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《北京中医药大学》 2018年
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清痤方物质基础及干预痤疮模型鼠的作用机制研究

李思琪  
【摘要】:目的1.观察中药清痤方对金黄地鼠痤疮模型干预前后,其皮脂腺斑面积变化、组织形态改变、血清炎性因子以及性激素的水平,明确清痤方改善痤疮模型的药效结果以及作用机制。2.通过UPLC-LTQ Orbitrap MS技术结合中药血清药物化学理论,建立清痤方化学成分及入血成分指纹图谱,检测分析中药清痤方的化学成分以及入血成分。3.将清痤方干预痤疮模型鼠的药效结果与检测出的清痤方的化学成分以及入血成分相关联,建立清痤方的“谱-效”关系,从而确定清痤方治疗痤疮的作用机制以及其发挥药效的物质基础。方法选择60只雄性金黄地鼠,以其背部的皮脂腺斑为湿热体质痤疮模型。选择螺内酯为阳性对照药,将金黄地鼠随机分为5组:空白对照组、清痤方小剂量组、清痤方中剂量组、清痤方高剂量组、阳性对照螺内酯组。各给药组金黄地鼠灌胃给药30天后,眼眶取血,用酶免检测法(ELISA)检测血清中睾酮(T)、雌二醇(E2)、双氢睾酮(DHT)、白细胞介素1α(IL-1α)、游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,并对皮脂腺斑的面积变化以及组织形态学改变进行观察。应用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱结合高分辨质谱法(UPLC-LTQ Orbitrap MS)和中药血清药物化学理论,对中药样品、空白血浆及含药血浆进行对比分析,结合Xcalibur2.2和HighChem Mass frontier 7.0软件,对相关化合物进行相应的特征碎片及结构的分析,并根据碎片裂解信息推测并鉴定清痤方的化学成分以及血浆中的活性成分。结果1.清痤方大、中、小剂量组以及阳性对照螺内酯组的金黄地鼠皮脂腺斑面积均较对照组小,且皮脂腺分布松散,腺叶缩小,其中高剂量组皮脂腺斑面积减小最为明显(P0.05)。2.与空白组相比,小、中剂量组和螺内酯组血清中T、E2、DHT水平均下降,其中小剂量组和螺内酯组T、DHT水平下降更显著(P0.05)。小、中剂量组和螺内酯组IL-1α、TNF-α水平均较空白组降低,小剂量组、螺内酯组IL-1α水平与空白组相比有显著差异(P0.05)。螺内酯组和小剂量组FFA水平较对照组下降,差异显著(P0.05)。3.建立了清痤方体外化学成分数据库,检测鉴定出中药清痤方体外化学成分75种;血中移行成分26种,其中16个原型成分,10个代谢产物。在此基础上对其药理作用进行分析,发现清痤方中检测出的多种成分具有抗菌、抗炎以及抑制雄激素等作用。结论1.中药清痤方对金黄地鼠皮脂腺组织结构改变较明显,可以显著抑制皮脂腺细胞的增生,减少皮脂的过度分泌,使皮脂腺斑颜色变淡且面积明显变小。提示中药清痤方可通过改善亢进的皮脂腺组织的功能,减少皮脂腺过多分泌皮脂,达到对痤疮的治疗作用。2.清痤方可降低金黄地鼠血清中炎症细胞因子IL-1α和TNF-α水平,提示清痤方的抗炎效果可能与抑制免疫炎症反应有关,说明清痤方具有一定的抗炎作用;清痤方亦可以降低血清中雄激素T、DHT以及FFA水平,说明清痤方可以通过调节体内激素这一作用机制,来减少因雄性激素分泌旺盛而导致的痤疮,并且小剂量组效果最佳,这也符合中医体质调理的目标。3.通过对清痤方所含化学成分以及入血成分的分析,鉴定出多种抗菌、抗炎以及抑制雄激素等作用的化学成分,为清痤方治疗湿热体质痤疮提供了药效物质基础的依据,并为进一步探讨清痤方的作用机制以及药效基础的提供参考。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R285.5;R-332

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【参考文献】
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