisideD,β-细辛醚,人参皂苷Rb1,人参皂苷Rh1,茯苓新酸B,茯苓新酸DM,茯苓新酸D等十种有效成分。通过实验条件筛选,Aβ25_35损伤浓度为10μmol/L,细胞培养液构成为RPMI1640培养液、10%鼠血清及1%青霉素-链霉素混合溶液。且空白鼠血清及含药鼠血清对细胞没有损伤作用。MTT比色法探讨开心散含药血清对Aβ25-35所致SH-SY5Y细胞活力影响,结果显示,Aβ25_35可显著降低细胞活力,而开心散可有效对抗损伤。细胞凋亡检测结果表示,Aβ25_35可提高SH-SY5Y细胞凋亡率,开心散可显著降低凋亡率,抑制凋亡。活性氧检测结果显示,Aβ25-35处理后,细胞内活性氧处于高表达水平,开心散可降低细胞内活性氧水平。线粒体膜电位检测中,Aβ25-35可损伤线粒体功能,造成线粒体膜电位下降,开心散可使细胞膜电位维持相对正常的水平。Western Blot检测 Bcl-2、BAX、Caspase-3、Akt1/2/3 及 p-Akt 蛋白表达情况,Aβ25-35 可下调 SH-SY5Y细胞Bcl-2蛋白表达,p-Akt蛋白表达比率下降,上调BAX及Caspase-3蛋白表达,而开心散则可以通过增加p-Akt蛋白表达比率,上调Bcl-2蛋白表达,下调BAX及Caspase-3蛋白表达来抑制凋亡,保护细胞。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R285.5

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王建霞,黄永富,张清泉;细胞凋亡与疾病关系[J];交通医学;2000年06期
2 王东生,袁肇凯,郭志华;细胞凋亡与中医药[J];中国中医药信息杂志;2000年12期
3 万晓艳,于苏国,郭玉芹,何庆;细胞凋亡与自身免疫性甲状腺疾病的研究进展[J];中国地方病防治杂志;2002年06期
4 祝伟民,林建棣,马晓东,段小平;运动与细胞凋亡[J];中国临床康复;2004年27期
5 王会玲,景文莉,张小红,高维娟;细胞凋亡与心肌缺血-再灌注损伤[J];承德医学院学报;2005年04期
6 梁薇;细胞凋亡的中药调节机制[J];四川中医;2005年11期
7 张松彪;细胞凋亡与细胞养生[J];中国科技产业;2005年01期
8 杨竹林,伍汉文;细胞凋亡调控因素有关基因的研究[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);1997年02期
9 刘恩梅,杨锡强;细胞凋亡及其影响因素[J];重庆医学;1998年01期
10 ;美开发调控细胞凋亡药物[J];中国肿瘤;1999年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈颖丽;李前忠;;不同亚细胞位置的细胞凋亡蛋白质的结构特性分析[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
2 孙英丽;赵允;朱山;翟中和;;植物细胞凋亡及其机理的研究[A];中国细胞生物学学会第七次会议论文摘要汇编[C];1999年
3 刘二龙;袁慧;;锌与细胞凋亡[A];2003全国家畜内科学学术研讨会论文专辑[C];2003年
4 邱洁;高海青;;锌在细胞凋亡中的作用研究进展[A];山东省微量元素科学研究会第三届学术研讨会论文汇编[C];2006年
5 俞雅萍;;细胞凋亡的机制及途径和影响因素[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
6 于青;袁伟杰;姚建;;晚期糖基化终末产物引起足细胞凋亡的机制[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年
7 季宇彬;尹立;汲晨锋;;调控细胞凋亡的线粒体因素[A];肿瘤病因学研究与中西医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集[C];2009年
8 吴经纬;汤长发;;运动中细胞凋亡的线粒体变化特征[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年
9 蒲小平;李长龄;屠鹏飞;宋志宏;;中药肉丛蓉成分抗神经细胞凋亡的实验研究[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年
10 江键;宋诚荣;崔黎丽;方影;王小平;;静电场对细胞凋亡作用的初步探讨[A];中国物理学会第九届静电学术年会论文集[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 商东;“细胞凋亡”与临床医学[N];中国医药报;2001年
2 张志军;细胞凋亡与中医药[N];中国医药报;2002年
3 ;“细胞凋亡疗法”正逐步成为治疗癌症的新途径[N];中国高新技术产业导报;2002年
4 记者张建松;治疗癌症新途径:细胞凋亡疗法[N];科技日报;2002年
5 李明辉;“细胞凋亡”治癌症[N];医药导报;2002年
6 洪敏;细胞凋亡研究引人关注[N];中国医药报;2008年
7 陶春祥;细胞凋亡对心脏疾病的影响[N];中国医药报;2003年
8 本报实习记者 梁媛媛;薛定:发现癌症“开关”[N];北京科技报;2010年
9 高书明;诱导癌细胞凋亡[N];中国医药报;2004年
10 勇汇;中药诱导癌细胞凋亡研究进展[N];中国医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨利;系列多氮类化合物的抗肿瘤活性研究[D];武汉大学;2012年
2 张浩;从分子、细胞和动物水平研究铅诱发氧化损伤及细胞凋亡的效应与机理[D];山东大学;2015年
3 何欣怡;家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)抑制家蚕BmN细胞凋亡的功能研究[D];浙江大学;2015年
4 冯全服;从线粒体途径研究川芎嗪诱导HepG2细胞凋亡效应机制[D];南京中医药大学;2015年
5 张晓倩;高糖诱导Bim蛋白高表达而促肾近曲小管上皮细胞凋亡的机制探讨[D];山东大学;2015年
6 孙健玮;PTEN基因负调控Raf1磷酸化的作用及其对PC3细胞凋亡的影响[D];昆明医科大学;2014年
7 徐林艳;肿瘤细胞凋亡过程中TNFRSF10B和CFLAR调控机制研究[D];山东大学;2015年
8 樊庆端;生物调控网络的建模与动力学行为研究[D];上海大学;2015年
9 王德选;WNK_3对钠氯协调转运子的调节及在胚肾细胞凋亡中的保护作用[D];南方医科大学;2015年
10 叶嘉;Nogo-B在急性肺损伤肺泡上皮细胞凋亡中的作用[D];第二军医大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张景泉;开心散含药血清对Aβ诱导神经细胞损伤的作用研究[D];北京中医药大学;2017年
2 曹璐璐;2,2’,4,4’-四溴联苯醚(BDE-47)对人胚肾细胞(HEK293)的毒理效应及作用机制研究[D];中国科学院烟台海岸带研究所;2015年
3 张薇;蒜头果蛋白诱导HepG-2细胞凋亡的研究[D];云南民族大学;2015年
4 唐建国;视黄醇X受体出核抑制对神经元细胞凋亡的影响[D];福建医科大学;2015年
5 安璐;3-氯-1,2-丙二醇细胞毒性及其诱导HEK293细胞凋亡途径探究[D];江南大学;2015年
6 杨翔;Procaspase-8的异常表达抑制TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡[D];昆明理工大学;2015年
7 张昌明;I3C通过调控p53泛素化对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响[D];延边大学;2015年
8 彭涵;共轭亚油酸对仔猪脂肪细胞凋亡的影响[D];西南大学;2015年
9 李立辉;ΔFosB通过MMP-9调控山羊乳腺上皮细胞凋亡的分子机制[D];西北农林科技大学;2015年
10 杨鑫铖;Hedgehog信号通路在大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡中的作用[D];河北医科大学;2015年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026