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《北京中医药大学》 2002年
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丹栀逍遥散对D—半乳糖复制拟老年性痴呆模型的影响

蔡大勇  
【摘要】: 老年性痴呆(Alzheimer's Disease,AD)发病率高、危害大、病因不清、诊治困难,迄今无理想的治疗手段和药物,深入研究AD的发病学和治疗学,特别是中英治疗,已成为医学工作者关注的领域。本研究采用D-半乳糖(D-galactose,D-gal)建立拟AD动物模型和细胞损伤模型,以安理申为对照药,观察从肝论治的中药方剂丹栀逍遥散(DZXYS)对该模型动物的防治作用及其机理,为临床应用提供科学依据。 整体实验旨在探讨DZXYS防治D-gal致拟AD模型动物的作用和机制。大鼠皮下注射D-gal,150.0mg/(Kg·d)×49d造模,以0.54mg/(Kg·d)安理申为阳性对照药物,用12.636g/(Kg·d)的DZXYS同步灌胃给药防治模型损伤。每周观察体重,于第42天到第46天进行水迷宫实验和跳台实验观察智力状态,第49天处死大鼠取脑组织,用紫外分光光度法测定蛋白含量、RNA含量、DNA含量、SOD活性、MDA含量、Ach含量、AchE活性,用液相色谱法测定能荷和单胺类递质及其代谢产物的含量,HE染色、Bax/Bc1-2免疫组化染色光镜观察组织变化,铅铀染色透射电镜观察超微病变,RT-PCR检测糖醛还原酶信使RNA(AR-mRNA)含量。结果表明: ①DZXYS使造模大鼠的活动减少、反应性降低、饮食减量、毛鬃卷曲、体重减轻等状态好转,且无安理申胆碱能神经亢奋的副作用。 ②在水迷宫实验和跳台实验中,DZXYS使造模大鼠主动和被动的学习和记忆能力回升。 ③DZXYS使造模大鼠大脑的总DNA含量从1.093±0.267回升到1.488±0.341(P<0.01)。 ④DZXYS使造模大鼠大脑SOD活性从352.670±37.711回升到380.728±14.845(P<0.05)、MDA含量从7.878±0.696回降到6.636±0.800(P<0.01)。 ⑤DZXYS使造模大鼠大脑的去甲肾上腺素从207.171±47.261回升到244.185±37.172(P<0.05)、5-羟色胺从924.670±543.509回升到1199.770±494.871(P<0.01)、5-羟色胺构成比从0.693±0.118回升到0.782±0.060(P<0.01)、乙酰胆碱从0.677±0.123回升到0.969±0.210(P<0.05),使乙酰胆碱酯酶活性从157.998±24.325回降到120.869±44.732(P<0.05)。 ⑥光镜下,DZXYS使造模大鼠大脑的神经细胞变性死亡、胶质细胞增生、血管壁扭曲增厚等病变减轻。电镜下,DZXYS使造模大鼠神经细胞突起内的病变明显好转,脑血管内皮损伤减轻、基底膜完整、胶质细胞足突规则。 ⑦DZXYS使造模大鼠脑组织和肝细胞的Bax蛋白表达减少、Bc1-2蛋白表达增加,接近正常水平。 ⑧DZXYS使造模大鼠大脑AR-mRNA含量从0.732±0.159升高到1.418±0.277(P<0.01)。 表明DZXYS通过减轻自由基损害、稳定基因表达、促进损伤修复、维持递质平衡,而改善模型动物的智力低下和衰老状态。 离体实验旨在深入研究DZXYS防治D-gal致原代培养神经元损伤的作用机制。在原代培养第6天,以50mM D-gal作用神经元72h造成自由基损伤模型,用10%DZXYS药物血清防治损伤。倒置显微镜下观察神经元的生长发育形态,MTT -2-丹桅逍遥敞对卜半乳糖复制拟老年性痴呆模型的影响 法在酶标仪上检测神经元代谢率,PI染色在流式细胞仪上检测神经元凋亡率,HE 染色观察神经元形态、形态计量神经突起密度,RT斗CR检测糖醛还原酶信使RNA (AR-mRNA y量。以安理申血清为阳性对照药,比较正常对照组、造模组和 DZXYS (高、中、低剂量)治疗组之间的差别。结果表明: ①受 D-gal攻击的神经元代谢率从 0.762 t 0.030降低至 0.543 t 0.064(尸 <0.01),高、中、低剂量DZXYS 防治使其分另回升至0.684 t 0.072、0.623 士0.069、0.747士0.031(尸<0.叮); ②凋亡率从0.060 t 0.029增高到0.356 t 0.215(尸<0.01),高、中、低剂 量 DZXYS防治使其分别回降到 0.17 3 t 0.15 4、0.17 4 t 0.15 8、0.171t 0.16 4(尸 <0.01)。 ③受D唱al攻击的神经元出现变性坏死,DZXYS防治使其好转。 ④神经突起密度从0.557 t 0.MZ降低到k 468 t 0.033(P<0.M),高、中、 低齐量DZXYS防治使其分另回井至0.刀4 t 0.027、0.509 t 0.025、0.576 t 0.040(HO.01)。 ⑤无胶质细胞混杂的原代培养神经元中无AR-mRNA表达。 表明DZXYS通过调整代谢、恢复功能、维持结构而防治原代培养神经元损 伤。高、中、低剂量DZXYS治疗组中,低剂量组疗效最好。 上述动物实验和细胞实验资料说明,Deal通过产生自由基损害和破坏轴浆 运输等机制引起神经元结构损伤和功能障碍,D唱al通过干扰代谢状态、紊乱递 质平衡等机制导致动物加速老化过程和出现智力低下,这些均符合AD模型的基 本特征。上述实验资料也说明,DZXYS通过减轻自由基损害和提高适应能力等 机制产生祛邪扶正的防治作用,DZXYS通过促进轴浆运输和维持递质平衡等机 制发挥疏肝理气的防治功效,这些既为 DZXYS临床应用提供了实验资料,也为 “从肝论治AD”找到了病理生理学依据。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R285.5

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10 王荣田;益脑灵对老年性痴呆模型大鼠行为学、酶学及细胞凋亡影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2006年
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